程兆康 作品数:12 被引量:41 H指数:4 供职机构: 南开大学生命科学学院生物活性材料教育部重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 天津市科技发展战略研究计划项目 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导STAT3-shRNA对前列腺癌生长的抑制作用 被引量:2 2007年 目的探讨第5代阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(G5-PAMAM-D)作为小发卡RNA (shRNA)真核表达质粒的载体,进行前列腺癌RNA干扰基因治疗的可行性。方法根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)cDNA序列结构,分别设计构建表达EGFP mRNA、STAT3 mRNA的特异shRNA真核表达质粒pSilencing 4.1-EGFP-shRNA和pSilencing 4.1- STAT3-shRNA。在体外以G5-PAMAM-D为载体,将质粒pEGFP-C1和pSilencing 4.1-EGFP-shRNA共转染前列腺癌细胞PC-3、22Rvl,通过观察EGFP表达检测干扰效果以及转染效率;然后,以同样的方式将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA转入前列腺癌细胞系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞生长的抑制作用,丫啶橙染色观察细胞凋亡。制作前列腺癌小鼠模型,将G5-PAMAM-D与质粒pSilencing 4.1-STAT3-shRNA的混合物注射人荷瘤鼠肿瘤内,观察对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明,G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1.EGFP-shRNA转入前列腺癌细胞,明显沉默EGFP的表达,并且G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA有效转入前列腺癌细胞中,明显抑制肿瘤细胞的生长,增加细胞的凋亡。体内实验证明,G5-PAMAM-D/pSilencing 4.1-STAT3-shRNA可抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长,而各对照组肿瘤生长无明显抑制。结论G5-PAMAM-D作为基因载体,可将shRNA的真核表达质粒在体内外转入前列腺癌组织细胞,并有效表达shRNA;G5-PAMAM-D可能成为应用前景广阔的小干扰RNA(siRNA)的载体。 赵维明 修有成 徐勇 王燕铭 程兆康 于琦 孔德领关键词:前列腺肿瘤 RNA干扰 纳米基因载体 STAT3 干细胞在心肌梗死治疗中的应用 被引量:5 2006年 近年来,干细胞的研究进展,给心肌梗死的治疗带来了新的希望,干细胞移植也成为了当前研究的热点问题。骨髓干细胞、胚胎干细胞、骨骼肌成肌细胞等已被应用于心肌的再生。研究表明,干细胞移植能有效地改善梗死心肌的功能,但其作用机制尚不完全明了。本研究对干细胞移植治疗心肌梗死研究中取得的成就、有待解决的问题以及临床应用前景作了一个总的评述。 欧来良 付晓玲 程兆康 孔德领关键词:干细胞 心肌梗死 白介素刺激骨髓间充质干细胞提高CXCX4表达和增强细胞归巢 <正>目的骨髓间充质干细胞是一种具有自我复制和多向分化潜能的细胞,可感知靶器官的损害,自发迁移到损害区域并分化、增殖,促进受损器官结构和功能的恢复。有研究发现,心肌梗塞的发生后,梗塞部位的心肌高表达基质细胞衍生因子-1(... 贾晓花 程兆康 刘义 欧来良 孔德领文献传递 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死后心室重构与心脏功能的影响 被引量:1 2009年 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)能够将骨髓干细胞动员到缺血组织参与组织修复,因而具有治疗心肌梗死的潜力.但是目前国际上对该疗法的效果尚存在争议.为了研究心肌梗死急性期内注射G-CSF对心肌纤维化及心脏功能的影响,将SD大鼠冠状动脉左前降支结扎3h后,皮下注射G-CSF(50μg/kg/d,共5d)或等量生理盐水.结果显示G-CSF注射5d后,外周血白细胞数量显著增加.3个月后,G-CSF注射显著增加了梗死范围和左心室胶原含量,损害了心脏功能.由以上可见,心肌梗死急性期内给予G-CSF治疗促进了心肌组织纤维化,并导致了心室扩张和心脏功能恶化. 程兆康 欧来良 刘晓蕾 车永哲 李飞 贾晓花 刘义 俞耀庭 孔德领关键词:粒细胞集落刺激因子 心肌梗死 心室重构 左心室功能 CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验 被引量:9 2009年 构建一种高表达基质细胞衍生因子受体(CXCR4)的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),考察CXCR4对细胞定向迁移能力的影响。实验构建了pMSCV-CXCR4-IRES-GFP基因质粒,并通过逆转录病毒将其转入预先培养的MSCs中。分别采用流式细胞分析仪、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色法检测CXCR4在MSCs中的表达,并利用Transwell方法检测基质细胞衍生因子(SDF-1)对MSCs体外定向迁移的影响。流式细胞仪分析显示,转基因MSCs表面CXCR4的阳性率为46%,绿色荧光蛋白(GFP)阳性率为57%。RT-PCR进一步证实了CXCR4的表达。细胞迁移实验结果表明,CXCR4基因修饰促进了MSCs向SDF-1的定向迁移,当SDF-1浓度为50 ng/ml时,这种定向迁移能力较之对照组提高了近5倍。通过以上结果可以初步证实,MSCs表面CXCR4表达量在SDF-1/CXCR4介导的细胞迁移通路中发挥着重要作用,这为进一步研究MSCs的体内迁移和归巢提供了依据。 张悦 欧来良 程兆康 贾小花 高年发 孔德领关键词:间充质干细胞 基质细胞衍生因子-1 超声心动图评估直接心肌注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死的治疗效果 被引量:1 2007年 由于心肌细胞属不可再生细胞,梗死心肌局部只能通过纤维瘢痕组织取代,这种心肌重构是造成患者心力衰竭及死亡的主要原因之一。近年来国内外实验及初期临床研究证明将骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)植入梗死心肌后,MSC可在病变区分化增殖成血管内皮细胞及有功能的心肌细胞,有效改善了梗死周边的血供及瘢痕形成所致的心室重构, 李飞 欧来良 程兆康 孔德领 董青华 苏玲关键词:骨髓间充质干细胞 超声心动图 心肌注射 血管内皮细胞 心肌细胞 新型基因载体G5-PAMAM-D在前列腺癌HSV-tk/GCV自杀基因系统中的应用 被引量:4 2007年 背景与目的:考察纳米级阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(polyam idoam ine dendrimers,PAMAM-D)作为基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:以第5代PAMAM-D(G5-PAMAM-D)为载体将含增强型荧光蛋白(EGFP)基因片段的重组质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,成功表达EGFP后,再以G5-PAMAM-D为载体将含HSV-tk自杀基因的真核表达重组质粒pcDNA3-tk转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,转染48h后,对转染的两种细胞给予浓度为0、10、100、1000、10000μmol/L前体药更昔洛韦(Ganciclovir,GCV),24h后采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响。制作前列腺癌皮下荷瘤小鼠,将G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物瘤内注射,24h后腹腔注射GCV,观察这一复合物体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:荧光观察及FCM结果证明G5-PAMAM-D可将pEGFP-C1转入两种前列腺癌细胞并表达EGFP。采用G5-PAMAM-D将pcDNA3-tk重组质粒转染PC-3和22Rv1细胞,给不同浓度的前体药GCV后,实验组细胞与对照组相比有明显浓度依赖性生长抑制。荷瘤小鼠在给予瘤内注射G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物后,行腹腔注射GCV,治疗后第40天,实验组肿瘤体积(1135±245mm3)与对照组裸质粒组(9965±2109mm3)和PAMAM-D组(8357±1956mm3)相比肿瘤生长明显被抑制(P<0.01),生存时间延长。结论:G5-PAMAM-D可作为前列腺腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。 赵维明 徐勇 王燕铭 程兆康 于琦 孔德领关键词:自杀基因 前列腺癌 非病毒载体 骨髓间充质干细胞靶向迁移治疗心肌梗死 第1部分:为了开发出一种具有临床应用潜力的、非侵入性的、可用于治疗心肌梗死(MI)的干细胞疗法,本研究将骨髓间充质干细胞(MSCs)经CXCR4基因修饰后再通过静脉注射入心肌梗死大鼠体内。心肌梗死后,基质细胞衍生因子(S... 程兆康文献传递 壳聚糖纳米粒介导的HSV-tk基因对前列腺癌的体外杀伤作用 被引量:6 2007年 目的:考察壳聚糖纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:将壳聚糖纳米粒包裹的含报告基因的质粒pEGFP-C1分别转染前列腺癌细胞PC-3和22Rv1,并观察EGFP的表达情况。随后将含HSV-tk自杀基因的真核高效表达质粒pcDNA3-tk经壳聚糖纳米粒包裹后转染上述2种前列腺癌细胞,转染48 h后,以RT-PCR检测HSV-tk基因的表达情况。最后对转染的2种细胞给予不同浓度的前体药更昔洛韦(ganci- clovir,GCV)作用24 h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学分析。结果:壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞中壳聚糖纳米介导的转染效率高于脂质体。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-tk于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有HSV-tk基因的表达。给予前体药物GCV后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明HSV-tk自杀基因纳米粒在细胞中表达,从而使HSV-tk/GCV自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论:壳聚糖纳米粒能将质粒基因pcDNA3-tk转入前列腺癌细胞并表达胸苷激酶发挥作用,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体。 赵维明 徐勇 王燕铭 程兆康 张素爱 于琦 孔德领关键词:前列腺肿瘤 转染 基因 自杀 结合最新基因和干细胞技术的组织工程和人工器官研究 孔德领 欧来良 张钧 王燕铭 王连永 关勇 胡刚 俞耀庭 车永哲 程兆康 陈伯利 李东霞 该项目将国内外在基因和干细胞领域的最新技术与工程化活性材料有机结合,在组织工程化小口径血管、组织工程化尿道、心肌梗死的治疗、非病毒基因载体领域进行了大量研究,取得了丰富的研究数据,为今后干细胞和基因技术迈向临床做出了科学...关键词:关键词:人工器官 非病毒基因载体 血管内皮生长因子