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凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建、鉴定及其表达: 研究目的：　　血友病B(hemophilia B，HB)是凝血因子Ⅸ(factorⅨ，FⅨ)基因缺陷引起血浆FⅨ含量或活性下降所导致的一种连锁隐性遗传性出血疾病，男性中发病率约为1/30000，严重危害人民健康。FⅨ...; 聂欣; 关键词：真核表达载体血友病B 无义突变; 文献传递

KLF4在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖及表型转化中的作用研究: 本部分实验通过观察低氧诱导大鼠原代肺动脉平滑肌细胞增殖与分化标志改变过程中KLF4表达的变化,并检测KLF4过表达对该过程的影响,探讨KLF4在其中的作用。采用贴片法培养原代PASMC,5%02培养24h、48h、72h...; 聂欣施熠炜许建英杜永成

KLF4通过ERK信号途径参与低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖: 目的：肺动脉平滑肌细胞(PASMC)发生表型转化并发生增殖是肺动脉高压等肺血管重塑性疾病的始动环节和重要病理学基础.KLF4是锌指蛋白类转录因子KLF家族中的一员,广泛参与细胞增殖、分化与凋亡的调节.本实验通过低氧诱导大...; 聂欣于文燕施熠炜许建英杜永成; 关键词：肺血管疾病肺动脉平滑肌细胞低氧诱导

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα的膜转位和蛋白表达量的影响被引量：1: 2012年; 目的通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα（PKCα）的膜转位和蛋白表达量的影响，初步探讨PKCα在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生和发展过程中所起的作用。方法采用慢性常压低氧[氧浓度（10±0．1）％]大鼠肺动脉高压模型，将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组，检测大鼠右心室收缩压（RVSP）和右心室肥厚指数（RVHI），肺组织苏木精一伊红（HE）染色，应用蛋白免疫印迹和免疫组织化学的方法检测PKCn膜转位和蛋白表达水平的变化。结果①低氧1d、3d、7d、14d和21d组与正常对照组相比，RVSP和RV／（LV＋S）比值均明显增加（P〈0．05），低氧暴露3d、7d、14d和21d后大鼠肺动脉壁明显增厚；②PKCα的蛋白表达量在慢性低氧1d、3d、7d和14d后比正常对照组明显下降（P〈0．05）。结论PKCα蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压的发生和发展过程。; 于文燕程振玲聂欣施熠炜杜永成; 关键词：蛋白激酶CΑ 慢性低氧肺动脉高压膜转位蛋白表达

KLF4在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖及表型转化中的作用初步研究: 2016年; 目的本实验通过观察低氧诱导大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterysmoothmusclecell，PASMC）增殖与分化标志改变过程中，krfippel样因子4（krfippel-likefactor4，KLF4）表达的变化，并检测KLF4过表达对该过程的影响，探讨KLF4是否在其中担当一定作用。方法采用贴片法培养原代PASMC，低氧（5％O2）培养24h、48h、72h后，以正常氧浓度培养细胞为对照，采用实时荧光聚合酶链反应（real—timePCR）、Westernblot及免疫共沉淀方法，观察低氧24h、48h、72h，PASMC中KLF4乙酰化水平及表达水平的变化。cck-8检测细胞增殖情况，碘化丙啶（PI）染色检测细胞周期，提取细胞总RNA和蛋白，采用real-timePCR、Westernblot方法检测细胞中增殖细胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen，PCNA）的表达水平，综合分析低氧对细胞增殖的影响，同时采用real—timePCR、Westernblot方法检测PASMC分化标志物平滑肌肌动蛋白d（smoothmusclemaction，SMa-actin）的表达水平。通过转染KLF4表达质粒，提高PASMC中KLF4的表达水平，检测细胞周期、增殖活力及PCNA、SMa—actin的变化，观察低氧下KLF4过表达对PASMC增殖、分化的影响。结果低氧24h，PASMC中KLF4表达水平均较常氧培养细胞明显增高，期间SMn—actin表达较常氧培养细胞明显减少，PASMC增殖不明显。随后KLF4表达水平逐渐降低，至72h降低至正常水平，而SMα-actin逐渐增高，同时PASMC增殖活力明显增强，s期细胞逐渐增多。KLF4过表达后，低氧刺激PASMC增殖活力明显降低，SMα-actin表达水平也降低，细胞阻滞于G1期。结论低氧诱导PASMC发生去分化与增殖不同步；KLF4参与调节低氧诱导的PASMC表型转化与增殖过程，该作用涉及KLF4乙酰化水平改变。; 聂欣施熠炜张爱珍杜永成; 关键词：肺动脉平滑肌细胞低氧 KLF4

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI的膜转位和蛋白表达量的影响被引量：2: 2012年; 目的通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI(PKCβI)的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCβI在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1 d、3 d、7d、14 d和21 d组,应用蛋白免疫印迹和免疫组化技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中PKCβI的膜转位和蛋白表达水平。结果 (1)RVSP和RV/(LV+S)比值较正常对照组明显增加(P<0.05),低氧后3 d、7 d、14 d和21 d后大鼠肺血管明显增厚;(2)大鼠肺血管平滑肌细胞和成纤维细胞均有PKCβI的表达,且低氧14 d后PKCβI的蛋白表达量较正常对照组相比降低(P<0.05)。结论 PKCβI蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。; 程振玲于文燕聂欣施熠炜杜永成; 关键词：慢性低氧肺动脉高压膜转位蛋白表达水平

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