荫俊
- 作品数：122 被引量：239H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>
- 梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型
- 2006年
- 目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论：设计了针对A，B，E，F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物，以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物（BonAB—P01／P02，BonB-P01／P02，BonE-P01／P02，BonF-P01／P02，TET-P01／P02，TY-P01／P02）。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验，检测特异性良好，没有交叉反应；通用扩增结果显示均得到1100bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到（1～3）×10^3个菌。该检测方法特异性强，灵敏度高，可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。
- 杨慧盈王慧包士中史晶荫俊
- 关键词：PCR检测特异性灵敏度
- 人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体的生物学特性研究被引量：7
- 2005年
- 对抗狂犬病毒scFv进行稳定性改构 ,纯化制备有活性的人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段 (dsFv) ,然后对其生物学活性进行研究。将dsFvVH 、VL 基因在原核表达系统pET2 2b(+) BL2 1(DE3)中表达 ,将其包涵体分别在变性缓冲液中溶解 ,稀释后加入折叠缓冲液使其折叠形成有活性的dsFv抗体片段 ,上Ni NTA柱进行纯化。然后以其亲本scFv作为对照 ,对dsFv的亲和力、稳定性以及体外中和活性进行评价。结果显示 ,与其母本抗体scFv相比 ,改构后的抗狂犬病毒dsFv保持了对狂犬病毒Vero疫苗的特异性识别能力 ,而且其亲和力明显提高 ;抗狂犬病毒dsFv在血清和BSA中的稳定性有明显的改进 ,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进 ;蚀斑减少中和实验显示 ,抗狂犬病毒dsFv抗体片段能特异中和狂犬病毒 ,阻止狂犬病毒对Vero细胞的吸附 ,抑制狂犬病毒对靶细胞的感染 ,从而导致蚀斑减少甚至消失 ;scFv抗体片段仅可部分抑制蚀斑的形成 ,但不能全部抑制。这为进一步研究抗狂犬病毒dsFv基因工程抗体的免疫保护作用及其在临床的应用奠定了基础。
- 赵小玲荫俊张素娟陈伟强
- 关键词：狂犬病毒稳定性
- 一种抗I型志贺毒素IgY抗体、及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种抗I型志贺毒素的IgY抗体，该抗体可以通过以下方法制备：化学合成或基因重组表达的方法制备无毒性的志贺毒素免疫抗原，通过免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，应用生物化学方法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。该抗体具...
- 王慧侯晓军王琴包士中蔡昆史晶荫俊
- 文献传递
- A型产气荚膜梭菌α毒素全基因的分子克隆与核苷酸序列分析被引量：2
- 2003年
- 应用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌菌株NCTC64609中扩增出A型产气荚膜梭菌α毒素全基因(cpa1229基因)并将其克隆至pMD18-T载体中。经转化、IPTG/X-gal选择培养,提取质粒,PCR和EcoRI/PstI双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆。经核苷酸序列分析证实,cpa1229基因阅读开放框架由1194bp组成。经GenBank检索对照分析,cpa1229基因序列与国外文献报道者同源性达98.3%,表明本实验所克隆的cpa1229基因即为A型产气荚膜梭菌α毒素基因。
- 林明辉荫俊王慧宋伟邢洪光侯晓军
- 关键词：A型产气荚膜梭菌Α毒素分子克隆核苷酸序列
- 从噬菌体展示肽库中筛选脂质A的结合肽
- 2003年
- 以脂质A为靶标,筛选噬菌体展示十二肽库,三轮后随机挑取14个噬菌体克隆进行结合活性鉴定,并对5个克隆进行序列分析。结果表明,14个克隆全部是阳性克隆,测序结果显示4个阳性克隆的序列完全一样。说明筛选到了一个脂质A的结合多肽。
- 姜明王慧荫俊张浩杰宋伟史俊南
- 关键词：噬菌体结合肽脂多糖肽库感染性休克
- 产黑色素类杆菌ATCC25845内毒素对小鼠集落刺激因子的诱生活性
- 1993年
- 产黑色素类杆菌(Bacteroides melaninogenicus)是口腔感染的主要致病菌,由该菌产生的内毒素在致病中具有重要作用。本文采用半固体琼脂培养基培养小鼠骨髓细胞.以形成的集落数作为集落刺激因子(CSF)的水平指标,研究了产黑色素类杆菌内毒察的CSF诱生活性。实验发现,在一定范围内,CSF水平随内毒索剂量增加而上升,但当内毒索剂量大于50μg时。CSF水平不再继续上升。产黑色素类杆菌内毒素的集落形成单位数(CFU-C)为66.6±8.5。
- 荫俊张郁余伟明史俊南
- 关键词：内毒素集落刺激因子
- 人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达被引量：4
- 2007年
- 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：原核表达
- 抗A型肉毒毒素人源三结构域抗体的重组设计与表达被引量：1
- 2005年
- 以获得的抗A型肉毒毒素人源单链抗体ScFvB17为模板 ,PCR扩增抗体ScFv基因的重链可变区 (VH)和轻链可变区 (Vκ) ,以重链恒定区 1(CH1) 5′端 12个氨基酸的序列作为连接肽 ,构建成三结构域抗体分子 :VH_连接肽_Vκ(VH Vκ)。重组VH Vκ抗体分子在大肠杆菌中得到高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白质的 34%以上。表达的蛋白质在菌内形成包含体 ,采用镍柱金属鏊合层析法对该包含体进行纯化 ,得到了纯度高达 95 %的VH Vκ。ELISA等实验结果显示 ,重组设计并制备的三结构域抗体蛋白VH Vκ不但可以特异识别毒素抗原 ,具有与原母本单链抗体ScFv相同的抗原特异性 ,而且具有了更高的相对亲和力和稳定性。
- 王慧荫俊史晶孟露露李佩真
- 关键词：A型肉毒毒素中和活性
- hOP-1成熟肽基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 :构建hOP - 1成熟肽基因表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为研究OP - 1的功能作用以及制备OP - 1抗体奠定基础。方法 :构建hOP - 1/pEH4表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达OP- 1,SDS -PAGE对表达产物进行检测 ,凝胶薄层扫描判定蛋白表达量。结果 :pEH4/OP - 1重组表达载体转化DH5α,经温度诱导后 ,SDS -PAGE显示Mr约为 14× 10 3 的新蛋白条带。薄层扫描测定 ,表达蛋白占菌体总蛋白量的 33%。结论 :构建的hOP - 1/pEH4表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中获得OP -
- 岳玲史俊南柴玉波孙叶方荫俊文玲英
- 关键词：基因表达大肠杆菌蛋白
- hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建
- 2004年
- 目的 证实人牙乳头细胞中OP 1的表达 ,获得hOP 1全长基因及其高效真核表达载体。方法 提取人牙乳头细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增hOP 1全长基因并克隆入T载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定后。构建高效真核表达载体pCI OP 1并筛选鉴定。结果 PCR扩增得到一特异性的约 13 0 0bp的片段 ,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致。构建的pCI OP 1质粒 ,用于基因转染纯度较好。结论 人牙乳头细胞中首次克隆到hOP 1全长基因 。
- 岳玲史俊南柴玉波孙叶方荫俊文玲英
- 关键词：全长基因克隆人牙乳头细胞真核表达载体
