谢希贤
- 作品数：394 被引量：397H指数：10
- 供职机构：天津科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌中吡咯喹啉醌合成途径的构建被引量：1
- 2022年
- 目前吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)在大肠杆菌中的异源合成主要以质粒为表达载体进行,但是质粒载体难以进行合成途径多基因表达的系统优化,并且容易造成发酵不稳定。作者以大肠杆菌为底盘生物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在基因组水平系统优化PQQ的合成。将来源于Gluconobacter oxydans 621H的操纵子pqqABCDE引入底盘大肠杆菌,并进一步通过优化合成途径基因表达强度,敲除大肠杆菌自身抑制基因及强化PQQ的胞内需求与胞外转运等,获得了一株能够高效合成PQQ的工程菌,摇瓶发酵72 h时产量达到86.3 mg/L。以大肠杆菌为底盘构建PQQ高效合成途径的工作能够为后续以其他底盘生物生产PQQ及相关代谢产物提供借鉴。
- 杨蒙雅张春月伊进行王怡明卓明洋马倩谢希贤
- 关键词：大肠杆菌吡咯喹啉醌
- pta基因敲除对L-色氨酸发酵的影响被引量：9
- 2011年
- 【目的】探究pta基因缺失对大肠杆菌发酵生产L-色氨酸的影响。【方法】运用Red重组技术敲除pta基因,构建pta缺失株E.coli TRTHΔpta。利用30 L发酵罐进行分批补料发酵试验,考察重组菌E.coliTRTHΔpta发酵生产L-色氨酸过程中生物量、L-色氨酸产量、有机酸含量、发酵液中NH 4+浓度及变化。建立了大肠杆菌合成L-色氨酸的代谢流平衡模型,应用MATLAB软件计算出E.coli TRTH及其pta缺失株发酵中后期代谢网络的代谢流分布。【结果】发酵结果显示,pta缺失株能够以较长时间和较高比生长速率保持对数生长,最终菌体生物量和L-色氨酸产量分别提高了52.7%和46.8%。有机酸含量分析结果表明,pta缺失株乙酸含量显著降低,只有2.5 g/L,仅为亲株的19.5%;丙酮酸和乳酸的含量有一定增加。多参数分析结果显示,pta缺失株发酵过程中NH 4+浓度较亲株降低33.2%。pta缺失株发酵生产L-色氨酸的代谢流量分析结果表明,EMP途径的代谢流量降低7.4%,PP途径的代谢流量增加8.4%,TCA循环的代谢流量降低32.2%。【结论】pta基因的缺失导致在发酵生产L-色氨酸过程中代谢流发生变化,乙酸含量的显著降低解除了乙酸对菌体生长和产物生成的抑制,使得菌体生物量和L-色氨酸产量大幅提高。
- 黄静史建明刘倩徐庆阳谢希贤温廷益陈宁
- 关键词：基因敲除乙酸L-色氨酸
- 大肠杆菌芳香族氨基酸代谢工程研究进展被引量：12
- 2017年
- 芳香族氨基酸包括L-苯丙氨酸(L-Phe)、L-酪氨酸(L-Tyr)和L-色氨酸(L-Trp),是生物体内非常重要的必需氨基酸,具有重要的生物学功能,广泛应用于医药、食品和饲料等领域。本文中,笔者介绍了芳香族氨基酸的生物合成途径以及代谢调控,综述了构建大肠杆菌芳香族氨基酸生产菌株的代谢工程策略。针对现阶段工业化生产芳香族氨基酸存在的问题,笔者对进一步应用代谢工程策略改造芳香族氨基酸菌株进行了展望。
- 鄢芳清韩亚昆李娟李燕军徐庆阳徐庆阳谢希贤
- 关键词：大肠杆菌代谢工程
- 高产嘧啶核苷的菌株及其氨甲酰磷酸合成酶调节位点
- 本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一株高产嘧啶核苷的菌株及其氨甲酰磷酸合成酶调节位点。本发明提供了一株生产嘧啶核苷的枯草芽孢杆菌突变株和一个氨甲酰磷酸合成酶的编码基因，明确了一个与氨甲酰磷酸合成酶受终产物反馈抑制相关的关...
- 谢希贤陈宁吴鹤云徐庆阳张成林范晓光张红超
- 文献传递
- 胞苷合成途径改造对大肠杆菌嘧啶核苷发酵的影响被引量：3
- 2021年
- 嘧啶核苷包括尿苷和胞苷,是生产抗病毒和抗肿瘤药物的重要中间体。为获得胞苷高产菌,该研究以高产尿苷的大肠杆菌UR6为出发菌株,利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术对其进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,cdd、cmk和ygdH 3个基因的敲除阻断了胞苷及其前体物的主要降解途径,使胞苷产量达到了2.8 g/L,而尿苷产量基本无变化;突变体PyrH ecj(D93A)和PyrG cgl(D160E、E162、E168K)的引入结合nudG基因的双拷贝有效增强了胞苷合成途径,使胞苷产量提高至5.6 g/L,尿苷产量降低至9.3 g/L;引入酵母菌的5′-核苷酸酶PHM8使尿苷的产量提高至11.5 g/L,而对胞苷的积累影响不大;乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶和尿苷酸激酶的融合表达,增强了尿苷酸到胞苷的合成通量,使胞苷产量进一步提升至7.2 g/L,尿苷产量降低至8.2 g/L。最终所得菌株可用于胞苷和尿苷联产,具有较好的工业化应用前景。
- 刘益宁秦臻李旋蒋帅吴鹤云谢希贤
- 关键词：胞苷尿苷代谢工程大肠杆菌发酵
- 一种流态菌体固定化发酵罐
- 本实用新型提供了一种流态菌体固定化发酵罐，包括罐体、若干微滤装置、菌体输送管路、物料输送管路、文氏管件和物料输送泵，各所述微滤装置平行设置于所述罐体内部，并与该罐体通过卡槽卡接方式固定，所述微滤装置由空腔微滤膜板、微孔滤...
- 徐庆阳陈宁杨梦晨谢希贤张成林李燕军范晓光户红通蔡萌萌刘镇瑜刘子强
- 文献传递
- 一种生产L-精氨酸的基因工程菌及其应用
- 本发明属于基因工程技术领域，本发明提供了一种生产L‑精氨酸的基因工程菌及其应用。该基因工程菌以大肠杆菌为宿主，不表达以下基因：speA、adiA和astA；异源过表达以下基因：来源于Corynebacterium glu...
- 谢希贤蒋帅吴鹤云王瑞瑞王德虎马倩
- 一种双膜连续结晶法分离提取发酵液中分支链氨基酸的方法
- 一种双膜连续结晶法分离提取发酵液中分支链氨基酸的方法，该方法首先通过双膜即微滤膜、纳滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和色素，然后通过溶胶脱蛋白、活性炭脱色、真空浓缩结晶、碱溶、脱蛋白脱色、低温等电连续结...
- 陈宁徐庆阳谢希贤张成林李燕军范晓光马跃超
- 一种产生N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用
- 本发明公开了一种产生N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用,所述基因工程菌利用阿拉伯糖或鼠李糖同时诱导N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径的强化，以及旁路代谢途径的弱化，实现精准调控。本发明所构建的大肠杆菌基因工程菌W3110‑G...
- 马倩谢希贤陈宁张权威鄢芳清侯正杰莫晓琳徐庆阳李燕军张成林范晓光
- 一种生产L-瓜氨酸的基因工程菌株及其应用
- 本发明提供一株高效稳定生产L‑瓜氨酸的基因工程菌株CIT 4，该菌株是以大肠杆菌为宿主，首先使宿主缺失精氨基琥珀酸合酶活性，以阻断L‑瓜氨酸降解为精氨酸琥珀酸；还在宿主基因组上整合了编码大肠杆菌精氨基琥珀酸合酶的基因ar...
- 谢希贤文晨辉蒋帅吴鹤云秦臻朱彦凯王加初朱永铎李镠
- 文献传递
