- 人脐带间充质干细胞低温冻存后生物学鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的观察人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)经低温冻存复苏后的生物学特性,验证其是否仍具有间充质干细胞的基本特征。方法用胶原酶和胰蛋白酶消化脐带,分离诱导获得HUC-MSCs,传代培养,取第3代细胞加入冷冻保护剂(10%DMSO+40%FBS+50%DMEM/F12)后将其冻存于-80℃冰箱过夜,再转入液氮气相中保存1个月后复苏。采用倒置显微镜观察复苏后贴壁生长细胞的形态;台盼蓝拒染法比较冻存前后细胞活力;MTT法测定HUC-MSCs的增殖活性,比较冻存前后HUC-MSCs增殖活性的差异;流式细胞仪检测HUC-MSCs经冻存复苏后表面抗原的表达情况;复苏后HUC-MSCs进行成骨诱导分化培养,检验其是否仍具有多向分化潜能。结果 HUC-MSCs经低温保存复苏后,细胞仍保持贴壁生长等外形特征,复苏后HUC-MSCs存活率为91.17%;增殖活性与未冻存细胞比较,差异无统计学意义;细胞表面高表达CD105、CD73、CD71、CD90、CD29、CD44、CD13抗原,低表达或不表达CD34、CD133、CD45、CD14,HLA-DR、CD86、CD83、CD80、CD1α;复苏后HUC-MSCs具有向成骨细胞诱导分化能力,细胞经茜素红、ALP和Von-Kossa′s染色呈阳性反应。结论经冻存复苏后的HUC-MSCs保持了间充质干细胞的基本形态,其表型满足间充质干细胞的基本要求,仍具有向成骨细胞分化的潜能。
- 李素萍王震吕蓉王超邢昕郭晓婕刘忠
- 关键词：脐带间充质干细胞成骨分化
- B(A)血型的鉴定及其患者输血的探讨被引量：10
- 2015年
- 目的:探讨B(A)血型的血清学和分子生物学的鉴定及合理的输血方法。方法:用血清学方法检测患者的血型,同时利用ABO-TYPE Variant试剂盒和ABO基因6、7外显子DNA序列分析法分析患者的基因型,应用O型洗涤红细胞用于疑难配血三步分析法配血。结果:患者的正定型:A弱B强,血清中存在抗A1;反定型:A1C3+,BC阴性;分子生物学鉴定为:B(A)04型,640 A>G;O型洗涤红细胞检测主侧配血阴性。结论:稀有血型或亚型的分析鉴定要谨慎,必要时可进行分子生物学分析,对稀有血型或亚型患者输血要安全、正确、合理。
- 王超李素萍吴学忠吴学忠李敏王伦善邢昕
- 关键词：ABO血型等位基因B(A)血型交叉配血
- 人脐带源间充质干细胞条件培养液对人肝癌HepG2细胞生长的影响
- 2015年
- 目的 探讨人脐带源间充质干细胞（HUC-MSC）条件培养液（CM）对人肝癌HepG2细胞生长的影响.方法 选择2011年2月至2014年1月于中国人民解放军第105医院妇产科分娩的35例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带为研究对象,取其用于分离、培养并扩增HUC-MSC.传代扩增至第3代HUC-MSC融合达80％时,更换培养液,继续培养24 h后收集上清液,即为HUC-MSC-CM备用.将对数生长期的人肝癌HepG2细胞按照随机数字表法随机分成相等的3份,分别于含50％,20％及不含HUC-MSC-CM的培养中培养,并分别纳入高含量组、低含量组和空白对照组.采用倒置显微镜观察人肝癌HepG2细胞生长状态,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法和细胞划痕愈合实验分别检测3组人肝癌HepG2细胞增殖和迁移情况,并采用流式细胞术（FCM）法检测各组细胞的细胞周期变化情况.本研究遵循的程序符合中国人民解放军第105医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,脐带获取前,均征得孕妇知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①所分离的原代HUC-MSC培养至第3代后,细胞形态开始比较均一.②MTT法检测结果显示,人肝癌HepG2细胞培养24,48和72 h时,3组相对吸光度（A）值比较,差异均有统计学意义（F=21.330,6.223,9.345;P=0.004,0.032,0.027）,且在这3个时间点,高含量组和低含量组相对A值均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,高含量组相对A值亦显著高于低含量组,差异亦均有统计学意义（P＜0.05）.③划痕愈合实验结果显示,3组人肝癌HepG2细胞过河时间比较,差异有统计学意义（F=12.860,P=0.025）,且高含量组人肝癌HepG2细胞过河时间短于低含量组和空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,低浓度组人肝癌HePG2细胞过河时间亦短于对照组,差异亦有统计学意义（P＜0.05）.④FCM法检测人肝癌
- 李素萍王震王超王永珍邢昕李敏吴学忠吕蓉
- 关键词：间充质干细胞细胞增殖细胞周期
- 新等位基因HLA-B*15:179:02的检测和鉴定
- ＜正＞目的鉴定并确认HLA新等位基因HLA-B*15∶179∶02,分析其核苷酸序列。方法采用美国Tiangen试剂盒抽提标本DNA,采用聚合酶链反应序列-特异寡核苷酸探针杂交技术（PCR-SSOP）进行HLA高分辨分型...
- 邢昕吕蓉於娟盛琪琪
- 文献传递
- SSOP HD试剂HLA高分辨分型结果不确定的原因分析被引量：1
- 2015年
- 目的使用SBT法对SSOP HD试剂分型结果不确定的22份样本进行检测,分析可能的原因。方法对血液样本抽提DNA,按照SSOP HD试剂进行分型检测;针对结果不确定的样本采用SBT法复检,根据SBT法的测序结果分析22份样本SSOP结果不确定的可能原因。结果 2 000份样本经SSOP HD试剂检测后,结果不确定样本共有22份,A位点有6份,B位点有12份,DRB1位点有4份;SBT法检测均为明确的高分辨结果;分析原因可能为磁珠的假阳性或假阴性反应影响软件结果判读;或HLA基因型为罕见型;或试剂的局限性导致两种基因型不能区分。结论 SSOP HD可完成大批量样本的HLA高分辨检测工作;对罕见基因型和磁珠假性反应调整后的结果,应结合SBT法进行核实,保证HLA基因高分辨分型结果的准确性。
- 吕蓉邢昕於娟盛琪琪
- 关键词：人类白细胞抗原聚合酶链反应
- 人脐带间充质干细胞诱导分化成脂细胞
- 2015年
- 目的观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)在体外向脂肪细胞诱导分化过程中细胞形态及表面抗原表达量变化。方法从脐带中分离培养间充质干细胞,至第3代,流式细胞仪检查其细胞表面抗原的表达量,加入成脂肪诱导剂体外诱导分化。诱导7 d,14 d,21 d,分别采用流式细胞仪分析细胞表面抗原的表达情况,结合油红O染色,观察细胞诱导分化情况。结果细胞培养至第3代,细胞表面表达CD90、CD44、CD29、CD71、CD73、CD105及CD13,不表达CD34、CD14、CD45、CD133、CD80、CD83、CD86、HLA-DR。成脂诱导7 d,细胞表面CD71表达量明显下降(P<0.05),但其他一些重要的标志物仍处于高表达水平;诱导14 d细胞表面抗原的表达量下降更为明显,如CD44为65.21%,CD71为42.05%(P<0.01),油红O染色有明显脂滴形成;诱导21 d细胞表面抗原的表达量均明显降低(P<0.01),油红O染色胞浆中充满红色油滴。结论 HUC-MSCs成脂肪诱导剂作用下,可诱导成脂肪细胞,且细胞表面抗原的表达量会在诱导过程中发生相应的改变。
- 李素萍王震王超邢昕李敏吴学忠吕蓉
- 关键词：间充质干细胞细胞分化脂肪细胞表面抗原
- 合肥地区无偿献血者不规则抗体筛检及抗体鉴定结果分析被引量：13
- 2014年
- 目的筛检合肥地区无偿献血者的不规则抗体,通过对不规则抗体筛检阳性标本进行鉴定,分析本地区无偿献血者不规则抗体的分布特点并探讨不规则抗体筛检对输血安全的必要性。方法对本地区的每份无偿献血标本分别用凝聚胺法,抗球蛋白法进行不规则抗体筛检,阳性标本用商品化谱细胞试剂采用盐水法,抗球蛋白法进行抗体鉴定及效价检测。结果 2007年1月至2012年12月开展献血者不规则抗体检测项目,共筛检献血者标本343 777份,不规则抗体阳性24例;阳性标本中鉴定出抗-M:13例、抗-D:3例、抗-E:6例、抗-s:1例、抗-N:1例;其中IgM抗体为17例,IgG抗体为6例,IgG抗体+IgM抗体为1例,女性献血者中不规则抗体阳性率远高于男性献血者;抗体效价1∶32的6例,其余18例效价均在1∶2至1∶16之间。结论通过筛检和鉴定,统计得出本地区无偿献血者中不规则抗体多为MNS系统抗体,其次为Rh系统抗体;筛检献血者标本中不规则抗体,对保证输血安全,降低和避免输血反应的发生有着重要的意义。
- 吕蓉邢昕赵阳李敏李素萍吴学忠刘忠
- 关键词：献血者不规则抗体筛检抗体鉴定抗体效价
- HLA高分辨组织配型检测方法的建立和应用
- 吕蓉王震邹宇飞邢昕於娟李敏盛琪琪刘婷婷王超李素萍吴学忠赵阳蒋菲菲
- 该项目在HLA高分辨分型中同时采用PCR-SSO和PCR-SBT方法进行检测，相互补充相互佐证，有助于避免采用单一方法出现HLA分型错误，提高HLA分型的准确性。通过大量实验积累，建立了HLA高分辨组织配型检测方法，并对...
- 关键词：
- 关键词：中华骨髓库组织配型高分辨率
- 肿瘤患者疑难血型鉴定和基因分型的相关探讨被引量：12
- 2013年
- 血液病和恶性肿瘤的部分患者,尤其是白血病和多发性骨髓瘤患者,常因病情及治疗导致ABO血型正反定型不符,表现为ABO血型的抗原或抗体减弱。本研究分析正反定型不一致的原因,进行正确的红细胞分型和基因分型,对12份肿瘤患者正反定型不一致血液样本进行的血型血清学试验和吸收放散试验。对存在疑问的标本进行PCR扩增第6、7外显子和5-7内含子,对外显子序列进行基因测序。结果表明,9例标本通过血型血清学、吸收放散定型,6例为A型,2例为O型,1例为B型;3例血型血清学和吸收放散无法鉴定其血型的标本,经测序分别定型为O46,B108和A102型,其中有2例因为PCR扩增效果差或者测序结果矛盾,未能给出ABO基因型。结论:对ABO血型正反定型不一致无法定型的肿瘤患者的血液样本,可以采用血型血清血方法、基因分型及吸收放散的方法正确鉴定ABO血型,以保证输血的安全性和有效性。
- 王超李素萍李敏吴学忠邢昕吕蓉
- 关键词：ABO血型血型血清学血型系统基因分型
- B(A)血型的鉴定及患者输血方法的探讨
- 目的 探讨B(A)血型的血清学和分子生物学的鉴定及合理的输血方法。方法 用血型血清学方法检测患者的血型,同时利用ABO-TYPE Variant试剂盒和ABO基因6、7外显子DNA序列分析法分析患者的基因型,O型洗涤红细...
- 王超吕蓉李素萍吴学忠李敏邢昕王伦善
- 关键词：ABO血型等位基因B(A)血型交叉配血
