陈孝仁
- 作品数：40 被引量：149H指数：7
- 供职机构：扬州大学园艺与植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 灰葡萄孢角质酶突变体的致病性分析(英文)
- 2013年
- 为印证角质酶在灰葡萄孢(Botrytis cinerea)穿透寄主植物组织过程中所起的重要作用,利用紫外诱变技术,在角质酶选择性培养基上筛选,获得了4个角质酶活性有变化的灰葡萄孢突变体菌株,与野生型菌株H2相比,突变体H2-M1和H2-M2表现出角质酶活性增强,而突变体H2-M3和H2-M4表现出角质酶活性下降。培养基上10次继代培养突变体菌株时未发现其产角质酶性状发生变化。无创伤接种番茄和草莓果实的试验结果表明,相比于野生型菌株,突变体H2-M1和H2-M2表现出致病力增强,而H2-M3和H2-M4的致病力弱于野生型菌株。但在有伤口果实上接种后,酶缺陷突变体H2-M3和H2-M4的致病力与野生型菌株相同。研究发现这4个突变体菌株产生其他致病因子(多聚半乳糖醛酸酶、果胶甲基多聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶及毒素)的能力未受到紫外诱变的影响。研究结果表明,B.cinerea分泌的角质酶可能在其直接侵入寄主表皮的过程中起重要作用,但紫外诱变引起哪些基因位点突变,从而导致角质酶活性变化的原因则有待于进一步分析。
- 陈孝仁孙媛徐敬友纪兆林陈夕军童蕴慧
- 关键词：灰葡萄孢突变
- 辣椒疫霉质外体疏水小蛋白SCR82编码基因的转录特征、异源表达和功能被引量：2
- 2019年
- [目的]分析PcF/SCR质外体疏水小蛋白SCR82编码基因在辣椒疫霉生长发育和侵染寄主阶段的转录特征,克隆其cDNA和基因组全长序列,分析蛋白性状及其序列保守性,利用大肠杆菌表达并获得纯化蛋白,分析其生物学功能。[方法]提取辣椒疫霉菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发休止孢和7个侵染时间点(1.5、3、6、12、24、36、72 h)的本氏烟根部总RNA,利用半定量RT-PCR分析scr82的转录表达水平;通过高保真PCR从萌发休止孢cDNA和基因组DNA中克隆出该基因全长序列;利用软件对SCR82进行生物信息学分析,挖掘其他物种中的同源序列,预测蛋白性状;将cDNA全长序列克隆到含6×His-SUMO序列的pET28a(+)中,在不同温度(22、37℃)和IPTG浓度(0.1、0.2、0.5、1.0 mmol/L)组合条件下利用大肠杆菌Rossette 2菌株表达该蛋白,利用Ni2+亲和层析柱纯化蛋白;将蛋白浸润本氏烟和拟南芥叶片,分析它是否引起植物细胞死亡,蛋白浸润12、24 h后利用RT-qPCR分析本氏烟中3个抗性相关基因(NbMC1、NbSOD、NbPOX)的表达量变化。[结果] scr82基因在辣椒疫霉萌发休止孢和侵染寄主阶段上调表达;该基因为辣椒疫霉中单拷贝基因,不含内含子,开放阅读框为249 bp;预测其编码82个氨基酸,包含长度为21个氨基酸的信号肽序列和7个半胱氨酸但不含有任何已知功能域,蛋白疏水性强,二级结构主要为α-螺旋和不规则卷曲,在疫霉菌中保守;含重组质粒的菌株在22℃经0.2 mmol/L的IPTG诱导过夜(~16 h)产生大小约24 kDa的融合蛋白,纯化获得30 mg/mL的可溶性蛋白;融合蛋白不引起本氏烟和拟南芥叶片的细胞死亡,但导致本氏烟抗性相关基因均上调表达。[结论]本研究获得了辣椒疫霉胞外疏水小蛋白SCR82的原核表达蛋白,该蛋白不引起植物细胞死亡,但触发植物的防卫反应。
- 张子辉黄沈鑫陶航张烨赵耀纪兆林陈孝仁
- 关键词：辣椒疫霉植物防卫反应
- 大豆疫霉侵染早期机制的分子解析
- 大豆疫霉是农业生产上极为重要的植物病原茵之一，由其引起的大豆疫霉根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一。由于疫霉菌与真菌亲缘关系较远，普通杀菌剂对疫霉菌无效。了解大豆疫霉菌生长发育与致病过程的分子遗传学基础，可以为寻找新的杀...
- 陈孝仁
- 关键词：大豆疫霉差减杂交绿色荧光蛋白基因沉默分子遗传学
- 恶疫霉质外体小蛋白SCR96的抗体制备及检测应用
- PcF/SCR型效应蛋白是卵菌泌出到植物质外体空间的一类疏水小蛋白,但目前对其功能知之甚少。研究的困难之一就是这些蛋白分子量小,融合的蛋白检测标签不仅会影响蛋白的活性,而且也容易在质外体空间被加工降解掉,影响蛋白检测。为...
- 黄沈鑫张子辉陈孝仁
- 关键词：恶疫霉多克隆抗体
- 文献传递
- 恶疫霉实时定量RT-PCR分析中内参基因的选择被引量：4
- 2012年
- 为选择合适的内参基因用于分析植物病原卵菌恶疫霉(Phytophthora cactorum)的基因表达情况,本研究利用实时定量RT-PCR分析持家基因Ubc、Tub-b、WS21和WS41在恶疫霉生长发育阶段和侵染草莓阶段的表达差异,并利用软件geNorm、NormFinder和BestKeeper比较其表达稳定性。结果表明:基于公共数据库序列和其他疫霉菌同源序列设计的持家基因引物在恶疫霉中具有良好的扩增效率、反应有效性和特异性。通过分析,发现在恶疫霉的不同生长发育阶段(菌丝生长、游动孢子囊、游动孢子和休止孢萌发)和侵染草莓阶段(接种后3、5、7天),表现最为稳定的是Ubc基因。当使用多个内参基因时,Ubc和WS41是最适合校正恶疫霉基因表达数据的内参基因组合。本研究结果为利用实时定量RT-PCR准确分析恶疫霉基因相对表达量提供了重要的内参基因,也为其他疫霉菌的基因表达研究提供了有价值的参考。
- 陈孝仁张博月邢玉平童蕴慧徐敬友
- 关键词：内参基因恶疫霉实时定量RT-PCR草莓
- 真菌学教学改革的实践与思考
- 2018年
- 真菌学是农科植物病理学硕士研究生培养计划中一门重要的专业必修课程。针对多年课程教学中发现的问题,以培养"高素质、厚基础"的专业人才为导向,从教学理念、教学形式、师资队伍、教学内容、课堂建设、考核评价、互动反馈等方面进行了教学改革实践,以期探索出一套适合高等农林院校研究生真菌学课程的教学模式,以提高专业课的教学质量。
- 陈孝仁
- 关键词：真菌学植物病理学教学改革教学模式
- 辣椒疫霉中一个具有转录因子序列特征的外泌蛋白的分析鉴定被引量：1
- 2021年
- 植物病原细菌分泌核调控蛋白进入寄主细胞核调控其基因表达以利于自身的侵染,但目前对卵菌中该类蛋白知之甚少。前期生物信息学分析从辣椒疫霉中获得一个具有DNA结合域的外泌蛋白PcSEP9,利用qRT-PCR检测其在辣椒疫霉侵染前期(菌丝、游动孢子囊、游动孢子、休止孢萌发)和侵染阶段[灌根接种本氏烟(Nicotiana benthamiana)后1.5、3、6、12、24、36、72 h]的基因转录水平,发现该基因在辣椒疫霉的生长发育和侵染阶段均表达上调;对该基因进行TA克隆测序,对其编码的蛋白质进行结构域预测,发现其含有信号肽、核定位信号、DNA结合域和锌指RBZ结构域;将其信号肽的核苷酸编码序列克隆至酵母信号肽诱捕载体pSUC2T7M13ORI上,并转化到酵母蔗糖酶缺陷菌株YTK12中,发现重组菌株能成功分泌蔗糖酶,促使棉籽糖分解成单糖,且在YPRAA培养基上可正常生长,同时生成的单糖能与2,3,5-triphenyltetrazolium chloride反应产生红色不溶于水的氯化三苯基四氮唑,明确了该蛋白质的信号肽具有分泌活性;在本氏烟中进行瞬时表达,发现该蛋白质全长和成熟肽均能稳定表达,但对辣椒疫霉的毒力无明显影响。这一研究拓宽了对卵菌外泌蛋白质的认识,为进一步探索该类蛋白质的生物学功能及其作用机制提供了重要的试验数据。
- 施宁雪陶航张烨靳晶豪陈孝仁
- 关键词：卵菌转录因子信号肽毒力
- 引起江苏茅山地区宣木瓜叶斑病的病原鉴定
- 2019年
- 原产于安徽省宣城市的地道中药材宣木瓜(Chaenomeles sinensis)隶属蔷薇科(Rosaceae),为常用中药木瓜的上品,是与藏红花、甘枸杞、川杜仲齐名的四大名贵中药材之一。除药用之外,近年也被用于化妆品和保健品领域[1]。此外,由于树冠优美、花团锦簇,宣木瓜还被栽培用于观赏;同时,因其耐旱耐瘠,对土壤要求不高,又常被作为退耕还林的引种树种。
- 陶航黄沈鑫王浩张烨张子辉陈孝仁
- 关键词：MEDICINALHERBSQUINCEBOTRYTISCINEREA
- 稻飞虱对4种新烟碱类杀虫剂的抗性及其治理策略被引量：4
- 2017年
- 稻飞虱(褐飞虱、白背飞虱和灰飞虱)是我国水稻生产上最为重要的害虫之一,新烟碱类杀虫剂是当前广泛使用的稻飞虱防控药剂。但近年来稻飞虱对新烟碱类杀虫剂产生了抗性且日益严重,因此本文对稻飞虱4种新烟碱类杀虫剂的抗性现状及发展趋势进行了概述,并提出了因地制宜合理用药、合理复配延缓抗性以及加入表面活性剂进行增效等治理稻飞虱抗药性的策略。
- 邢玉平姚琴朱兆香郭树林胡广斌陈孝仁
- 关键词：稻飞虱新烟碱类杀虫剂抗性
- 本氏烟PP2A亚基基因的表达模式和克隆
- 2018年
- 蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)由结构亚基A、催化亚基C和调节亚基B组成,控制生物体内多种生命代谢过程,但目前尚不清楚其在植物抗病中的作用。本研究利用拟南芥、普通烟草、番茄和水稻PP2A的亚基序列,比对分析获得本氏烟(Nicotiana benthamiana)中对应的亚基序列。利用实时定量RT-PCR技术,分析了6个亚基基因在辣椒疫霉侵染本氏烟阶段(灌根后8、24、72 h)以及2个结构亚基基因在本氏烟不同组织部位(根、茎、叶、花和种子)中的转录水平。结果发现,在病原物侵染时,多数基因均显著上调表达,Nb PP2Ac-4在侵染阶段的表达量显著高于其他基因;2个结构亚基基因(Nb PP2Aa-1和Nb PP2Aa-2)在茎、叶、花和种子中的表达量均显著高于在根部中的表达量。克隆获得本氏烟和辣椒中2个结构亚基基因的全长c DNA序列,它们的二级结构主要为α和η螺旋,含有保守的功能域,与其他植物和人的结构亚基具有很高的同源性。
- 陈孝仁黄沈鑫张烨李艳朋车通纪兆林
- 关键词：蛋白磷酸酶2A植物抗病性转录水平功能域辣椒疫霉
