陈小梅 作品数:9 被引量:24 H指数:2 供职机构: 浙江中医药大学附属第二医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省科技厅新苗人才计划 浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏炎症的影响研究 被引量:4 2016年 目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)基因敲除对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏炎症的影响。方法 2014年6月—2015年5月,选取40只SPF级雄性6周龄C57BL/6J小鼠和40只SPF级雄性6周龄α7n AChR基因敲除小鼠,采用随机数字表法分为C57普通饲料组、C57高脂高糖组、基因敲除普通饲料组、基因敲除高脂高糖组,每组20只。C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组小鼠给予普通饲料喂养,C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠给予高脂饲料喂养同时饮用20%果糖饮用水,喂养24周,建立NASH小鼠模型;小鼠饲养期间定期称量体质量,并且尾静脉取血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平。21周时C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠给予400μg/kg烟碱腹腔注射;C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组小鼠给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射,均1次/d,共3周。24周后处死小鼠,眼球取血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎性细胞因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察小鼠肝脏外观变化及肝脏湿重,肝脏病理切片染色观察炎症程度和脂肪变性情况。结果第12、15、18、21、24周时,C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠体质量较C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组升高(P<0.05);第12、15、18、21、24周时,基因敲除高脂高糖组小鼠体质量较C57高脂高糖组升高(P<0.05)。C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠第8、16、24周时血清ALT、AST、TG、TC水平,第24周时血清IL-6、TNF-α水平、肝脏湿重较C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组升高(P<0.05);基因敲除高脂高糖组小鼠第8、16、24周时血清ALT、AST水平,第16、24周时血清TG、TC水平,第24周时血清IL-6、TNF-α水平、肝脏湿重较C57高脂高糖组升高(P<0.05)。病理切片苏木素-伊红(HE)、油红染色结果显示: 李富强 吴小翠 徐丽娜 陈小梅 唐翠兰关键词:非酒精性脂肪性肝炎 基因敲除技术 Α7烟碱型乙酰胆碱受体 细胞因子类 炎症 烟碱型乙酰胆碱受体α7基因对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏炎症反应的作用及其机制 被引量:1 2016年 目的探讨烟碱型乙酰胆碱受体α7(α7nAChR)基因对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏炎症的作用及其机制。方法C57BL/6J小鼠和α7nAChR基因敲除小鼠饲养24周建立NASH模型,然后处死小鼠、分离培养原代肝脏巨噬细胞;给予烟碱以及内毒素处理后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)α的水平;细胞间接免疫荧光和Westemblot观察其对信号通路核因子(NF)-κB的影响;定量PCR检测巨噬细胞中Toll样受体(TLR)-4mRNA表达水平。多组间均数比较采用方差分析。结果ELISA结果表明细胞培养上清液中IL-6、TNFα浓度在基因敲除NASH小鼠内毒素+烟碱组分别为(1599±65)pg/ml、(1567±66)pg/ml,较C57NASH小鼠内毒素+烟碱组[(1465±45)pg/ml、(1433±50)pg/ml]明显升高(P值均〈0.05)。Wesetem blot结果表明磷酸化NF-κB、TLR-4的蛋白相对表达水平在基因敲除NASH小鼠内毒素+烟碱组分别为5825±60、6387±68,较C57NASH小鼠内毒素+烟碱组的5863±20、6198±63明显升高(P值均〈0.05);细胞间接免疫荧光结果也显示,基因敲除NASH小鼠内毒素+烟碱组的NF-κB荧光强度明显高于C57NASH小鼠内毒素+烟碱组。PCR结果表明TLR-4mRNA相对表达水平在基因敲除NASH小鼠内毒素+烟碱组为4.13±0.13,较C57NASH小鼠内毒素+烟碱组的2.93±0.14明显升高(P〈0.05)。结论α7nAChR基因敲除使NASH炎症反应程度加重,其作用机制可能与NF-κB信号通路不能被抑制从而加重炎症反应有关。 李富强 吴小翠 徐丽娜 陈小梅 陆思 唐翠兰关键词:枯否细胞 大鼠巨噬细胞α7-乙酰胆碱受体介导的抗炎通路对内毒素所致炎症反应的作用及机制 被引量:1 2015年 目的:探讨大鼠巨噬细胞α7-乙酰胆碱受体(α7-AChR )介导的胆碱能抗炎通路在内毒素所致炎症反应中的作用及机制。方法采用密度梯度离心的方法原代分离培养大鼠巨噬细胞,经流式细胞仪对细胞纯度进行鉴定。采用荧光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹试验( Western blot )鉴定大鼠巨噬细胞α7-AChR的表达特征。烟碱预处理原代分离培养的大鼠巨噬细胞后给予内毒素脂多糖(LPS)刺激,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度变化。 Western blot检测原代培养巨噬细胞中p-NF-κB蛋白表达。采用方差分析比较不同浓度烟碱下TNF-α的水平差异。结果荧光共聚焦显微镜下观察到原代分离培养大鼠巨噬细胞膜上存在α7-AChR。给予烟碱预处理能显著降低LPS刺激后巨噬细胞培养上清中TNF-α浓度,在烟碱浓度为0、1、10、100μmol/L 时, TNF-α的浓度分别为(2123±86)、(1486±80)、(1316±83)和(1090±77) pg/mL,随着烟碱浓度的增加,TNF-α释放量减少(t=16.33、20.18和26.83,P<0.05)。同时,不同浓度的烟碱预处理后,巨噬细胞内的p-NF-κB水平明显下降。结论激活大鼠巨噬细胞α7-AChR可以抑制内毒素诱导的炎症因子TNF-α的释放,其作用机制为通过NF-κB信号通路抑制炎症反应。 周舟 陈小梅 李富强 唐翠兰关键词:巨噬细胞 内毒素类 烟碱 α7nAChR基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定 被引量:1 2015年 目的:繁殖和鉴定烟碱型乙酰胆碱受体α7基因敲除小鼠。方法:将引进的α7n AChR基因敲除杂合子小鼠进行饲养并繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型;采用Western blot检测α7n AChR蛋白质的表达,进一步证实PCR鉴定方法的可靠性。结果:获得子代(α7n AChR+/+),子代小鼠纯合率为30%。结论:α7n AChR基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究α7n AChR缺失对非酒精性脂肪性肝炎的影响提供了理想的动物模型。 李富强 吴小翠 陈小梅 唐翠兰关键词:基因敲除小鼠 非酒精性脂肪性肝炎 尼古丁减轻高脂高果糖诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠的肝脏炎症 被引量:2 2016年 目的:探讨活化胆碱能抗炎通路对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型小鼠肝脏炎症的抑制作用及其分子机制。方法:60只雄性6周龄的无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级C57BL/6J小鼠被随机分为4组:正常饮食小鼠生理盐水注射组、正常饮食小鼠尼古丁注射组、NASH模型小鼠生理盐水注射组和NASH模型小鼠尼古丁注射组,分别给予普通饮食及高脂饮食加高果糖饮水,喂养17周后建立NASH小鼠模型,然后予各组小鼠生理盐水或尼古丁腹腔注射,每天1次,注射量为400μg/kg,注射3周。3周后处死动物进行肝组织病理检查,取小鼠血清行酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),同时原代分离培养肝巨噬细胞,使用Western blot和荧光共聚焦显微镜检测α7尼古丁型乙酰胆碱能受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptors,α7n AChR)、Toll样受体-4(Toll-like receptors-4,TLR-4)和磷酸化核转录因子-κB(nuclear factorκB of phosphorylation,p-NF-κB)的蛋白水平。结果:成功建立了NASH小鼠模型。给予小鼠尼古丁治疗后,小鼠肝组织病理结果显示,小鼠肝脏炎症和脂肪变性明显减轻;ELISA结果显示,小鼠血清中炎症因子IL-6、TNF-α水平下降;Western blot和荧光共聚焦显微镜结果显示,尼古丁治疗组小鼠α7n AChR蛋白水平上调,p-NF-κB水平下调。结论:活化胆碱能抗炎通路可以通过抑制NF-κB通路减轻NASH小鼠的肝脏炎症。 陈小梅 李富强 严速 吴小翠 唐翠兰关键词:尼古丁 炎症介导素类 小鼠 活化胆碱能抗炎通路对非酒精性脂肪性肝炎炎症反应的抑制作用及其机制 被引量:14 2015年 目的 探讨活化胆碱能抗炎通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)炎症反应的抑制作用及其机制. 方法 建立高脂高糖饮食诱导的NASH小鼠模型,在正常小鼠和NASH小鼠给予烟碱活化胆碱能抗炎通路,通过肝脏病理切片和细胞因子水平观察肝脏炎症情况;体外培养肝脏巨噬细胞系Raw264.7细胞,给予脂多糖处理后加入不同浓度的烟碱,观察细胞上清液中细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α的水平,通过Western blot观察烟碱对信号通路NF-κB和IκB的影响.多组间比较采用单因素方差分析. 结果 通过肝脏病理检查和肝功能生物化学指标检测确定造模成功.NASH小鼠给予烟碱激活胆碱能抗炎通路后,肝组织炎症程度下降;血清中TNFα水平,烟碱治疗组[(21.95±0.8)pg/ml]较等渗盐水组[(38.07±1.7) pg/ml]显著下降(P<0.05).Raw264.7细胞给予脂多糖处理后加入不同浓度的烟碱后检测上清液中TNFα水平,发现加入5 mmol/L以上浓度烟碱后能明显降低脂多糖引起的TNFα增高(P<0.05).内毒素刺激后RAw264.7细胞内p-NF-κB水平增加,I-κB水平降低,表明NF-κB通路激活,不同剂量的烟碱能明显下调p-NF-κB水平,升高I-κB水平,并表现出剂量依赖. 结论 活化胆碱能抗炎通路对NASH炎症反应有抑制作用,其作用机制可能为通过NF-κB信号通路抑制炎症反应. 周舟 陈小梅 李富强 唐翠兰关键词:枯否细胞 胆碱能激动剂 肝炎 脂肪性 非酒精性 Dubin-Johnson综合征合并胆囊结石一例 2014年 患者女,36岁.因体检发现胆囊结石10余年收住入院.入院查体:巩膜轻度黄染,无肝掌及蜘蛛痣,腹部平软,Murphy征阴性,肝脾肋下未及.实验室检查:总胆红素41 μmol/L,直接胆红素27 μmol/L,丙氨酸转氨酶16 U/L,尿胆原(+)、尿胆红素(+),乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAb、HbcAb,抗HCV均阴性.腹部B超:胆囊壁略增厚,胆囊内可见数个强回声,胆总管无增粗、无结石.术前诊断为胆囊结石伴慢性胆囊炎,遂行腹腔镜胆囊切除术. 严速 陈小梅 邓娟娟 屠金夫关键词:DUBIN-JOHNSON综合征 胆囊结石 MURPHY征 乙肝病毒标志物 丙氨酸转氨酶 腹部B超 HBV感染者中医证型与扶正化瘀法、补肾健脾法治疗研究 唐翠兰 倪伟 周舟 陈小梅 吴小翠 茹清静 李富强 项目主要技术内容:HBV携带者尽管无明显症状和体征,但部分发生了慢性肝炎、肝硬化等;因此,对本病进行早期积极的治疗具有十分重要的意义。西医对慢性HBV携带者没有特效药物,建议做肝组织学检查,但开展肝活检的难度较大。该研究...关键词: 关键词:肝纤维化治疗 肝组织学检查 中药防治 胆碱能抗炎通路对肥胖引起的炎症和胰岛素抵抗的影响 被引量:2 2014年 肥胖症是目前全球范围内迅速增加的非传染流行疾病[1]。肥胖病包括两种类型,一种称为单纯性肥胖病或获得性肥胖病,另一种是继发性肥胖病。本次讨论的是单纯性肥胖病,一种以脂肪组织中巨噬细胞浸润为特征的慢性炎症状态,也有人认为其是一种低度炎症反应综合征[2],这种巨噬细胞炎症是肥胖引起胰岛素抵抗的重要介质。 陈小梅 严速 唐翠兰关键词:慢性炎症状态 胰岛素抵抗 胆碱能抗炎通路 巨噬细胞浸润 炎症反应综合征 流行疾病