闫芳
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 供职机构：广东海洋大学水产学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 马氏珠母贝基质金属蛋白酶基因MMP-17的克隆及表达分析被引量：15
- 2015年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一种能够降解细胞外基质的蛋白水解酶。MMP-17是一种膜型基质金属蛋白酶,通过糖基磷脂酰肌醇连接于细胞表面,参与调控有机体的内环境稳定、宿主防御等多种生理过程。为研究MMP-17在马氏珠母贝免疫反应中的作用,实验运用RACE技术,克隆得到马氏珠母贝MMP-17(Pinctada martensii MMP,PmMMP-17)基因c DNA全长序列,并对其序列特征及功能进行初步分析。结果显示,Pm-MMP-17基因c DNA全长2 794 bp,开放阅读框(ORF)为1 923 bp,编码640个氨基酸,5'UTR长156bp,3'UTR长715 bp,分子量约为73.11 ku,等电点为8.98;多序列比对和系统进化树分析表明,Pm-MMP-17与其他物种的MMP具有较高的保守性,与长牡蛎的MMP-17相似性高达82%;功能结构域分析表明,Pm-M M P-17有5个高度保守的结构区域:N-末端的信号肽、前导区、催化区、铰链区和C-末端的类血红素结合蛋白区;荧光定量数据分析表明,Pm-MMP-17基因在马氏珠母贝的闭壳肌、珍珠囊、足、外套膜、血淋巴、肝胰腺、性腺、鳃等8个组织中均有表达,在血液中的表达量最高,闭壳肌和鳃次之;脂多糖(LPS)刺激后,Pm-MMP-17基因表达水平上调,12 h后达到最大值,之后又逐渐下调并恢复到正常水平。研究表明,Pm-MMP-17基因可能在马氏珠母贝的免疫反应中起着重要作用。
- 罗少杰闫芳郑哲田荣荣邓岳文焦钰
- 关键词：马氏珠母贝克隆荧光定量
- 马氏珠母贝珍珠层形成相关基因的克隆与功能研究
- 本文以实验室课题组马氏珠母贝珍珠囊转录组数据库为基础,采用生物信息学方法预测珍珠囊分泌蛋白并从中筛选与珍珠层形成相关的关键基因,然后对候选基因进行了全长克隆、表达分析,并利用RNA干扰结合荧光定量和扫描电镜的方法对其在珍...
- 闫芳
- 关键词：马氏珠母贝成骨蛋白-1金属蛋白酶组织抑制剂
- 文献传递
- 马氏珠母贝CyPB基因的克隆与表达分析被引量：3
- 2015年
- 为了探究亲环蛋白B(Cy PB)在马氏珠母贝中的作用机制,运用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到马氏珠母贝Cy PB基因(Pm Cy PB)c DNA的全长序列,并且应用实时荧光定量PCR技术对Pm Cy PB基因在马氏珠母贝不同组织中的表达进行检测。结果显示,Pm Cy PB基因序列全长1266 bp,其中开放阅读框(ORF)为678 bp,编码225个氨基酸,5′-UTR为62 bp,3′-UTR为526 bp。预测其相对分子量为24829.3,理论等电点5.77。多序列比对结果显示Pm Cy PB基因与其他物种的Cy PB具有较高的保守性。SMART软件对Pm Cy PB进行蛋白质序列分析,发现它包含亲环蛋白家族典型的肽脯氨酰顺反异构酶的结构域。实时荧光定量PCR数据分析表明,该Pm Cy PB基因在马氏珠母贝闭壳肌、肝胰腺、血细胞、外套膜、足、性腺、鳃这7种组织中均有表达,在外套膜表达量最高,其次是鳃。结果可为进一步阐述Pm Cy PB在马氏珠母贝中的免疫防御机制提供一定的理论基础。
- 田荣荣闫芳杜晓东焦钰黄荣莲王庆恒邓岳文
- 关键词：马氏珠母贝CYPB基因克隆荧光定量
- 马氏珠母贝外套膜中央膜与边缘膜荧光定量PCR分析中内参基因的筛选
- 2014年
- 为筛选能在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域稳定表达的内参基因,应用荧光定量PCR技术,对3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、β-肌动蛋白(β-actin)、胆色素原脱氨酶(PBGD)、微管蛋白(TUB)、TATA盒结合蛋白(TBP)、磷脂酶A2(PLA-2)、葡萄糖苷酶(GUSB)、18S核糖体r RNA(18Sr RNA)等8个常用的内参基因在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域的表达情况进行分析,并利用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper及Ref Finder软件对8个内参基因的表达稳定性进行分析。结果表明:8个内参基因均可获得特异性扩增产物,但稳定性各异,其在外套膜边缘膜和中央膜区的表达稳定性顺序依次为PBGD/TBP>TUB>GUSB>18Sr RNA>PLA-2>GAPDH>β-actin;在荧光定量PCR中,PBGD和TBP在马氏珠母贝外套膜边缘膜和中央膜区的表达比较稳定,为研究贝壳矿化机制中理想的内参基因。
- 闫芳罗少杰田群莉焦钰邓岳文
- 关键词：荧光定量PCR内参基因马氏珠母贝
