张霞
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北医科大学实验动物学部更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达
- 2007年
- 腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上,目前的研究主要集中在人腺病毒,犬传染性肝炎病毒(即犬腺病毒Ⅰ型)尚未见报道。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物,提取ICHV基因组DNA,分别PCR扩增六邻体蛋白(Hexon)的Loop1、Loop2基因片段,用T4酶连接在一起,克隆入原核表达载体pET28a中,测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%;Loop2与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌,实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分子质量约为36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1:320以上,western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。
- 郑龙王俊霞李丽敏张霞张焕铃尤红煜
- 关键词：犬传染性肝炎病毒
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达被引量：4
- 2007年
- 腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上,目前的研究主要集中在人腺病毒,犬传染性肝炎病毒(即犬腺病毒Ⅰ型)尚未见报道。参考Genebank发表的基因序列设计引物,提取ICHV基因组DNA,,分别PCR扩增六邻体蛋白(Hexon)的Loop1、Loop2基因片段,用T4酶连接在一起,克隆入原核表达载体pET28a中,测序显示保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和Toronto A26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%;Loop2与CLL株、RI261株和Toronto A26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌,实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分子量约为36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1320以上,western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。该实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。
- 郑龙王俊霞李丽敏张霞张焕铃尤红煜
- 关键词：犬传染性肝炎病毒
