何蕾
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国科学院沈阳应用生态研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生化学工程更多>>
- 改进MSAP-PCR技术应用于Cd胁迫下拟南芥DNA甲基化分析被引量：5
- 2015年
- 全基因组DNA甲基化分析是植物胁迫表观遗传损伤研究的主要方向之一,目前可用手段虽多,然而多数较繁琐,不利于表观遗传损伤的快速诊断。为此应用MSAP-PCR法研究Cd胁迫下拟南芥基因组甲基化变化,并通过优化实验条件、筛选引物(共5条,包括通用引物MLG2和本实验室设计引物AP-1、AP-2、AP-3、AP-4)以及检验多态性和敏感性,综合评估该方法在植物甲基化研究中的应用前景。研究结果发现:该方法模板量选择在150~250 ng并使用4%聚丙烯酰胺凝胶电泳(含50%尿素)分辨PCR产物多态性最佳;该方法对镉敏感性高,在0.2 mg·L-1Cd2+水平就可检测约30个位点的甲基化多态性;引物AP-4对Cp G位点甲基化变化最敏感,而AP-3对CHG位点甲基化变化敏感性最高。该方法操作简便、成本低廉、结果准确且敏感性高,可作为植物全基因组甲基化研究的理想方法,以及植物抗逆研究和环境污染早期诊断的生物胁迫标记物。
- 王鹤潼何蕾宋杰孙梨宗崔伟娜台培东贾春云刘宛
- 关键词：拟南芥生物标记物
- 一种降低茄类作物可食用部位镉（Cd）含量的方法
- 本发明属污染土壤安全利用领域，尤其涉及一种降低茄类作物可食用部位镉(Cd)含量的方法。以托鲁巴姆(Solanum torvum)为砧木，以茄类作物为接穗进行嫁接，进而降低茄类作物可食用部位镉(Cd)含量。与接穗自根作物相...
- 孙梨宗台培东原红红何蕾薛晨阳
- 文献传递
- Cd胁迫诱导拟南芥幼苗DNA损伤分析被引量：6
- 2017年
- 以拟南芥为供试植物,通过基于随机引物扩增多态性(RAPD)法的DNA损伤分析,酶联免疫吸附(ELISA)法的DNA甲基化分析以及Real-time PCR的DNA损伤修复与细胞周期相关基因的表达分析,研究了Cd(0、0.125、0.25、1.0、2.5 mg·L^(-1))胁迫5 d的拟南芥幼苗DNA损伤、DNA损伤修复系统以及细胞周期对胁迫的响应。结果显示,随Cd浓度的增加DNA损伤加剧,全基因组甲基化水平较对照组显著增加(P<0.01或P<0.05),细胞周期调控基因PCNA1、PCNA2,错配修复(MMR)基因MLH1、MSH_2、MSH6,非同源末端连接(NHEJ)标志基因KU70、MRE11、GR1,同源重组(HR)标志基因RAD51、BRCA1的表达均与Cd胁迫浓度呈明显的倒U型剂量效应关系,DNA修复系统对Cd胁迫的敏感性依次为MMR>HR>NHEJ。该结果表明:轻度Cd胁迫主要引起DNA错配损伤,并且该损伤易修复;随着Cd胁迫的增强,会引起DNA断裂与染色体损伤,损伤较难修复。另外,对Cd胁迫响应最敏感的MSH6、MLH1基因可作为表征Cd胁迫对于拟南芥遗传毒性效应的有效生物标记物。
- 宋婕王鹤潼崔伟娜孙梨宗曹霞何蕾姜丽思成智博惠秀娟台培东杨悦锁刘宛
- 关键词：CDDNA损伤修复DNA修复细胞周期
- 镉胁迫对拟南芥MLH1基因启动子甲基化水平的影响
- 近年来,土壤重金属污染日益严峻,严重影响了我国农业的可持续发展和生态环境质量,并且,重金属还可以在食物链上进行累积,从而危害到作为最高营养级的人类。由此可见,土壤重金属污染的早期诊断方法尤为重要。最初的诊断方法主要是化学...
- 何蕾
- 关键词：生物标记物启动子甲基化
- 文献传递
- 拟南芥miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p靶向MSH6基因参与Cd应激响应被引量：2
- 2019年
- MSH6在激活细胞周期阻滞和修复镉诱导的DNA损伤等方面具有重要功能。本研究以拟南芥为实验材料,通过生物信息学分析发现,MSH6具有miRNA172b-5p、miRNA172e-5p、miRNA472-3p等microRNAs(miRNAs)的作用靶点。利用烟草双荧光素酶报告系统体外验证检测发现,与阴性对照组相比,miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p均可显著抑制荧光素酶的相对活性,其比值分别下降了25.5%、47.2%和49.5%。采用拟南芥植株瞬时侵染体内验证结果显示,miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p分别上升了178.9%、123.6%和37.6%;同时,qRT-PCR(real time quantitative reverse transcript polymerase chain reaction)结果表明,拟南芥幼苗在1.25、2.5、4.0 mg·L-1Cd胁迫7 d后,与对照组相比,MSH6表达显著降低,分别下降了20.3%、22.7%和38.2%。而miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p表达显著增加,二者呈显著的负相关关系(r=-0.997,P<0.01;r=-0.997,P<0.01;r=-0.952,P<0.05),表明miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p是拟南芥Cd胁迫响应的miRNAs,并且靶向MSH6基因。本研究为DNA mismatch repair(MMR)对Cd毒理调控机制的研究提供miRNA理论基础。
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- 关键词：CDMIRNA农杆菌侵染
- 植物位点特异性甲基化研究的引物设计及PCR体系优化被引量：2
- 2016年
- 通过设计大量引物,探索在植物甲基化引物设计中长、短引物的设计方法及其相应的PCR条件,同时比较不同Taq酶对甲基化率影响。结果表明：17~30 bp短引物适合使用Touch-down程序PCR,但特异性差、成功率低;31~50 bp长引物使用55℃退火60℃延伸的PCR条件成功率最高,其中反向引物的长度及Tm小于正向引物较佳;高保真酶因其3′→5′外切酶活性不宜用于甲基化研究,而Epi TaqTMHS在PCR结果中表现最佳。
- 王鹤潼宋婕崔伟娜曹霞何蕾贾春云惠秀娟台培东成智博刘宛
- 关键词：引物设计
- 盐酸小檗碱对小鼠肝、脾、肾细胞DNA损伤的比较研究被引量：1
- 2016年
- 通过彗星试验比较研究了盐酸小檗碱对小鼠肝、脾、肾细胞的DNA损伤。设置6个不同剂量组(阴性对照组、7.5、15、30、60、120 mg/kg组)对小鼠进行30 h灌胃方式染毒,末次染毒6 h后小鼠颈椎脱臼处死。检测小鼠肝、脾、肾细胞的彗星细胞率、彗星尾长及尾矩。结果表明:(1)盐酸小檗碱可引起上述3种受试器官的DNA损伤,且随剂量增加,DNA损伤增加(P<0.05),呈显著的剂量-效应关系。(2)比较同剂量组不同器官之间的彗星细胞率、彗星尾长及彗星尾矩,3个剂量组均为肾细胞>脾细胞>肝细胞,并存在器官间显著差异(P<0.05)。一定剂量盐酸小檗碱对小鼠肝、脾、肾细胞造成了DNA损伤,具有一定的遗传毒性,比较研究发现肾细胞对盐酸小檗碱致DNA损伤最为敏感。
- 何蕾王璐惠秀娟刘宛宋婕徐成斌王鹤潼
- 关键词：盐酸小檗碱DNA损伤彗星试验小鼠
- 铜胁迫对拟南芥幼苗生长和基因组DNA甲基化的影响被引量：9
- 2015年
- 通过Murashige and Skoog（M＆S）培养实验,利用甲基化敏感扩增多态性（methylation-sensitive amplified polymorphism,MSAP）技术研究Cu2＋胁迫对拟南芥幼苗基因组DNA甲基化水平与甲基化模式的变化,同时比较其与幼苗鲜重、根系生长对Cu2＋胁迫的敏感性。结果表明：0、0.25、1.0 mg獉L-1Cu2＋处理15 d后,幼苗根长及鲜重变化差异不显著,而幼苗基因组MSAP率随Cu2＋浓度的增加呈先增高后降低的趋势,分别为15.93%、16.28%和15.83%;高浓度Cu2＋胁迫下（3.0 mg獉L-1）,根长显著变短,鲜重显著降低,MSAP率为14.26%;Cu2＋胁迫（0.25~3.0 mg獉L-1）下,拟南芥幼苗基因组超甲基化（M型）位点及去甲基化（D型）位点数均呈显著增加趋势,Msp I酶较Hpa II酶对胁迫反应更敏感。因此,拟南芥幼苗MSAP变化对低浓度Cu2＋胁迫响应敏感,可作为Cu污染的早期诊断和生态风险评价。
- 陈瑞娟何蕾孙梨宗王鹤潼宋婕刘宛
- 关键词：DNA甲基化拟南芥CU胁迫
- DNA甲基化及其检测技术
- 表观遗传学是分子遗传学研究的一个热点,DNA甲基化作为细胞记忆的一种机制,在维持正常细胞功能、遗传印记以及肿瘤发生中发挥着重要作用,是表观遗传学的核心领域之一。本文概述了DNA甲基化的相关机制,其中包括DNA甲基化模式特...
- 何蕾惠秀娟
- 关键词：DNA甲基化测序技术芯片技术
- 拟南芥MLH1基因启动子甲基化作为镉胁迫生物标记物潜力评估被引量：3
- 2016年
- 应用重亚硫酸盐测序技术,研究了镉(Cd)胁迫21 d后拟南芥幼苗错配修复基因Mut L-homologue1(MLH1)启动子甲基化的变化趋势。结果显示,拟南芥MLH1启动子区域为-346^+42(391 bp),含有71个胞嘧啶:16个Cp G、6个CHG(H为C、A或T)和49个CHH位点。对照植株Cp G、CHH和CHG位点的甲基化率分别为44.8%、40.5%和52.0%。随Cd胁迫浓度的增加,MLH1启动子区胞嘧啶位点发生超甲基化和去甲基化的位点数逐渐增加;这些位点的甲基化率均呈上升趋势,且均高于对照组(除CHG位点外)。MLH1启动子区域71个胞嘧啶中,Cp G6、Cp G9、CHH44和CHG4位点的甲基化多态性对Cd胁迫更敏感,且具有剂量-效应关系;其中0.25 mg·L-1Cd胁迫下,Cp G9位点为超甲基化,其甲基化变化率为20.0%,其他3个位点为去甲基化,其甲基化变化率分别为12.0%、20.0%和20.0%。相对于幼苗的其他生物学性状(叶片数、生物量及叶绿素含量),Cd胁迫下MLH1启动子甲基化变化更显著且敏感,上述4个胞嘧啶热点的甲基化多态性可作为检测Cd胁迫对植物遗传毒性效应潜在的、有效的生物标记物。
- 何蕾王鹤潼宋婕崔伟娜曹霞惠秀娟台培东杨悦锁刘宛
- 关键词：生物标记物拟南芥甲基化
