覃婷
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市科委地方病重大专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建日本血吸虫重组质粒pGEX—Sjl4—3—3-Sj32，探讨重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达。方法以重庆医科大学附属第-医院传染病寄生虫病研究所保存的质粒pGEX—sj14—3-3和pET28ct。Si32为模板，通过PCR扩增Sil4—3-3和Si32抗原编码基因，然后采用基因拼接法（geneSOEing）剪接Sil4-3-3和Sj32基因，得到Sjl4-3-3-Sj32融合基因。定向克隆人穿梭载体pGEX-1kT，构建重组质粒pGEX-Sjl4-33Sj32，并采用双酶切法进行验证。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基硫代-B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Westernblot）法对表达产物进行分析鉴定。结果基因拼接法得到约1750bp的Sjl4—3—3-Sj32融合基因；双酶切证实sj14-3-3-Sj32融合基因成功插入pGEX-1kT载体中；SDS—PAGE分析显示，表达产物为相对分子质量约为73×100的重组蛋白；Westernblot显示，重组蛋白可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建日本血吸虫重组质粒pGEX—sj14-33Sj32，该重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中得到了高效融合表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
- 覃婷李文桂谭建蓉
- 关键词：血吸虫质粒大肠埃希菌
- 日本血吸虫重组两歧双歧杆菌疫苗的构建及其表达被引量：5
- 2017年
- 目的构建及鉴定日本血吸虫（Sj）重组两歧双歧杆菌（Bb）疫苗[Bb（pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3）]，并研究融合基因Sj26GST—Sj14—3—3在Bb中的表达情况。方法将重组质粒pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3电转化至Bb中，构建重组Bb（pGEX—SjZ6GST-Sj14-3—3）疫苗，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达。采用双酶切和聚合酶链式反应（PCR）鉴定重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14—3—3）疫苗，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果双酶切及PCR证实重组质粒pGEX—SjZ6GST—Si14—3—3成功转入Bb中。SDS—PAGE鉴定结果显示，诱导表达产物是相对分子质量约为67×10^3的重组蛋白，与预期结果相符。蛋13免疫印迹法鉴定结果显示，重组蛋白能被Sj感染的兔血清所识别。结论成功构建Sj重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14-3—3）疫苗，Rb可表达具有特异抗原性的Sj26GST—Sj14—3．3重组蛋白。
- 罗广旭李文桂覃婷
- 关键词：融合基因两歧双歧杆菌疫苗
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗免疫BALB/c小鼠诱导免疫应答的动态研究被引量：3
- 2015年
- 目的动态观察日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答,探讨该疫苗的免疫机制。方法将日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗分别经口服（PO）和滴鼻（IN）途径免疫BALB/c小鼠,在免疫后0~20周,每隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖水平、流式细胞仪（FACsort）检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群和脾细胞凋亡、双抗体夹心ELISA法检测血清及脾细胞培养上清液中细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平和血清抗体IgG及其亚类、IgE和IgA的动态变化。结果当SjAWA和ConA刺激或不刺激时,PO组和IN组脾细胞增殖水平均于免疫后6周达最高水平,分别于6周和8周达最高脾细胞凋亡发生率,脾CD4＋T细胞亚群百分比分别在6周和8周达峰值,两组CD8＋T细胞亚群百分比在免疫后2~20周升高不显著,PO组脾细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平均分别于10周、6周和8周达峰值,IN组分别在10周、8周和8周达峰值,口服组血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA水平均于8周达峰值,而IN组除IgG和IgA于8周达峰值外,其余均于12周达最高水平,IgE于14周达峰值,两组血清细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平分别在免疫后（PO组）14、6和8周及（IN组）8、6和8周达最高水平。结论该疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫免疫
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗的构建及其表达被引量：2
- 2016年
- 目的构建和鉴定日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,并研究日本血吸虫Sj14-3-3-Sj32融合基因在两歧双歧杆菌中的表达情况。方法将重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32电转化至两歧双歧杆菌中,构建重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定。结果酶切、PCR证实重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32成功转入两歧双歧杆菌中,SDS-PAGE分析显示,诱导表达产物为相对分子质量(Mr)约73kDa的重组蛋白,与预期结果相符,表达的蛋白占菌体总蛋白的8.2%。Western blot显示日本血吸虫感染的兔血清可识别所表达的重组蛋白。结论成功构建日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,双歧杆菌可表达具有特异的抗原性的Sj14-3-3-Sj32重组蛋白。
- 覃婷李文桂谭建蓉
- 关键词：日本血吸虫双歧杆菌
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗诱导BALB/c小鼠免疫应答的动态研究
- 血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一,本研究将日本血吸虫重组Bb(p GEX-Sj26GST)疫苗经口服和鼻腔黏膜两种途径免疫小鼠,观察免疫后不同时间点脾细胞增殖、亚...
- 李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫免疫应答
- 文献传递
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、亚群及细胞因子的动态变化被引量：5
- 2015年
- 目的观察日本血吸虫重组Bb（p GEX-Sj32）疫苗诱导免疫鼠脾细胞免疫应答的动态变化,探讨该重组疫苗的免疫机制。方法 88只BALB/c鼠随机分为口服组和滴鼻组,口服组小鼠经口服单次接种106克隆形成单位（CFU）重组疫苗,滴鼻组小鼠经滴鼻单次接种105CFU重组疫苗;于免疫后0~20周内间隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,分别经未刺激（脾细胞悬液）、Sj AWA刺激和Con A刺激培养。MTT法检测脾细胞增殖效率,流式细胞术检测脾CD4＋T细胞和CD8＋T细胞亚群变化,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TNF-α、IL-10和IL-12表达水平。结果与0周相比,未刺激、Sj AWA刺激和Con A刺激时,口服组和滴鼻组脾细胞均分别在免疫后2~16周和2~18周发生极显著增殖（P〈0.01）;两组CD4＋T细胞亚群均于免疫后2~12周显著升高（P〈0.01）,CD8＋T细胞亚群在观察期间升高不明显;不同培养条件下,口服组脾细胞因子TNF-α、IL-10和IL-12水平均分别在免疫后2~14周、2~18周和2~14周升高,于8周、10周和6周达峰值;滴鼻组3者分别在免疫后2~14周、2~18周和2~18周升高,于8周、10周和8周达峰值。结论日本血吸虫重组Bb（p GEX-32）疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫细胞增殖细胞因子
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导小鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群变化的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群的动态变化。方法将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经口服和滴鼻接种日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周每组剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,经SjAWA刺激培养(设原液和ConA刺激对照组)后采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测脾细胞增殖情况;经Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染色后采用流式细胞仪检测脾细胞凋亡率;采用流式细胞仪检测免疫小鼠脾CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群百分比。结果口服组和滴鼻组小鼠脾细胞增殖均于免疫后6周(口服组原液、SjAWA刺激及ConA刺激时分别为0.609±0.144、0.638±0.013及0.638±0.013;滴鼻组三者分别为:0.687±0.009、0.705±0.006及0.728±0.002)达高峰;口服免疫组小鼠脾细胞凋亡率无论有无刺激物作用,均在免疫后4周(原液和ConA刺激组峰值分别为0.092±0.005和0.126±0.002)达最高水平,而滴鼻免疫组在免疫后8周(原液和ConA刺激组峰值分别为0.086±0.005和0.109±0.008)达峰值;口服组CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群分别于免疫后6周(0.321±0.001)和8周(0.080±0.001)达峰值,滴鼻组CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群分别于免疫后8周(0.327±0.010)和12周(0.082±0.002)达峰值,口服组较滴鼻组峰值提前。结论日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖、T细胞亚群升高和抑制脾细胞凋亡,产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：两歧双歧杆菌细胞增殖
