目的研究TNF-α对主动脉平滑肌细胞(VSMC)内1型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3RⅠ)表达的影响,揭示TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克的发生机制。方法原代分离培养大鼠VSMC。按TNF-α处理的不同时间点(0、4、8、24h)分4组。分别应用Western blot、免疫荧光、RT-PCR、双荧光素酶检测方法,观察TNF-α对IP3RⅠmRNA、蛋白表达及其启动子活性的影响。结果 TNF-α处理组细胞内IP3RⅠ分布未见变化,8、24h组荧光强度增强提示IP3RⅠ蛋白含量增加,IP3RⅠ蛋白表达升高(4h:1.059±0.005 vs 1.000±0.002,P=0.010;8h:2.416±0.042 vs 1.000±0.002,P<0.01;24h:2.138±0.010vs 1.000±0.002,P<0.01,n=9),IP3RⅠmRNA表达明显增加(4h:2.260±0.889 vs 1.00±0.02,P=0.193;8h:5.449±2.279 vs1.00±0.02,P=0.000;24h:3.049±1.684 vs 1.00±0.02,P=0.042,n=9)。转染PGL3-IP3RⅠpromoter质粒后TNF-α组IP3RⅠ启动子活性明显增强(3.56±0.65 vs 1.00±0.05,P=0.020,n=9)。结论 TNF-α可上调IP3RⅠ基因启动子活性,从而引起IP3RⅠ蛋白表达升高,增强VSMC内IP3Rs系统介导的Ca2+释放作用,这可能是TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克血管调控的机制之一。
目的探讨合并肺炎的甲型H1N1流感患者血浆中相关细胞因子、C反应蛋白(CRP)及T淋巴细胞计数在病程中的变化特征,为临床早期诊断与治疗提供参考。方法检测16例合并肺炎的住院甲型H1N1流感患者血浆中相关细胞因子[γ干扰素(IFN-γ),白细胞介素6(IL-6),白细胞介素8(IL-8),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),转化生长因子-β1(TGF-β1)]水平、CRP及T淋巴细胞计数的变化。根据患者入院时血气分析中动脉血氧分压(PaO2)水平,分为重症组(PaO2<60 mm Hg)9例与轻症组(PaO2≥60 mm Hg)7例;另设健康对照组8例。结果治疗前后(发病第7天、14天采血样),各组IFN-γ,IL-6,IL-8,TNF-α等水平变化无统计学意义(P>0.05),各组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。治疗前重症组TGF-β1水平较轻症组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后重症组TGF-β1仍维持较高水平,与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05),部分病例在恢复期(体温正常,气短减轻,血氧正常)发现肺纤维化征象。CRP水平的升高与低淋巴细胞血症在重症组和轻症组均常见,但重症组治疗前淋巴细胞总数更低,与轻症组相比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组低淋巴细胞血症明显改善,与治疗前相比差异均有统计学意义(P<0.05),CRP水平的明显下降仅见于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05)。所有幸存者的CRP水平与淋巴细胞总数均迅速地恢复至正常,相反,治疗后CRP水平无明显下降者及淋巴细胞总数无明显上升者预后较差。结论通过对血浆相关细胞因子水平(IFN-γ,IL-6,IL-8,TNF-α,TGF-β1)的测定发现,合并肺炎的甲型H1N1流感病例血浆中,只有TGF-β1是过度产生的;其他细胞因子水平无变化的原因可能与大部分入选病例使用糖皮质激素有关,糖皮质激素可抑制机体针对甲型H1N1流感病毒感染的免疫反应。治疗前血中TGF-β1水平、T淋巴细胞总数与疾病严重性有关,可能对疾病严重性�
目的:探讨大鼠气管上皮损伤后,气管干细胞增殖分化过程中Shh信号通路的动态变化。方法:应用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱发气管上皮损伤,通过RT-PCR检测气管上皮Shh的表达。结果:5-FU作用30 m in后大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,仅残留少量裸核样G0期细胞位于基底膜上。之后细胞数目逐渐增多,经过扁平、立方形态,向纤毛细胞、黏液细胞、基底细胞等分化,去除5-FU后48 h接近恢复假复层纤毛柱状上皮;正常气管上皮及5-FU作用30 m in气管上皮Shh无表达,去除5-FU恢复3 h后Shh轻度表达,6 h后表达增强,12 h达高峰,之后表达减弱,48 h已极微弱。结论:Shh参与了气管干细胞的增殖分化过程。
