汪启翰
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用CRISPR/Cas系统快速高效构建血友病乙小鼠模型被引量：9
- 2015年
- 血友病乙是由凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病,为伴X染色体隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义,而基因组编辑技术又为小鼠模型的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Cas系统,在小鼠FⅨ基因第8外显子上选择靶位点,将Cas9 m RNA和带有靶位点的sg RNA显微注射到C57BL/6品系小鼠的受精卵中,获得基因修饰的小鼠。利用高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting,HRM)技术进行精确基因分型,并通过测序验证,在60只小鼠中,总共有51只小鼠的靶位点发生了突变,突变率高达85%,其中雄鼠的突变率为79.5%,雌鼠的突变率为95.2%;未检测到非目标位置的基因编辑脱靶。凝血活性实验显示,突变小鼠的FⅨ活性值(FactorⅨcoagulant activity,FⅨ:C)是非突变小鼠的6.82%,大大低于非突变小鼠,表明突变小鼠的凝血活性缺失。本研究表明,利用CRISPR/Cas系统成功构建了人类血友病乙遗传病小鼠模型。
- 汪启翰怀聪孙瑞林庄华陈红岩费俭卢大儒
- 关键词：血友病乙小鼠模型
- 利用CRISPR/Cas系统对血友病B小鼠进行基因纠正的初步探索
- 2015年
- 血友病B是人类常见的X染色体遗传的隐性遗传疾病,目前对于遗传疾病的治疗还没有很好的办法,通过基因治疗可以实现对遗传病的彻底治愈。本研究利用高效基因编辑技术CRISPR/Cas系统,对血友病B小鼠尝试基因修复进行初步的探索,将突变的凝血因子IX(Factor IX,FIX)基因进行同源替换,修复为正常序列。本研究中将同一种纯合突变类型的小鼠交配之后得到的受精卵,进行细胞核显微注射。对收集到的8枚囊胚的基因组中的靶位点,进行巢氏PCR扩增,直接进行测序检测基因型序列。检测结果为4枚囊胚的基因被成功编辑,其中3枚囊胚为靶序列的基因敲除突变,而有1枚囊胚成功进行同源重组,实现基因纠正。
- 汪启翰孙瑞林怀聪卢大儒
- 关键词：血友病BCRISPR基因治疗基因修复
- 利用CRISPR系统高效快速构建血友病B小鼠模型
- 血友病B为凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)基因突变或缺失导致的FⅨ蛋白功能异常或缺失引发的凝血功能障碍.传统上,血友病小鼠的模型构建采用同源重组的方法,该方法虽能大片段地造成基因缺失,抑制FⅨ活性,但其耗时长,筛选纯合...
- 汪启翰怀聪孙瑞林周宇庄华陈红岩费俭卢大儒
