王欣荣
- 作品数：14 被引量：27H指数：4
- 供职机构：成都大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>
- D-环丝氨酸抑制铜绿假单胞菌群体感应活性研究被引量：4
- 2021年
- 目的以铜绿假单胞菌模式菌株PAO1为研究对象,研究抗结核药物D-环丝氨酸通过靶向抑制病原菌群体感应(quorum-sensing,QS)系统实现抑制病原菌毒力发挥的新应用潜力。方法用不同浓度的D-环丝氨酸处理铜绿假单胞菌,通过系列表型实验结合荧光定量PCR以评估D-环丝氨酸对群体感应所调节的毒力因子和相应基因表达的影响,并利用秀丽隐杆线虫感染模型评估D-环丝氨酸对铜绿假单胞菌毒力抑制的体内活性。结果 D-环丝氨酸表现出良好的铜绿假单胞菌生物膜、绿脓菌素以及蛋白水解酶抑制活性,显著抑制了QS系统调控基因和下游功能基因的表达,并且可以显著提高秀丽隐杆线虫在铜绿假单胞菌感染过程的存活率。结论 D-环丝氨酸可以有效抑制铜绿假单胞菌群体感应系统,有望开发成功的抗生素替代药物。
- 付如意褚以文李静赵克雷林家富邓俊丰王欣荣
- 关键词：铜绿假单胞菌毒力因子
- α-氨基酸酯水解酶突变体催化合成头孢丙烯被引量：2
- 2014年
- 目的通过α-氨基酸酯水解酶突变体合成头孢丙烯的工艺条件实验,获得相关实验数据,为推行头孢丙烯的绿色生产技术打下基础。方法通过定向进化对野生型α-氨基酸酯水解酶进行改造,用突变体酶催化合成头孢丙烯,考察了包括pH、温度、酶浓度、母核/侧链投料比及有机溶剂等多个因素对酶法合成头孢丙烯的影响。结果对野生型AEH酶进行分子改造,筛选出一株突变体。动力学数据分析表明,突变体酶比野生型更适合用于头孢丙烯的合成。在突变体酶催化合成头孢丙烯的过程中,体系最适合的pH为6.0;最适温度为30℃;底物浓度为50mmol/L;最适的母核侧链比为1:2;最适的反应体系为15%异丙醇-水溶液。结论相对于野生型的α-氨基酸酯水解酶,该突变体更适合用于头孢丙烯的合成,实验数据为头孢丙烯酶法合成的实际应用打下基础。
- 潘月李端华王佳珉王辂王欣荣
- 关键词：头孢丙烯突变体
- 亲水作用色谱法测定纽莫康定B0及其杂质的研究被引量：5
- 2016年
- 目的建立同时检测纽莫康定发酵液中纽莫康定A0、Bo和C0的含量的HILIC方法a方法采用Xlon色谱柱（4．6mm×250mm，10μm）进行分离，以乙腈和水（87：13）为流动相；流速为2．0mL／min;检测波长：210rim；柱温：30℃进样量10此。结果纽莫康定A0、B0和c0三者质量浓度与峰面积分别在0．23-150μg／mL、0．12～100μg／mL、0．34～70μg／mL范围内线性关系良好，尺。均大于0．9993，平均加样回收率分别为96．73％（RSD，1．52％）、99．62％（RSD，1．77％）、102．35％（RSD，2．08％）。结论HILIC法同时检测纽莫康定A0、Bo和co含量的方法简单可行、精密度高、重复性好，为工业生产中分离纯化及质量控制提供依据。
- 杨渊孟慧云王欣荣翟龙飞褚以文
- 关键词：亲水作用色谱
- 丝状真菌Glarea lozoyensis SIIA-F1108产纽莫康定B_0发酵条件的研究
- 2016年
- 【目的】采用响应面法优化丝状真菌Glarea lozoyensis SIIA-F1108发酵生产纽莫康定B_0培养基,提高发酵产量;通过氮源优化,降低发酵液菌体浓度,改善发酵过程的溶氧水平。【方法】采用Plackett-Burman设计和响应面法进行培养基优化,筛选出对纽莫康定B_0产量具有显著影响的因素;通过最陡爬坡实验及Box-Behnken设计,并利用Design-Expert软件对实验数据进行回归分析,得到优化的发酵培养基配方;通过对优化培养基中氮源组分进行全因子实验,最终得到高产量和低菌体浓度发酵培养基。【结果】实验数据表明:甘露醇、脯氨酸和葡萄糖对纽莫康定B_0产量影响最大;最佳浓度分别为甘露醇167.3 g/L、脯氨酸26.1 g/L、葡萄糖28.5 g/L。采用优化后的培养基进行摇瓶发酵,纽莫康定B_0产量达到了1 840 mg/L,较优化前提高了42%,与预测结果一致。用硫酸铵部分替换棉籽饼粉后,发酵液菌体浓度降低,在100 L发酵罐上对优化后的结果做了进一步的验证,纽莫康定B_0产量达到1 980 mg/L。【结论】模型预测值与实验值有较高吻合度,具备较高可信度和显著性,发酵产量提高了42%,响应面实验设计和分析方法能够有效地用于丝状真菌Glarea lozoyensis SIIA-F1108产纽莫康定B_0发酵培养基进行优化。通过调整培养基中的氮源组成,降低了发酵液菌体浓度,改善了发酵过程的溶氧水平。
- 杨渊孟慧云王欣荣詹良静张新宜
- 关键词：响应面法发酵培养基
- 林麝化脓病病原菌化脓隐秘杆菌与铜绿假单胞菌互作机制研究被引量：3
- 2020年
- 化脓隐秘杆菌Trueperella pyogenes是我国Ⅰ级重点保护野生动物林麝Moschus berezovskii的化脓病原发病原菌,但在化脓病后期的病灶中常能检测到大量铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。虽然在病灶中能同时分离到这2种病原菌,但是它们的种间关系以及优势菌转换机制很大程度上未知。本研究通过构建多种铜绿假单胞菌群体感应基因敲除菌株并结合平板距离培养实验,探讨了化脓隐秘杆菌与铜绿假单胞菌的种间互作关系。结果发现,野生型铜绿假单胞菌的胞外产物可以显著抑制化脓隐秘杆菌的生长;不同铜绿假单胞菌群体感应关键基因缺失菌株均表现出对化脓隐秘杆菌不同程度的抑制作用,但与单突变菌株相比,lasR和rhlR双突变菌株对化脓隐秘杆菌的抑制作用明显减弱。这些发现表明,铜绿假单胞菌可以通过群体感应系统介导的胞外产物来提高对化脓隐秘杆菌的竞争优势。因此,本研究为林麝化脓病过程中的优势病原菌的替换和病情恶化甚至死亡提供了合理的解释,也有助于进一步提高对林麝化脓病病理的认识、治疗方案的改进和新型抗感染药物的研发。
- 袁阳李静张爱雪林家富褚以文王欣荣赵克雷
- 关键词：林麝化脓隐秘杆菌铜绿假单胞菌种间相互作用
- 非达霉素产生菌氮离子注入诱变及其发酵培养基优化被引量：1
- 2016年
- 目的通过氮离子注入对游动放线菌(Actinoplanes deccanensis)SIIA-A2098进行诱变、筛选高产突变株,并采用响应面法对突变株的发酵培养基进行优化,以提高非达霉素产量。方法采用多剂量氮离子注入对菌株SIIA-A2098进行诱变选育高产突变株。采用Plackett-Burman设计法筛选出影响突变株发酵的显著因素,然后采用CDD设计法分析优化显著影响因素参数。结果与结论氮离子注入得到非达霉素高产突变株SIIA M3510,产量为92.8μg/m L,是野生型菌株产量(11.5μg/m L)的8倍。Plackett-Burman设计法筛选出3个显著影响因素为葡萄糖、鱼粉蛋白胨和豆油,响应面法优化出它们的最佳数值分别为2.919%、0.644%和1.078%。在此优化条件下,摇瓶非达霉素发酵产量达到约244.75μg/m L,较优化前提高40.04%。
- 吕维勋林家富任风芝张雪霞王欣荣
- 关键词：氮离子注入菌种选育响应面法
- Paraglaciecola hydrolytica中新型β-琼胶酶Aga2的异源表达及酶学性质分析
- 2022年
- 琼胶寡糖具有抗氧化、抗肿瘤和调节肠道菌群等多种生物活性,而微生物来源的琼胶酶是酶法制备琼胶寡糖的重要工具酶。目前报道的琼胶酶数量较少,而具有优良酶学特性的琼胶酶数量更少,极大阻碍了酶法制备琼胶寡糖的工艺开发进程。因此有必要发掘更多微生物来源的新颖琼胶酶。从副居冰菌属Paraglaciecola hydrolytica细菌基因组中挖掘到一个新颖琼胶酶基因aga2,构建至表达载体pET28a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;通过镍金属亲和层析纯化蛋白并探究温度、pH、金属离子、NaCl浓度对Aga2活性的影响;采用^(13)C核磁共振、薄层色谱和基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析酶解产物。Aga2与已知琼胶酶的最高相似度为53.7%。同时Aga2在IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside)浓度为90μmol/L,20℃下诱导9 h时,可溶性表达量最高。纯化的Aga2最适反应温度为50℃,且40℃孵育3 h后仍保持72.9%的相对酶活力,具有较好的温度稳定性。Aga2的最适pH为6.0,在不同pH(4-9)下放置5 h后,仍保持62.6%以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性。Aga2在NaCl浓度为2.5 mol/L时仍保持78%的相对酶活力,具有较强的盐耐受性。同时Aga2对Ni^(2+)、Ca^(2+)、Ba^(2+)、K^(+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、EDTA、DTT、Urea、SDS、TritionX-100有耐受性。薄层色谱结果表明,该酶属于内切型β琼胶酶,产物为新琼四糖和新琼六糖。Aga2具有温度和pH稳定性、盐耐受性和重金属离子耐受性,具有良好的工业应用前景。
- 王小桃邹杭吴怡向省维吕华刘超兰林家富王欣荣褚以文宋涛
- 关键词：琼胶酶异源表达酶学性质琼胶寡糖
- 前体物质对Glarea lozoyensis发酵产生纽莫康定B_0的影响（英文）被引量：4
- 2018年
- 纽莫康定B_0是棘白菌素类化合物,其半合成衍生物卡泊芬净已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。然而,通过发酵产生的纽莫康定B_0的效价较低,限制了卡泊芬净的工业生产。本研究将优化好的的培养基进行了改良,添加了4种前体物质。研究结果表明,大豆油、亮氨酸、异丁醇和甲硫氨酸显著影响发酵单位;进一步的正交试验结果表明,大豆油(A)对纽莫康定B_0效价的影响极显著(P<0.05),亮氨酸(B)、异丁醇(C)和甲硫氨酸(D)影响次之,最优发酵条件为A2B2C3D2即大豆油6.0g/L,亮氨酸1.0g/L,异丁醇4.0ml/L,甲硫氨酸0.3g/L时,纽莫康定B_0发酵单位达到1295mg/L左右。此外,还应用正交试验验证各因素的显着性。当将kLa作为指导参数,使用A315型叶轮的100L发酵罐进行放大和工业规模生产时,与原始效价相比,纽莫康定B_0产量增加了361%,并达到了2250mg/m L的水平。
- 方舟孟慧云杨渊林家富翟龙飞褚以文王欣荣
- 关键词：培养基优化
- 刺糖多孢菌高产菌株转录组及其多杀菌素合成代谢调控研究被引量：1
- 2022年
- 目的 通过对高产多杀菌素的刺糖多孢菌进行转录组分析,挖掘多杀菌素合成相关代谢通路的差异基因,并在此基础上结合发酵优化进一步提高多杀菌素产量。方法 利用RNA-seq技术对高产株SS-168及低产野生菌株SS-WT进行比较转录组分析,通过荧光定量PCR验证差异基因表达,再通过发酵培养基优化考察高产菌株的发酵水平。结果 转录组分析表明,与低产菌株相比高产株中有1341个差异表达基因,GO注释表明DEGs主要参与氧化还原生物过程和脂质代谢及辅因子结合和辅酶结合,主要分布在甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、脂肪酸降解等通路。荧光定量PCR结果与转录组数据一致性达到100%。采用分别含有不同浓度的甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸的发酵培养进行筛选,多杀菌素发酵水平显著提高。结论 本研究通过新颖的转录组学方法获得了刺糖多孢菌高产菌株的差异基因,并对其高产机制和发酵优化进行了初步分析,为改良刺糖多孢菌菌株和优化发酵工艺提供重要的理论基础和参考依据。
- 王欣荣唐智超曾茂吕正翟龙飞张新宜刘超兰褚以文王克华黄挺
- 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌转录组代谢调控
- 以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用被引量：2
- 2018年
- 目的发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型。方法通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化。基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系。对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选。结果成功构建重组表达菌株BL21(rosetta)/pET-30a/FKBP52。纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90%,并具有很好的PPIase活性。阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC50为12.035ng/m L。筛选得到121个抑制率大于80%的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素。对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1。结论本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选。
- 栗若兰赵峰徐岩王欣荣郑海州苟小军路新华张雪霞褚以文郑智慧
- 关键词：FK506雷帕霉素高通量筛选抑制剂
