张瑶瑶
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大片吸虫分泌排泄抗原对小鼠肝损伤的研究被引量：3
- 2016年
- 为探究大片形吸虫分泌排泄物对小鼠肝脏的影响，将60只雌性昆明小鼠随机分为试验组和对照组各30只。每隔2天注射0．4mgFgESP200μL，对照组注射PBS200μL。于首次注射后第10天、4周、7周、14周、18周处死6只小鼠，观察肝脏表观病理变化，制做肝脏HE染色病理切片并测定血清中与肝功能密切相关的ALT、AST、ALP、ALB、GLB等生化指标的变化。肝脏眼观病理变化结果显示，试验组从第4周可见白色点状结节，症状随着时间的延长而加重；肝脏组织病理结果显示，从第2周开始小鼠肝脏出现空泡变性，至第18周出现大量炎性细胞浸润，并伴随轻度肝纤维化；生化指标动态变化结果显示，ALT、AST活性在整个试验进程中出现显著上升（P〈0．05），ALP活性在第4周～7周明显升高，之后降低（P〉0．05），ALB和GLB水平在整个试验进程中分别表现为显著下降和显著上升（P〈0．05），提示肝细胞可能发生变性、坏死导致血清中转氨酶活性升高，蛋白合成能力下降。本研究结果表明大片吸虫分泌排泄抗原（FgESP）可导致小鼠肝损伤，损伤程度随着FgESP的持续注射而加重。
- 梅雪芳施维张瑶瑶黄维义
- 关键词：大片形吸虫肝脏损伤小鼠
- 罗非鱼HSP70(tHSP70)蛋白的生物信息学分析、真核表达及质谱鉴定被引量：4
- 2015年
- 运用生物信息学技术分析罗非鱼热休克蛋白70(tilapia heat shock protein,t HSP70)的理化特性、糖基化位点、跨膜区域、蛋白的细胞定位及信号肽与虹鳟等其他动物HSP70的相似性,以人工合成c DNA为模板,通过聚合酶链式反应扩增其完整CDS,并将此DNA片段与真核表达载体p GAPZa-A连接,构建p GAPZa-HSP70表达质粒,在毕赤酵母GS115中表达t HSP70蛋白,对表达上清液进行SDS-PAGE及Western-blotting分析后,采用Ni2+IDA层析脱盐纯化目的蛋白,并对所表达的蛋白进行糖基化PAS染色鉴定。对表达的蛋白进行SDS-PAGE后,将所获得的非预定大小(约100 ku)条带进行电离飞行时间质谱鉴定,并确定其蛋白种类。结果表明:t HSP70所含氨基酸数量为640,分子量为70 274.5 u,等电点为5.49。在哺乳动物网织红细胞(体外)的半衰期为30 h,在酵母内半衰期大于20 h,而在大肠杆菌内的半衰期也大于10 h,不稳定指数为36.64,脂肪族指数为85.58。可能分别含有6个N-和O-糖基化位点,所克隆t HSP70基因与目的基因完整编码区序列完全一致,所构建的p GAPZa-HSP70质粒能在GS115中成功表达,诱导表达上清液经SDS-PAGE及Westernblotting分析后发现,除70 ku目的蛋白外,还出现一条100 ku条带。经糖基化PAS染色证明,此100 ku蛋白可能是HSP70糖基化的结果,且能被人的兔抗HSP70抗体识别,质谱鉴定证明该条带即是t HSP70蛋白。本研究所表达t HSP70蛋白为后续罗非鱼细胞学及抗原提呈等免疫学研究奠定了基础。
- 罗洪林张瑶瑶梁万文陈福艳李旻甘西
- 关键词：真核表达糖基化质谱鉴定
