庄云芳
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：大连医科大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝肿瘤线粒体功能障碍及抗氧化应激机制的探讨被引量：2
- 2015年
- 目的 :探讨癌基因Ras诱导小鼠肝组织中线粒体功能的障碍及肝肿瘤细胞抗氧化应激反应的分子作用机制。方法 :采集H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织、癌旁组织以及正常健康雄性小鼠的肝组织(正常对照)。采用比色法定量检测肝组织中线粒体呼吸链复合物Ⅰ的活性;对线粒体呼吸链相关基因的转录组进行测序,并采用实时荧光定量PCR法检测组织中线粒体复合物关键酶NADH脱氢酶(辅酶)1α亚基12[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 alpha subcomplex 12,Ndufa12]、NADH脱氢酶(辅酶)铁硫蛋白6[NADH dehydrogenase(ubiquinone)Fe-S protein 6,Ndufs6]、泛醌细胞色素C还原酶结合蛋白(ubiquinol-cytochrome C reductase binding protein,Uqcrb)和细胞色素C氧化酶7a2(cytochrome C oxidase subunitⅦa polypeptide 2,Cox7a2)m RNA的表达水平以及Bcl-2和解偶联蛋白2(uncoupling protein2,Ucp2)m RNA的表达水平;免疫荧光法检测组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。结果 :与正常健康雄性小鼠肝组织相比,H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌组织和癌旁组织中线粒体呼吸链复合物Ⅰ的活性均显著降低(F=14.26,P=0.003);转基因小鼠肝癌组织和癌旁组织中Ndufa12、Ndufs6、Uqcrb和Cox7a2 m RNA的表达水平均显著降低(F=18.55,P=0.001;F=7.06,P=0.014;F=12.81,P=0.002;F=10.51,P=0.004)。免疫荧光检测结果显示,与正常对照组和转基因小鼠肝癌组织相比,转基因小鼠癌旁组织中ROS的水平显著升高(F=31.35,P=0.001);Bcl-2和Ucp2m RNA表达水平均显著升高(F=20.29,P=0.002;F=15.51,P=0.001)。结论 :癌基因Ras的表达直接下调了肝组织线粒体呼吸链复合物关键酶的表达,进而导致线粒体功能障碍并上调细胞内ROS的水平。肝癌细胞通过促进Bcl-2和Ucp2的表达降低线粒体产生的ROS,进而促进肝癌的发生和发展。
- 庄云芳李慧玲姚亮崔海鹏董建一陈军王福金王爱国王靖宇
- 关键词：活性氧
- 原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响
- 2017年
- 目的探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响。方法采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平。结果体外培养6 d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好。体外培养6 d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团。考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130~170 k D之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40~130 k D之间的蛋白条带丰度逐渐增加。Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势。RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化。结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响。
- 庄云芳樊婷婷童仁洋李学凤李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝组织肝癌组织成年小鼠
- 小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9月龄H-ras12V转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。
- 李学凤陈军庄云芳董建一李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝肿瘤原代细胞培养
- Ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的作用机制研究
- 目的: 探讨癌基因Ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的分子作用机制。 方法: 1.采集正常对照雄性小鼠的正常肝组织样本和H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织及癌旁组织样本,分别进行病理分析和总蛋白质和总...
- 庄云芳
- 关键词：肝癌线粒体功能障碍
