董慧
- 作品数：11 被引量：32H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2007年
- 目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamHI、XhoI双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达。对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析。结果克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性。结论成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础。
- 田德斌袁舟殷月兰黄金林董慧焦新安
- 关键词：产单核细胞李斯特菌原核表达
- 鸡CD3分子单克隆抗体及其免疫生物学特性
- 研制抗鸡CD3分子特异性单克隆抗体(mAb)。用重组真核表达质粒pcDNA3.1-CD3免疫6周龄BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗鸡CD3分子mAb。共获得7株特异性分泌抗鸡CD3分子的mAb,分别命名为...
- 张小燕白海焦新安潘志明胡青海胡茂志孙林李玉君董慧单艳菊张成全
- 关键词：单克隆抗体
- 文献传递
- 鸡CD3分子单克隆抗体及其免疫生物学特性
- 研制抗鸡 CD3分子特异性单克隆抗体(mAb)。用重组真核表达质粒 pcD- NA3．1-CD3免疫6周龄 BALB/c 小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗鸡 CD3分子 mAb。共获得7株特异性分泌抗鸡 CD3分子的...
- 张小燕潘志明胡青海胡茂志孙林李玉君董慧单艳菊张成全白海焦新安
- 关键词：单克隆抗体
- 文献传递
- 产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制被引量：10
- 2006年
- 利用PCR技术从血清型1／2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因，经克隆筛选和测序鉴定后，构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA，转入E．coli后，IPTG诱导目的蛋白的表达。SDS-PAGE结果表明，actA基因在两种载体中均获得表达，融合蛋白的大小分别约为120kDa和97kDa。以纯化蛋白为材料进行了AetA单抗的研制，获得4株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株，腹水单抗ELISA效价为1：5×10^4-1：1×10^5。选取单抗1A5进行Western blot分析，结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应，且与Lm-4多抗血清的Western blot结果一致。actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础。
- 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰
- 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体
- γ-辐射与常规方法灭活产单核细胞李斯特菌对小鼠免疫原性的比较被引量：3
- 2009年
- 【目的】以产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)为模式菌,比较γ-辐射及常规的热灭活、甲醛灭活制备的灭活李斯特菌对小鼠的免疫原性。【方法】以γ-辐射、热灭活和甲醛灭活法分别制备灭活的LM;腹腔注射BALB/c小鼠,ELISA检测各组灭活菌产生的抗体水平;观察野生型LM攻击后各组的保护效果,动态监测体内带菌情况;流式细胞仪分选免疫小鼠T细胞,以T细胞转移实验评价辐射灭活的LM产生的免疫应答。【结果】辐射灭活组、热灭活组和甲醛灭活组产生的抗体水平分别为:1∶1280,1∶640,1∶160;野生型细菌攻击后这3种灭活菌产生的保护率分别为:100%、35%、30%,其中免疫辐射灭活菌的小鼠能够较快清除攻击的细菌;辐射灭活李斯特菌能够激发产生T细胞保护性免疫应答。【结论】较之传统的灭活方法,利用γ-辐射制备的灭活LM免疫小鼠后能够产生较好的保护效果。
- 董慧焦新安潘志明殷月兰孙林刘松婷
- 关键词：产单核细胞李斯特菌Γ-辐射灭活菌
- 产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制
- 本文利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E.coli后,IPTG...
- 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰
- 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体原核表达
- 文献传递
- 产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制
- 本文利用PCR技术从血清型1／2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E．coli后,IPTG...
- 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰
- 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体
- 文献传递
- 抗李斯特菌溶血素单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：10
- 2008年
- 目的:研制抗李斯特菌溶血素(LLO)的单克隆抗体(mAb)。方法:通过诱导重组大肠杆菌BL21(pGEX-6p-1-hly),以SDS-PAGE分离菌体蛋白,切割目的蛋白LLO-GST条带,研磨粉碎后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。利用亲和层析法纯化目的蛋白,作为检测抗原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb的特异性。结果:获得3株稳定分泌抗LLO mAb的杂交瘤细胞株3B6、4D1、5D10,其Ig亚类均为IgG1。3B6、4D1、5D10腹水的ELISA效价分别为1∶2×105、1∶2×105、1∶1×105。Western blot试验中,3株mAb均能与融合蛋白LLO-GST发生反应出现特异性条带,而与纯化蛋白GST不反应。在Dot-ELISA试验中,3株mAb均能与表达LLO的细菌发生特异性反应。结果表明,mAb 3B6、4D1、5D10是针对LLO的特异性mAb。结论:成功地制备了抗LLO的mAb,为进一步研究LLO的生物学特性、产单核细胞李斯特菌的致病机制,以及建立产单核细胞李斯特菌(LM)快速检测技术奠定了基础。
- 董慧焦新安殷月兰潘志明黄金林
- 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体
- 鸡白细胞介素2分子单克隆抗体的研制被引量：10
- 2008年
- 以含有鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1-ChIL-2免疫6周龄BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆。共获得2株特异性分泌抗鸡IL-2分子的杂交瘤细胞株,分别命名为1H10和1E6,其腹水ELISA效价分别为1∶6400和1∶3200,亚类鉴定结果均为IgM。重组质粒pcDNA3.1-ChIL-2转染COS-7细胞,以上述单克隆抗体(mAb)检测表达产物,结果表明,2株mAb均能与表达产物反应;Western blot分析结果显示,2株mAb均与原核表达鸡IL-2蛋白发生特异性反应。本研究所制备的抗鸡IL-2分子mAb可为建立简单、快速的鸡IL-2检测方法提供可能,并为鸡IL-2生物学特性和禽类细胞免疫机理的研究提供材料。
- 张小燕潘志明胡青海董慧张成全焦新安
- 关键词：IL单克隆抗体
- 流式细胞术检测重组LLO溶血的效果
- 2007年
- 目的:分析rLLO在溶血过程中对CD45+细胞的影响。方法:利用流式细胞术,通过与商品化裂解液和自制NH4Cl裂解液的比较,观察rLLO与以上2种裂解液裂解效果的差异。结果:rLLO具有较强的裂解红细胞的能力,裂解效果与商品化裂解液和自制NH4Cl裂解液基本一致。另外,三种裂解液对细胞膜的渗透性均有较大影响。结论:rLLO对细胞膜CD45表面抗原的损伤程度低于商品化裂解液。
- 胡茂志高明燕孟闯董慧潘志明焦新安殷月兰刘秀梵
- 关键词：裂解CD45
