李亮亮
- 作品数：15 被引量：24H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 山羊乳腺上皮细胞基因转染条件的优化被引量：2
- 2012年
- 为了优化外源基因转入乳腺上皮细胞的条件,本研究采用组织块培养法,从山羊乳腺组织中分离并获得了纯化的乳腺上皮细胞,通过染色角蛋白和测定生长曲线对其进行了鉴定和检测。然后利用电穿孔法将PEGFPC1载体导入乳腺上皮细胞,分别比较了在不同电压(120、140、160、180、200V)、不同电击时长(5、10、15、20ms)以及2株细胞(GMEC1、GMEC2)的不同代数(第1代、第3代、第5代、第9代)条件下的转染效率,并利用优化条件对山羊乳腺上皮细胞进行人β-防御素3基因转染,经过G418筛选,最终获得单克隆细胞,同时对获得的单克隆阳性细胞进行体外诱导表达,并对诱导产物进行Western blotting鉴定。结果表明,不同遗传背景的细胞对转染效率的影响较小,而第1代培养的细胞转染效率要显著高于传代细胞,乳腺上皮细胞在电压180V、电击时长15ms、电击1次的条件下转染效率最高,优化条件下转染、筛选和扩增后获得稳定表达人β-防御素3蛋白的单克隆乳腺上皮细胞。研究工作为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺特异性表达载体的检测提供参考资料。
- 杜珊马保华李亮亮刘军赵晓娥张涌
- 关键词：山羊乳腺上皮细胞电穿孔转染效率
- 序贯培养液G1/G2对山羊核移植胚胎发育和质量的影响被引量：2
- 2011年
- 为了优化山羊核移植胚胎体外培养体系,提高核移植效率,本研究检测了山羊体细胞核移植(SCNT)胚胎在序贯培养液G1/G2中的发育率和囊胚细胞凋亡,以及核移植胚胎移植后的妊娠率,以传统mSOF-FBS培养液作为对照组,评估序贯培养液G1/G2支持山羊核移植胚胎的发育能力。结果显示,与对照组相比,G1/G2组的囊胚发育率差异不显著((27.7±3.1)%vs(25.3±1.0)%,P>0.05),囊胚细胞数和囊胚细胞凋亡率显著降低(分别为(93.2±4.5)vs(109.1±6.2)和(4.9±0.2)%vs(11.3±0.1)%,P<0.05),但移植后的妊娠率显著增高(21.4%vs 8.0%,P<0.05)。结果表明,与传统的培养液mSOF-FBS相比,序贯培养液G1/G2能更好地支持山羊核移植胚胎的发育。
- 刘军郑聪颖李长雷杜珊李亮亮马保华张涌
- 关键词：山羊胚胎培养体细胞核移植
- 影响动物克隆效率因素的研究进展被引量：1
- 2010年
- 哺乳动物克隆效率低下成为目前制约动物克隆技术发展和应用的瓶颈。文章概述了动物克隆中供体细胞的选择、卵母细胞的去核方法、重构胚的激活和重构胚的培养等因素对克隆效率的影响以及提高克隆效率的策略,并对近年来影响动物克隆效率的因素作了详尽的论述,以期为该领域的科研工作者提供参考。
- 李亮亮杜珊刘军赵晓鹅马保华
- 关键词：动物克隆供体细胞
- 苹果采摘器工作分析与结构设计被引量：6
- 2018年
- 为降低苹果采摘的劳动强度,结合苹果的分布特点对苹果采摘机理进行分析,并设计了一款苹果采摘器。在总体设计的基础上,对剪切部件中切割刀片的结构进行了优化,分析了采摘过程中切割刀片的受力情况,并设计出了苹果采摘器的自动伸缩和收集装置。
- 张润泽邬宏李亮亮潘天丽李宇丰张标
- 猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗研究进展被引量：4
- 2014年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,该病每年给全球养猪业造成巨大的经济损失。目前用于防控该病最有效的方法是疫苗接种,由于传统疫苗存在一些不足之处,对于根除该病仍然存在较大难度。核酸疫苗作为一种新型疫苗,不仅能诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,而且具有较多优点。论文主要就猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗的作用机制、优缺点,以及研究现状进行简要综述,以期为PRRS核酸疫苗研究和该病的防控提供参考。
- 李亮亮张雪梅汤小龙周恩民穆杨
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5与细胞凋亡和病毒复制关系的初步研究
- 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引发的一种急性传染病。该病自出现以来，在全球范围内给养猪业...
- 李亮亮
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5MARC-145细胞凋亡干扰素
- 文献传递
- 表达猪CD163分子鼠肺泡巨噬细胞系的建立及其应用
- 本发明属于生物学技术领域，公开了一种表达猪CD163分子鼠肺泡巨噬细胞系的建立及其应用，所述鼠肺泡巨噬细胞系为MH‑S<Sup>CD163</Sup>，保藏号为：CCTCC NO:C2016167。PRRSV感染的毒价可...
- 周恩民李亮亮
- 文献传递
- GP5^(Δ84-119)稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3
- 2016年
- 为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系,并利用cck-8试剂盒检测细胞的增殖情况;用PRRSV SD16株感染筛选的细胞,通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测GP5Δ84-119表达对PRRSV复制影响;通过Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达情况。经RT-PCR、Western blot和IFA检测,GP5Δ84-119在Marc-145细胞中获得稳定表达,将此细胞命名为Marc-145-GP5Δ84-119;细胞增殖曲线显示GP5Δ84-119的表达不影响细胞的增殖;对病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现GP5Δ84-119的表达可以抑制PRRSV的复制,这种抑制作用可能是通过上调IFN特别是IFN-β的表达而实现的。研究表明GP5第二胞外区在PRRSV复制中发挥重要作用。
- 王晓红宋林林李亮亮袁传奇姜博周恩民穆杨
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒干扰素
- 蝾螈迟钝爱德华菌的分离鉴定被引量：3
- 2013年
- 为确定引起陕西某水产养殖场发病蝾螈的病原菌,从发病蝾螈的体表脓肿组织中采用细菌分离、生物学特性观察、生理生化试验、16SrRNA基因测序、人工感染试验和药敏试验对病原进行分离鉴定。结果从发病蝾螈体表脓肿组织中分离培养获得1株革兰氏阴性小杆菌,根据生物学特性、生理生化试验等初步鉴定为迟钝爱德华菌,通过16SrRNA序列(GenBank登录号JX570593)测定,在GenBank上经同源性序列比对,与迟钝爱德华菌(登录号JF699759)聚为一类,与大部分迟钝爱德华菌的16SrRNA的同源性均在98%以上。该菌对小白鼠有致病作用,可引起小白鼠皮肤肿胀、化脓,肌肉苍白、溃疡;蝾螈背部注射该菌后造成局部化脓、坏死或溃疡;该菌对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星等抗菌药物敏感,对头孢哌酮、红霉素、四环素等抗菌药物有耐药性。综合生理生化指标、分子生物学鉴定及动物致病性试验结果,确定分离菌株为蝾螈源迟钝爱德华菌。
- 穆杨刘圆圆李亮亮张耀相丛日华
- 关键词：蝾螈药敏试验RRNA
- 关中黑猪IL-5 cDNA的克隆表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 目的克隆关中黑猪IL-5 cDNA,构建该基因的不同表达质粒,获得表达的IL-5并制备其多克隆抗体。方法提取佛波酯(PHA)刺激的关中黑猪外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR克隆猪IL-5基因(sIL-5),鉴定后将sIL-5基因分别克隆到pQE30、pET-32a和pEGFP-N1中,构建重组表达质粒pQE-sIL-5和pET-sIL-5及pEGFP-sIL-5,将pEGFP-sIL-5瞬时转染PK-15细胞,将pQE-sIL-5和pET-sIL-5分别转化JM109和BL21,用1 mmol/L IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot法鉴定表达蛋白后,通过镍柱纯化目的蛋白。用纯化的BL21表达的IL-5免疫小鼠,制备其多克隆抗体,用纯化的JM109表达的IL-5通过优化的间接ELISA检测抗体效价。结果成功获得关中黑猪的IL-5基因(登录号KC660157),大小405 bp,与GenBank中猪IL-5参考序列同源性99.75%,仅25位的T变成C,但编码的氨基酸完全相同;荧光显微镜观察发现pEGFP-sIL-5在PK-15细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示JM109表达的目的蛋白的相对分子质量(M_r)约15 000,而BL21表达的目的蛋白M_r约30000,Western blot法检测结果表明,表达的目的蛋白均具有良好的反应原性;免疫小鼠后获得了IL-5的多克隆抗体,抗体效价最高可达1:12 800。结论克隆了关中黑猪IL-5基因片段并成功表达,获得了IL-5的多克隆抗体。
- 穆杨刘园园李亮亮刘阳尚川川周恩民
- 关键词：IL-5多克隆抗体
