王丹
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市卫生局科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一氧化碳对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨一氧化碳(CO)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响及可能机制。方法用含有10%胎牛血清的细胞培养基,在37℃、5%CO2细胞培养孵箱内培养大鼠肺巨噬细胞,采用随机数字表法将其分为4组(n=10):空白对照组(C组)、CO组、LPS组、LPS+CO组。CO组加入体外一氧化碳释放分子-2(CORM-2)100μmol/L孵育,LPS组加入LPS 10 mg/L,LPS+CO组加入CORM-2 100μmol/L预处理1 h后加入LPS 10 mg/L孵育,C组加入等量PBS液作为对照。每组细胞处理完毕后继续孵育24 h,采用MTT法测定细胞活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率和线粒体膜电位;ATP酶含量试剂盒测定细胞内ATP含量;RT-PCR法测定细胞中线粒体分裂相关蛋白Drp1的m RNA含量;Western blot法测定Drp1的蛋白表达。结果与C组相比,LPS组和LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位下降,细胞凋亡率、线粒体分裂蛋白Drp1 m RNA及蛋白表达增加(P<0.05),CO组上述指标比较差异无统计学意义;与LPS组比较,LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位增加(P<0.05),细胞凋亡率、Drp1 m RNA及蛋白表达减少(P<0.05)。结论 CO可减轻LPS诱导的大鼠肺巨噬细胞损伤,其机制与下调线粒体分裂相关蛋白Drp1和改善线粒体功能有关。
- 刘伟余剑波王丹史佳
- 关键词：一氧化碳脂多糖类肺泡腺苷三磷酸膜电位
- PKCα／HO-1信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用：与Mfn1的关系被引量：1
- 2017年
- 目的评价蛋白激酶Cα（PKCα）／血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用及其与线粒体融合蛋白-1（Mfnl）的关系。方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞以1×104个／ml密度接种于96孔板中。采用随机数字表法分为5组（n=15）：对照组（C组）、内毒素攻击模型组（E组）、PKCα抑制剂G06976组（G组）、PKCα激动剂PMA组（P组）和二甲基亚砜组（D组）。采用给予10μg／mlLPS刺激NR8383细胞的方法制备肺泡巨噬细胞内毒素攻击模型。G组、P组和D组于LPS刺激前30min分别给予5txmol／LG06976、100nmol／LPMA、0．1％二甲基亚砜预处理30min，再给予10μg／mlLPS，各组均孵育24h后收集细胞，检测丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，采用Westernblot法及q-PCR法检测PKCα、HO-1和Mfnl的表达。结果与C组比较，E组、G组、P组和D组MDA和ROS含量升高，SOD活性降低，PKCα、HO-1及其mRNA表达上调，Mfnl及其mRNA表达下调（P〈0．05）；与E组比较，G组MDA和ROS含量升高，SOD活性降低，PKCα、HO-1、Mfnl及其mRNA表达下调，P组MDA和ROS含量降低，SOD活性升高，PKCα、HO-1、Mfnl及其mRNA表达上调（P〈0．05），D组上述指标差异无统计学意义（P〉O．05）。结论PKCαHO-1信号通路激活后促进Mfnl表达是内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤时的内源性保护机制。
- 李香云王曼余剑波吴丽丽王丹史佳
- 关键词：蛋白激酶CΑ血红素加氧酶-1内毒素类线粒体蛋白质类
- 电针对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织内质网应激的影响被引量：5
- 2016年
- 目的评价电针对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织内质网应激的影响。方法健康清洁级雄性sD大鼠40只，8周龄，体重180～210g，采用随机数字表法分为4组（n=10）：对照组（C组）、急性肺损伤组（AL1组）、电针组（E组）和非穴位电针组（NE组）。采用静脉注射脂多糖5mg／kg的方法制备内毒素性急性肺损伤模型。E组于模型制备前1—4d及模型制备过程中电针足三里穴及内关穴（疏密波频率2／15Hz，波宽0．2～0．6ms，刺激电流1～2mA，刺激强度以大鼠肢体出现轻微颤动为宜），刺激时间9：30-10：30，30min／次，1次／d，NE组以相同的参数电针刺激足三里穴及内关穴旁开0．5cm非经非穴处。静脉注射脂多糖后6h时，处死动物，取肺组织，行肺损伤评分，确定湿重／干重比值（W／D比值），采用TUNEL法确定肺泡上皮细胞凋亡指数（AI），采用Westernblot法检测肺组织葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）及caspase-12表达水平。结果与C组比较，其余3组肺损伤评分、W／D比值及肺泡上皮细胞AI升高，肺组织GRP78、CHOP及easpase-12表达上调（P〈0．05）；与ALI组比较，E组肺损伤评分、W／D比值及肺泡上皮细胞AI降低，肺组织GRP78、CHOP及caspase．12表达下调（尸〈0．05），NE组上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论电针减轻大鼠内毒素性急性肺损伤的机制与抑制肺组织内质网应激，减轻肺泡上皮细胞凋亡有关。
- 李长坤史佳宫丽荣董树安张圆王丹余剑波
- 关键词：电刺激疗法内毒素血症呼吸窘迫综合征内质网应激
- HO-1通过PI3K/Akt信号通路诱导内毒素攻击模型肺泡巨噬细胞线粒体融合蛋白Mfn1的表达上调
- 目的 HO-1通过PI3K/Akt信号通路诱导内毒素攻击模型肺泡巨噬细胞线粒体融合蛋白Mfn1的上调表达方法传代培养12-20d大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,采用随机数字发分为4组(n=10):对照组(C组)正常培养大鼠...
- 李珍史佳余剑波王丹董树安宫丽荣张圆
- 关键词：HO-1线粒体PI3K/AKT信号通路
- 文献传递
- HO-1通过PI3K/Akt信号通路诱导内毒素攻击模型肺泡巨噬细胞线粒体融合蛋白Mfn1的表达上调
- 目的：HO-1通过PI3K/Akt信号通路诱导内毒素攻击模型肺泡巨噬细胞线粒体融合蛋白Mfn1的上调表达。
方法：传代培养12-20d大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,采用随机数字发分为4组(n=10)：对照组(C...
- 李珍史佳余剑波王丹董树安宫丽荣张圆
- 关键词：肺泡巨噬细胞血红素加氧酶-1磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白激酶B
- 文献传递
- 内毒素攻击大鼠肺泡巨噬细胞时PI3K/Akt信号通路在一氧化碳上调线粒体融合蛋白-1表达中的作用
- 2017年
- 目的 评价内毒素攻击大鼠肺泡巨噬细胞时1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）信号通路在一氧化碳（C0）上调线粒体融合蛋白-1（Mfn1）表达中的作用.方法 传代培养12 ～ 20周龄大鼠肺泡巨噬细胞,以密度4×10^4个/ml接种于96孔板,培养24 h后,采用随机数字法分为4组（n=10）：对照组（C组）、内毒素组（L组）、LPS＋一氧化碳释放剂CORM-2组（L＋C组）和LPS＋CORM-2＋PI3K抑制剂LY294002组（L＋C＋LY组）.C组正常培养,L组、L＋C组和L＋C＋LY组均给予10 μg/ml LPS刺激肺泡巨噬细胞,制备内毒素攻击模型;L＋C组于LPS刺激前1h给予CORM-2 100 μmol;L＋C＋LY组于LPS刺激前1.5、1.0h分别给予抑制剂LY294002 20 μg、CORM-2100 μmol;每组细胞处理完毕后继续孵育24 h.采用ELISA法测定细胞上清液TNF-α和IL-10的浓度,采用RT-PCR和Western blot法测定细胞PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）和Mfn1的表达.结果 与C组比较,L组、L＋C组和L＋C＋LY组TNF-α浓度升高,IL-10浓度下降（P＜0.05）;与L组比较,L＋C组IL-10浓度升高,TNF-α浓度下降,PI3K、p-Akt、Mfn1表达上调（P＜0.05）;与L＋C组比较,L＋C＋LY组IL-10浓度下降,TNF-α浓度升高,PI3K、p-Akt、Mfn1表达下调（P＜0.05）.结论 内毒素攻击大鼠肺泡巨噬细胞时,PI3K/Akt信号通路的激活参与了CO上调Mfn1表达的过程.
- 李珍史佳余剑波王丹董树安宫丽荣张圆
- 关键词：一氧化碳线粒体蛋白质类蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
- 脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞活力的影响
- 2015年
- 目的 评价脂多糖（LPS）对大鼠肺泡巨噬细胞活力的影响.方法 将大鼠肺泡巨噬细胞以4×104个/ml密度接种于96孔板,培养24 h后,采用随机数字表法将其分为6组（n=5）：对照组（C组）、0.1 μg/ml LPS组（LPS01组）、1.0μg/ml LPS组（LPS1.0组）、10.0 μg/ml LPS组（LPS10组）、50.0 μg/ml LPS组（LPS50组）和100.0 μg/ml LPS组（LPS100组）.C组加入PBS作为对照,其余组分别加入相应终浓度的LPS.在加入PBS或LPS后6、12、24和48 h时采用MTT法测定细胞活力.结果 与C组相比,加入LPS后6和12 h时其余5组大鼠肺泡巨噬细胞活力升高,加入LPS后24和48 h时LPS50组和LPS100组大鼠肺泡巨噬细胞活力降低（P＜0.05）,LPS01组、LPS10组和LPS10组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 0.1 ～ 100.0 μg/ml LPS孵育12 h以内可增强大鼠肺泡巨噬细胞活力;LPS浓度≥50.0μg/ml孵育24 h以上可降低其活力.
- 刘伟王丹余剑波宫丽荣张圆董树安傅强
- 关键词：脂多糖类
- 线粒体融合-分裂在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用被引量：5
- 2015年
- 目的：评价线粒体融合-分裂在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠20只，体重160～180 g，2月龄，采用随机数字表法，将其分为2组（ n＝10）：正常对照组（ C组）及内毒素性急性肺损伤组（L组）。 L组静脉注射LPS 5 mg∕kg，C组给予等容量生理盐水0．5 ml，给予LPS后6 h时处死大鼠，取肺组织，测定湿重∕干重（ W∕D）比值、超氧化物歧化酶（ SOD）活性和丙二醛（ MDA）含量；测定线粒体融合相关蛋白[线粒体融合蛋白1（ Mfn1）、线粒体融合蛋白2（ Mfn2）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）]及其 mRNA 的表达，并测定线粒体分裂相关蛋白[动力相关蛋白1（ Drp1）和分裂蛋白1（ Fis1）]及其mRNA的表达。结果与C组比较，L组肺组织W∕D比值和MDA含量升高，肺组织SOD活性降低；肺组织Mfn1、Mfn2和OPA1及其mRNA的表达下调，肺组织Drp1和Fis1及其mRNA的表达上调（ P＜0．05）。 L组肺组织病理学损伤明显重于C组。结论大鼠内毒素性急性肺损伤的机制与线粒体融合减少、分裂增多导致氧化应激反应增强有关。
- 王颖王丹余剑波宫丽荣张圆董树安穆蕊史佳刘大全
- 关键词：线粒体蛋白质类成人内毒素血症
