赵宇
- 作品数：10 被引量：14H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TAT-ODD介导的p53融合蛋白的靶向抗肿瘤作用的研究
- 目前，癌症仍然是危害人类健康的主要疾病之一。临床数据表明，超过50％的肿瘤的发生均与肿瘤抑制基因P53的突变有关。P53基因是细胞中重要的肿瘤抑制基因，其编码产物p53蛋白在修复细胞基因组损伤，维持基因组稳定，以及在细胞...
- 赵宇
- 关键词：实体瘤抗肿瘤效果蛋白转导结构域
- 竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白被引量：2
- 2011年
- 目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段。方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度。结果利用亲和层析纯化的3P40,进行HRP标记,ELISA检测3P40HRP滴度可达1∶200 000;建立的竞争性ELISA方法可以检测PBST中P53蛋白,灵敏度达30 ng/ml,日内精密度较高,相对标准偏差(RSD)小于5%,体现较好的重复性;分别应用正常小鼠血清、PBST稀释的重组P53蛋白样品进行竞争性ELISA检测,结果显示小鼠血清成分对P53蛋白检测有一定的影响;应用血清制备P53蛋白的标准曲线,检测了腹腔注射P53蛋白后不同时间点小鼠血清样品中的P53蛋白浓度。结论进行了抗P53单克隆抗体3P40的HRP标记,建立了竞争性ELISA方法,可用于P53蛋白药物血药浓度检测。
- 武军华魏文清贾培媛王晨宇赵宇刘晶黄春倩王玉霞
- 关键词：P53蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附分析
- 双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素被引量：6
- 2009年
- 目的应用酶联免疫吸附分析方法(ELISA)检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体(4C13,3D74,5E4和5H6),以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5μg·L-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0μg·L-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。
- 郎立伟王玉霞王晨宇赵宇贾培媛傅风华
- 关键词：蓖麻毒素双抗体夹心酶联免疫吸附分析
- 从大容量抗体库中筛选抗蓖麻毒蛋白抗体被引量：3
- 2007年
- 目的:从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗蓖麻毒蛋白的人源抗体。方法:将蓖麻毒蛋白固定在抗原管上,通过5轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选到特异性抗体,并转染到HB2151菌中,经IPTG诱导,制备抗蓖麻毒蛋白的可溶性单链抗体。结果:经过5轮筛选,获得40个与蓖麻毒蛋白结合的阳性克隆,其中12个特异性结合的克隆,指纹分析有7种不同的可变区片段;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。并将其制备成可溶性的抗体。结论:利用单链大容量抗体库获得抗蓖麻毒蛋白的噬菌体抗体并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定基础。
- 乔媛媛王欲晓周丽君赵宇王玉霞赵晓航王琰
- 关键词：噬菌体抗体
- TAT-P53融合蛋白的小鼠肝毒性
- 2012年
- 目的观察TAT类融合蛋白体内抗肿瘤的毒性。方法成功转染移植B16黑色素细胞瘤的C57小鼠ip给予P53,TAT-P53和TAT-常氧依赖性降解结构域(ODD)-P53蛋白5 mg·kg-1,共计12 d。全自动血液生化指标分析仪测定血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)活性、甘油三酯(TG)、血浆总蛋白(TP)、白蛋白(Al)、血糖(GLU)、尿素(UREA)、肌酐(Cre)和胆固醇(CHO)。结果与正常小鼠相比,模型组AST和ALT活性显著升高,TP水平降低。与模型组比较,给予P53和TAT-P53后,血清AST和ALT活性升高的现象没有明显改善,反而比模型组略有上升,TP水平降低的现象也无显著改观,但TG水平显著升高(P<0.01);给予TAT-ODD-P53融合蛋白后,AST和ALT活性升高的现象得到有效逆转,TP接近正常小鼠水平,同时没有发现TG显著升高的现象。与正常对照组比较,给予P53,TAT-P53和TAT-ODD-P53组Al,GLU,UREA,Cre和CHO无明显变化。结论 TAT-P53在体内具有潜在的肝毒性,但无肾毒性。
- 赵宇武军华贾培媛吴少平高珊王晨宇王玉霞
- 关键词：肝毒性天冬氨酸转氨酶丙氨酸转氨酶甘油三酯总蛋白
- 肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析被引量：3
- 2011年
- 目的制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体。方法应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白;ELISA测定抗体滴度。纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231〔p53(mutant)〕和〔H1299,p53(null)〕肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性。结果对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化。SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上;ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上。免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng。Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合。结论成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳。
- 武军华魏文清贾培媛赵宇王晨宇刘晶王玉霞
- 关键词：肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体酶联免疫吸附分析
- 反式激活蛋白-氧依赖性降解结构融合结构域介导蛋白跨膜转运和氧依赖性降解作用
- 2011年
- 目的研究反式激活蛋白(TAT)蛋白转导结构域介导的融合蛋白的跨膜转运,以及氧依赖性降解(ODD)结构域介导融合蛋白在体内外不同氧分压环境中的降解作用。方法将TAT,ODD以及增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列进行融合,构建了TAT-ODD-EGFP融合蛋白基因。将该序列克隆到原核表达载体pET28a中,在BL21工程菌中进行表达,通过亲和柱层析法纯化,得到高纯度的融合蛋白。同方法制备EGFP和TAT-EGFP融合蛋白作为对照。在20%O2和1%O2将融合蛋白与A549,H1299和MDA-MB-231细胞系孵育,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞中的分布以及稳定性。小鼠尾静脉注射不同融合蛋白(10 mg.kg-1),分别在注射后1,6和12 h处死动物,取脏器在荧光显微镜下观察融合蛋白的分布及稳定性。结果由于EGFP相对分子质量大,无法穿透细胞及组织。TAT可以有效地介导TAT-EGFP进入细胞和动物实体组织,其稳定性不受细胞或组织中氧分压的影响,而TAT-ODD-EGFP进入细胞或组织后,在20%O2条件下迅速降解,但可稳定存在于1%O2细胞及组织中。结论 TAT可以有效地转导融合蛋白穿过细胞膜。引入ODD,20%O2下融合蛋白TAT-ODD-EGFP迅速降解,但可以稳定存在于1%O2细胞和组织中,说明TAT-ODD可以转导蛋白进入并靶向存在于低氧的肿瘤组织中。
- 赵宇武军华贾培媛吴少平高珊王晨宇黄春倩王玉霞
- 关键词：低氧TAT增强型绿色荧光蛋白
- 包含p53基因的重组融合蛋白和重组体及其用途
- 本发明涉及一种融合基因，其包含GnRH基因序列和p53基因序列，以及任选的介于GnRH基因序列与p53基因序列之间的缺氧诱导因子的氧依赖性蛋白降解结构域(ODD)的基因序列。本发明还涉及一种重组融合蛋白，和所述融合基因的...
- 贾培媛王玉霞赵宇武军华
- 文献传递
- TAT-P53融合蛋白的小鼠肝毒性
- 目的观察TAT类融合蛋白体内抗肿瘤的毒性。方法成功转染移植B16黑色素细胞瘤的C57小鼠ip给予P53,TAT-P53和TAT-常氧依赖性降解结构域(ODD)-P53蛋白5 mg·kg,共计12 d。全自动血液生化指标分...
- 赵宇武军华贾培媛吴少平高珊王晨宇王玉霞
- 关键词：肝毒性天冬氨酸转氨酶丙氨酸转氨酶甘油三酯总蛋白
- 文献传递
