汪明星
- 作品数：4 被引量：7H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程更多>>
- 融合短肽促进碱性果胶酶的高效生产
- 果胶酶(PGL)是一种重要的工业酶,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业.本研究将6种双亲短肽(SAP)融合至PGL N端,以期提高PGL在大肠杆菌中的分泌表达效率.最终得到一株高产菌株重组大肠杆菌(表达PGL-S1),胞外...
- 汪明星刘松堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶
- 定点突变提高碱性果胶酶热稳定性被引量：3
- 2015年
- 碱性果胶酶(PGL,E.C.4.2.2.2)是一种重要的工业酶,在碱性条件下催化聚半乳糖醛酸的α-1,4糖苷键裂解,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。为提高酶热稳定性,将Bacillus sp.WSHB04-02 PGL与3种耐热酶进行氨基酸序列比对,确定7个在耐热酶中保守但在PGL中不保守的位点(158、N189、G191、S229、K314、S315和I325)作为改造的目标位点,单独突变为耐热酶中的保守氨基酸。酶学性质分析显示,PGL突变体热稳定性均有提高。与野生酶相比,N189E、S229K和I325F的55℃半衰期分别提高2.32倍、2.11倍和1.89倍;I58V和K314M 55℃半衰期分别提高19.4%和38.9%,比酶活分别提高65%和91%。结构分析显示,除S315G外的PGL突变体的分子内的多种作用力数量均发生改变。上述结果表明,定点突变能有效提高PGL热稳定性,分子间作用力的变化可能是酶学性质变化的重要原因之一。
- 刘松汪明星堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶定点突变热稳定性
- 融合短肽促进碱性果胶酶的高效表达被引量：4
- 2016年
- 碱性果胶酶(PGL)是一种重要的工业酶,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。作者将6种双亲短肽(SAP)融合至PGL N端,以期提高PGL在大肠杆菌中的分泌表达效率。得到一株高产菌株PGL-S1,胞外酶活由129.65 U/m L提高到535.47 U/m L,其他5种短肽则酶活降低。通过SDS-PAGE检测发现,PGL-S1的表达量并没有多大变化,推测可能是催化效率提高引起酶活提高。分析双亲短肽的疏水性指数发现,SAP1的疏水性不同于其他短肽,疏水性是蛋白质发生聚集的主要作用力,能够固定N、C末端,加强与底物的相互作用。推测PGL-S1融合蛋白的表面疏水性提高,促进了对底物的催化效率,具有巨大的工业应用潜力。
- 汪明星刘松刘龙堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶
- 融合自组装双亲短肽提高碱性果胶酶热稳定性被引量：5
- 2015年
- 考察了N-端融合自组装双亲短肽（SAP）对PGL热稳定性的影响.将6种具有不同疏水性和柔性的SAP融合至Bacillus sp.WSHB04-02 PGL N-端,得到融合酶PGL-S1、PGL-S2、PGL-S3、PGL-S4、PGL-S5和PGL-S6.与PGL相比,融合酶的55℃半衰期（t1/2）提高9.69 ～ 72.03倍;PGL-S1比酶活提高1.5倍达到458.52 U/mL,其他融合酶比酶活下降38.27％ ～93.94％.此外,6种融合酶Km均较PGL显著下降;S1-PGL的kcat/Km提高3.52倍,其他融合酶kcat/Km则下降38％以上.所有SAP-PGL融合酶最适反应pH均在pH 9.4～10.6,符合其工业应用环境要求.上述结果表明,N-端融合SAP能有效提高PGL热稳定性和催化活性,获得的融合酶S1-PGL具有理想的应用前景.
- 刘松汪明星堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶
