李重阳
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 家蚕C类清道夫受体BmSR-C的基因克隆、原核表达及亚细胞定位被引量：1
- 2018年
- 【目的】本研究旨在克隆与鉴定家蚕Bombyx mori C类清道夫受体基因BmSR-C,为探析其在家蚕免疫中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆家蚕C类清道夫受体基因全长序列,并对其进行生物信息学分析。利用RT-PCR和qPCR方法对BmSR-C基因的时空表达情况进行检测。通过原核表达和Ni^+亲和层析的方法获得BmSR-C重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗BmSR-C多克隆抗体。利用ELISA法和Western blot分别对鼠抗BmSR-C蛋白多克隆抗体的效价和特异性进行检测。构建家蚕BmSR-C的真核表达载体,转染家蚕BmE细胞,分析该蛋白的亚细胞定位情况。【结果】克隆获得家蚕BmSR-C基因(GenBank登录号:BGIBMGA004577),其开放阅读框(ORF)全长为1 821 bp,编码606个氨基酸残基。BmSR-C具有典型的C类清道夫受体家族结构特征,主要由CCP, MAM和SO结构域以及靠近C端的单次跨膜结构域组成。进化分析结果显示鳞翅目昆虫SR-C单独聚为一支,家蚕BmSR-C与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda和大红斑蝶Danaus plexippus的同源蛋白亲缘关系最为接近。对BmSR-C基因的时空表达分析表明,BmSR-C在家蚕的马氏管和血细胞中高表达,而在其他组织中无明显表达;其在家蚕不同发育时期的血细胞中均有表达,且在4龄眠期的表达量达到峰值。ELISA检测结果显示,所制得抗体效价高达1∶128 000;Western blot检测结果显示,该抗体可以特异性识别重组蛋白。家蚕BmE细胞中的亚细胞定位结果表明BmSR-C主要定位于细胞膜。【结论】获得家蚕C类清道夫受体基因BmSR-C的完整cDNA序列及其表达特征;成功制备了BmSR-C的多克隆抗体,利用家蚕BmE细胞在细胞水平上分析了BmSR-C的亚细胞定位情况,推测其参与家蚕的生长发育及病原微生物入侵的免疫反应,为进一步研究BmSR-C的生物学功能奠定了基础。
- 申利许川张蕾张奎毛景欣潘光照李重阳胡仁建杨丽群崔红娟
- 关键词：家蚕原核表达亚细胞定位
- 原发性皮肤黏液癌复发被引量：1
- 2022年
- 报告1例术后复发的原发性皮肤黏液癌。患者男,55岁。左侧面部结节3年,术后病理诊断为黏液癌。手术切除后皮损又复发1年。系统检查未发现内脏肿瘤。皮肤科检查:左外眦下方见一直径1.2 cm的淡红色结节,表面毛细血管扩张,结节界限清析,表面光滑,触之质软,略有弹性,无明显触痛及压痛,与周围组织无粘连。皮损组织病理检查示瘤体位于真皮内,可见被纤维组织包绕分隔的黏液湖,黏液湖内见岛状瘤细胞团块。免疫组织化学病理:细胞角蛋白7(CK7)阳性;CK20、绒毛蛋白(villin)、甲状腺转录因子1(TTF1)、前列腺特异抗原(PSA)、S-100蛋白、p63蛋白、钙调蛋白(calponin)、平滑肌肌动蛋白(SMA)均阴性。诊断:原发性皮肤黏液癌术后复发。治疗:局部广泛切除肿瘤联合皮瓣修复。术后愈合良好,随访3年无复发。
- 师绍敏王欣欣冀雅聪李重阳邓朝伟张艳丽刘亚玲
- 关键词：复发
- 抗HPV16E7蛋白单抗69A6、杂交瘤细胞及其制备方法和应用
- 本发明公开了抗HPV16E7蛋白单抗69A6、杂交瘤细胞及其制备方法和应用，该杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C201720，该杂交瘤细胞能够分泌效价高的单克隆抗体，获得抗体能够与HP...
- 崔红娟胡仁建张奎李重阳潘光照
- 文献传递
- 抗HPV16E7蛋白单抗69A6、杂交瘤细胞及其制备方法和应用
- 本发明公开了抗HPV16E7蛋白单抗69A6、杂交瘤细胞及其制备方法和应用，该杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C201720，该杂交瘤细胞能够分泌效价高的单克隆抗体，获得抗体能够与HP...
- 崔红娟胡仁建张奎李重阳潘光照
- 文献传递
- 整合素BmIntegrin β2的结构分析及其对家蚕血细胞的调控作用
- 2018年
- 整合素是一类广泛分布于细胞表面的黏附分子受体,是由α和β两个亚基组成的异源二聚体跨膜蛋白,其是细胞内外信号转导的中间桥梁。在鳞翅目昆虫细胞内,整合素主要表达于血细胞,参与昆虫细胞免疫反应进程。文中首先通过RACE技术等,克隆获得BmIntegrin β2基因cDNA全长序列2 434 bp;并对其蛋白结构域进行了预测,主要包括信号肽、一段较大的胞外域,单次跨膜结构和较短的胞内域;利用qRT-PCR技术检测了家蚕4龄3天和5龄3天的BmIntegrin β2各组织表达图谱,结果显示其主要在血细胞和造血器官中高表达;然后再经原核诱导表达、蛋白纯化及免疫动物后获得BmIntegrin β2抗体。通过对BmIntegrin β2蛋白功能作用的研究发现,BmIntegrin β2抗体可显著地减少浆细胞的数量,这从侧面说明BmIntegrin β2抗体可能抑制了浆细胞的延伸性和粘附能力。该结果不仅为BmIntegrin β2参与家蚕细胞的免疫反应奠定了基础,还提供了一个新的研究视野。
- 赵二虎赵二虎苏晶晶张奎李重阳申利潘光照崔红娟
- 关键词：整合素浆细胞粘附细胞免疫
- 家蚕组织蛋白酶L(BmCathepsin L)基因鉴定、表达及其功能分析被引量：3
- 2017年
- 【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB)中序列BGIBMGA006893设计引物,利用RACE技术克隆家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA全长序列,通过在线工具对基因结构和蛋白质分子量及等电点进行预测;在NCBI数据库下载其他物种组织蛋白酶L同源序列,利用Clustalx(1.83)和MEGA 6.0软件进行同源比对并构建进化树。运用RT-PCR和qRT-PCR对其时空表达特征进行分析。选取该基因的特异性片段,经PCR扩增,测序验证后将其连接至pET-28载体,转化至Rosseta感受态表达菌株,经IPTG在适宜温度条件下诱导,获得组织蛋白酶L重组蛋白。然后再利用镍离子亲和层析法对该蛋白进行纯化,获得纯度较高的重组蛋白。最后利用大肠杆菌对家蚕血液系统进行攻毒,检测家蚕组织蛋白酶L基因的表达水平。【结果】通过查询家蚕基因组数据库和生物信息学分析得出,家蚕组织蛋白酶L基因定位于家蚕第10号染色体上,基因编号为BGIBMGA006893,nscaf2860。基因开放阅读框全长687 bp,编码228个氨基酸,含有保守的Pept_C1结构域。通过在线网站预测,得出该蛋白酶的分子量为26.132 k D,等电点为4.57。进化分析表明该基因与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾和黑脉金斑蝶亲缘关系最为接近。RT-PCR显示该基因集中表达于血细胞,在血液不同龄期也较高表达。用His抗体检测经纯化后的蛋白,最终成功孵育出纯化后的蛋白条带;大肠杆菌个体攻毒免疫试验检测显示,其mRNA表达水平随攻毒时间呈现抛物线式的显著性变化规律,从而揭示出BmCat L与家蚕免疫系统的关联性。【结论】克隆获得家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA序列,发现其特异性高表达于血细胞。通过�
- 潘光照张奎李重阳赵羽卒申利徐曼苏晶晶林西崔红娟
- 关键词：家蚕蛋白纯化免疫应激
- 家蚕整合素Bmintegrin β1基因的克隆及表达被引量：3
- 2017年
- 整合素作为一种跨膜糖蛋白,与生物体的生理和病理等多个过程密切相关。为了探究其在家蚕中扮演的角色,通过PCR及RACE技术克隆得到了家蚕整合素β家族成员Bmintegrinβ1,通过结构域预测网站对其结构域进行了预测,并构建进化树对其进化关系进行分析,此外通过原核表达系统及蛋白纯化方法获得其重组蛋白,使用重组蛋白免疫小鼠获得其多克隆抗体,并采用半定量PCR及Western blotting方法检测Bmintegrin β1的时空表达。文中得到家蚕整合素Bmintegrin β1的3种剪切形式,且这3种剪切体具有长为2 502 bp的开放阅读框架,编码833个氨基酸。根据预测该蛋白含有Integrin-B-tail、跨膜区等一系列整合素家族保守的结构域。进化树结果表明该蛋白与同为鳞翅目成员的烟夜蛾和黑脉金斑蝶的整合素蛋白最为接近。此外我们通过原核表达系统及亲和层析技术获得了高纯度的Bmintegrin β1蛋白,进一步制得多克隆抗体。并通过免疫印迹反应证明该抗血清能特异识别Bmintegrin β1重组蛋白。之后通过半定量PCR及免疫印迹检测,结果显示该蛋白在家蚕的各组织以及血细胞各时期均有较高表达且在血液中表达量最高。总之,这项研究为家蚕整合素家族的研究提供了基础。
- 李重阳张奎申利赵羽卒潘光照徐曼苏晶晶崔红娟
- 关键词：家蚕原核表达多克隆抗体制备
- 黄杨碱诱导胃癌发生内-溶酶体自噬的机制研究
- 胃癌作为世界范围内的主要癌症之一,其发病率居全球第五位,死亡率居全球第四位,严重威胁人类的生命健康。胃癌由于原发于空腔脏器,并且易形成腹膜转移,使用目前的影像学检测体系很难对早期胃癌进行筛查。使得超过六成患者在确诊时出现...
- 李重阳
- 关键词：胃癌顺铂联合用药
- 文献传递
- 提高发酵桑叶饲料必需氨基酸含量的复合菌剂被引量：15
- 2015年
- 采用复合菌剂对桑叶进行发酵处理,提高桑叶用作畜禽饲料的营养价值。选用枯草芽孢杆菌、植物乳酸杆菌、啤酒酵母和米曲霉菌4种饲料级微生物添加剂菌种,设计至少由3个菌种组合且分高、中、低添加剂量的共9个复合菌剂配方,测定经不同配方复合菌剂发酵处理后桑叶饲料中的粗蛋白、17种游离氨基酸等营养成分的含量变化,筛选较优的用于桑叶饲料发酵的复合菌剂配方。经9个配方复合菌剂发酵处理的桑叶饲料与发酵前的桑叶粉比较:粗蛋白含量均极显著增加(P<0.001);17种游离氨基酸含量也有不同程度提高,其中除色氨酸外的7种必需氨基酸含量较显著(P<0.01)或极显著(P<0.001)增加,3种重要氨基酸(谷氨酸、蛋氨酸和赖氨酸)的含量总和极显著增加(P<0.001)。综合检测结果,用3个菌种组合的高菌量和中等菌量复合菌剂发酵处理桑叶饲料,可明显提高桑叶饲料的蛋白质含量和品质,这6个配方的复合菌剂可用于改善桑叶饲料产品的营养品质。
- 胡仁建杨丽群蔡家利周丽黄永福李重阳王鹏向仲怀崔红娟
- 关键词：畜禽饲料桑叶粉复合菌剂营养成分
- 重庆两株H5N1流感病毒的HA、NA基因克隆及序列分析
- 2017年
- 2012年,从重庆北碚区和巴南区的家禽养殖场死鸭和病鸡体内分离出两株H5N1禽流感病毒,分别命名为A/duck/Chongqing/BB/H5N1和A/chicken/Chongqing/BN/H5N1,并对这两株H5N1禽流感病毒的HA、NA和M蛋白的基因进行了克隆及序列分析,在基因和蛋白质水平上分析其同源性。遗传进化树分析结果表明:这两毒株的HA、NA和M基因不处于同一支上,亲缘关系较远;这两毒株的HA、NA、M蛋白的基因同源性分别达95%,95%,97%;两毒株的HA蛋白裂解位点氨基酸序列均为RERRR-KR,符合高致病性禽流感的特征。本次分离的流感病毒的基因克隆鉴定和序列分析为禽流感的流行病学研究、疫苗研制以及防控提供重要理论依据。
- 胡仁建顾盼蔡家利刘海军丁森张奎李重阳陈华王冬梅
- 关键词：H5N1进化分析
