目的研究高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态与刚度的影响。方法将SD大鼠随机分为高脂饲养组(AS组,n=3)与对照组(CON组,n=3),利用植块法获得大鼠胸主动脉内皮细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态,通过荧光染色比较两组细胞F-actin平均荧光强度,利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)检测细胞刚度。结果细胞在植块后第7 d有少量细胞爬出,第14 d细胞融合成单层,利用Ⅷ因子免疫荧光染色法证实为内皮细胞。高脂饮食引起细胞周长(P<0.01)、长轴/短轴比率(P<0.01)、面积增大(P>0.05);细胞圆度减小(P<0.01)。高脂组F-actin平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01)。AFM显示高脂饲养引发内皮细胞刚度显著增大(P<0.01)。结论高脂饮食将引发内皮细胞形态与刚度发生改变,进而影响血管正常功能,使其成为动脉粥样硬化的重要诱因。
目的小口径人工血管植入人体后的急性血栓问题,至今困扰着临床。快速实现人工血管的内皮化是抑制血栓形成,达到长期通畅率的根本。然而,目前内皮化的策略尽管在动物实验上可行,运用到临床效果却不尽人意。本研究从动物模型选择的角度,去研究健康/病理动物内皮细胞表达谱的差异。方法将SD雄性大鼠分为两组:对照组(Control)和动脉粥样硬化实验组(AS)。对照组饲喂基础饲料,AS组饲喂高脂饲料。12周后,取对照和AS大鼠主动脉弓至腹主动脉段,提取内膜RNA,作表达谱分析。芯片扫描得到的原始数据做归一化处理,表达倍数差异以及t检验统计学方法筛选出差异基因,筛选标准为:表达倍数差异≤0.5或者表达倍数差异≥2,P<0.05。结果对颈动脉做冰冻切片以及油红-0染色。结果表明,对照组大鼠颈动脉内壁光滑,油红-O染色呈阴性。AS组大鼠则在血管内壁得到不同程度的阳性结果。该结果提示,高脂饲喂大鼠12周后,出现了动脉粥样硬化斑块,该模型造模成功。相对于Control组,AS组有29个基因显著上调,19个基因显著下调。对显著差异的48个基因作进一步筛选,可获得与细胞生长、增殖相关的基因8个:Ccne2(0.25倍)、Slc7a11(0.25倍、Zbtb16(0.46倍)、Hamp(0.36倍)、Egr2(0.41倍)、Hpgds(2.84倍)、Wnt2(3.2倍)、Cd7(2.75倍);与免疫反应相关的基因有4个:Zp2(0.05倍)、Tnfrsf 17(0.18倍)、Acp5(2.48倍)、Vtcn1(2.43倍)。且表达谱芯片和real time PCR的结果基本一致。结论由此可知,健康/病理大鼠主动脉内皮细胞的表达谱的确存在差异,且差异基因中,与细胞增殖\生长、免疫反应等相关的基因存在不同程度的上调或下调,提示相关的蛋白以及细胞的功能可能出现了差异,这或许是内皮化差异的根本原因。
