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miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用: 2016年; 目的利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用。方法合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中。将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平。结果成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P<0.05)。结论证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据。; 张议心王利新徐广贤杨丽赵瑾郭文伟刘新兰; 关键词：TGF-Β信号通路 SMAD2基因肿瘤

犬细小病毒宁夏株的分离与鉴定: 2015年; 本试验采集宁夏地区疑似犬细小病毒感染病犬的粪便拭子,经过预处理后同步接种胎猫肾细胞(FK81),盲传3代后发现FK81细胞出现明显的细胞毒性改变(CPE)。冻融收获病毒后,对分离出来的病毒进行电镜观察、间接免疫荧光试验(IFA)检测、特异性PCR鉴定及VP2全基因序列扩增分析,成功分离培养出1株犬细小病毒(CPV)。; 杨丽段相国刘宏鹏徐广贤郭文伟张议心赵瑾; 关键词：犬细小病毒 VP2基因

犬瘟热病毒的分离与鉴定被引量：6: 2016年; 本试验收集了疑似犬瘟热病毒(CDV)感染病犬的粪便拭子,预处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养。对分离出的病毒进行毒力测定、电镜形态学观察、特异性基因鉴定和N基因全长扩增、间接免疫荧光(IFA)检测。结果显示,在Vero细胞盲传至第4代,90%以上细胞出现稳定的细胞毒性改变(CPE);病毒粒子有囊膜,形状不规则;RT-PCR成功扩增出特异性基因和N基因。IFA结果显示,在细胞胞质中可观察到特异性绿色荧光。结果表明,本试验成功分离并鉴定出1株宁夏地区CDV毒株。; 杨丽徐广贤段相国张议心郭文伟赵瑾; 关键词：犬瘟热病毒 N基因基因扩增

5-杂氮-2'脱氧胞苷对肝癌细胞SMMC-7721 miR-1247-5p基因表达及其启动子区甲基化的影响被引量：2: 2016年; 目的观察正常人肝细胞系LO_2和肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p的表达,研究去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达及其基因启动子区Cp G岛甲基化水平的影响。方法用不同浓度(0、5和10μmol/L)去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷处理SMMC-7721细胞,用甲基化特异性PCR法检测miR-1247-5p基因启动子区甲基化水平;用SYBR Green qReal Time PCR法检测miR-1247-5p的表达。结果与正常人肝细胞系LO_2相比,肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达降低(P<0.05)且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平高;经去甲基化药物干预后miR-1247-5p的表达较对照组有明显上调(P<0.01),且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平降低。结论 miR-1247-5p基因甲基化调控可能参与了肝癌的发生。; 郭文伟徐广贤段相国赵瑾杨丽张议心魏军; 关键词：肝癌细胞甲基化

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郭文伟