李鑫
- 作品数：16 被引量：31H指数：3
- 供职机构：武警后勤学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
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- 小鼠Krüppel样因子4 RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定被引量：2
- 2017年
- 【目的】构建小鼠Krüppel样因子4 RNA干扰慢病毒表达载体,并观察KLF4基因在小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞中的表达情况。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,合成、制备KLF4-sh RNA DNA片段,与载体连接构建真核表达慢病毒干扰载体p LVX-KLF4-sh RNA,转化感受态,筛选阳性克隆,并进行测序鉴定。在Lipofectamine~?3000的介导下,p LVX-KLF4-sh RNA1/2与ps PAX2、p MD2.G辅助质粒共转染293T细胞,包装产生病毒Lenti-KLF4 1/2,将重组的慢病毒感染RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测KLF4 m RNA的表达。收集病毒上清并浓缩测定病毒滴度。【结果】经测序证实,沉默小鼠KLF4基因的真核表达慢病毒干扰载体构建成功,倒置荧光显微镜下可见包装细胞293T细胞表达绿色荧光,RT-PCR证实RAW264.7细胞中KLF4 m RNA的敲除效率分别在60%、75%左右(P<0.05)。初次浓缩后测定小鼠KLF4基因重组慢病毒的滴度为1.65×108TU/ml。【结论】成功构建出KLF4的RNA干扰慢病毒载体p LVX-KLF4-sh RNA 2可用,并包装出慢病毒,为本实验在后续的体内体外研究中探讨KLF4的作用机制奠定了实验基础。
- 李鑫周茂彬李琦孙亮李祎马永强周欣姬文婕魏路清
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- 甘草酸对博莱霉素诱导的实验性肺纤维化的干预作用被引量：12
- 2017年
- 目的:探讨甘草酸(GA)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化的干预作用及其可能机制。方法:将160只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、BLM+NS组和BLM+GA组。通过口咽气管吸入法吸入博莱霉素(2.5 mg/kg)建立实验性肺纤维化模型,BLM+GA组及BLM+NS组每天给予40 mg/kg甘草酸或等体积的生理盐水灌胃,于术后第3、7、14、21天取材。采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用流式细胞术检测循环单核细胞和肺泡巨噬细胞的亚群比例变化,采用RT-qPCR检测肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平,采用碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量。结果:与NS组相比,BLM组和BLM+NS组肺组织的炎症浸润及胶原含量明显增多,实验性肺纤维化模型制备成功。与BLM+NS组相比:BLM+GA组肺组织的炎症细胞浸润及胶原纤维沉积较少;第3、7天的Ly6C^(hi)单核细胞亚群比例和第7、14天肺泡巨噬细胞M2表型比例显著降低(P<0.01);肺组织TGF-β1 mRNA表达量和HYP含量显著降低(P<0.01)。结论:GA可以减轻博莱霉素诱导的小鼠肺组织的炎症反应和胶原纤维沉积,可能与GA对单核巨噬细胞的表型偏移和调控以及肺组织TGF-β1的表达下调有关。
- 李祎李鑫李琦苏程程周欣彭守春魏路清姬文婕
- 关键词：甘草酸肺纤维化单核细胞肺泡巨噬细胞转化生长因子Β1
- 钴原卟啉上调HO-1表达对脂多糖诱导的急性肺损伤的影响
- 目的：探讨钴原卟啉(CoPP)在内毒素诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠模型中上调血红素加氧酶-1(HO-1)对小鼠肺组织炎症损伤的影响。材料与方法：小鼠随机分为生理盐水(NS)组、脂多糖(LPS)组、LPS+NS组以及LP...
- 李鑫姬文婕魏路清
- 关键词：急性肺损伤血红素加氧酶-1脂多糖钴原卟啉
- 血红素氧化酶-1基因过表达对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响
- 2017年
- 【目的】建立血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)稳定过表达细胞株RAW264.7,探讨HO-1过表达对其增殖活性和细胞凋亡的作用。【方法】用携带小鼠HO-1基因的重组慢病毒感染小鼠RAW264.7细胞,经嘌呤霉素筛选获得HO-1稳定过表达细胞株。细胞分为野生型组(WT)、阴性对照组(NC)和过表达组(Lenti-HO-1)。用Real-Time PCR检测细胞中HO-1mRNA的表达。用Western blotting检测细胞中HO-1蛋白的表达。用CCK-8法检测细胞的增殖活性。用流式细胞术检测细胞的凋亡水平。【结果】HO-1慢病毒能促进RAW264.7细胞HO-1 mRNA和蛋白的稳定过表达。Lenti-HO-1组细胞的增殖活性显著低于WT组和NC组(P<0.05)。Lenti-HO-1组凋亡细胞的比例显著高于NC组(P<0.05)。【结论】本研究成功构建了HO-1稳定过表达的RAW264.7细胞株,HO-1过表达能够降低RAW264.7细胞的增殖活性,增加凋亡细胞的比例,其为进一步探讨HO-1在巨噬细胞所参与病理生理机制中的作用奠定了基础。
- 周茂彬李鑫李琦姬文婕焉力方闫睿周欣李玉明
- 关键词：血红素氧化酶-1RAW264.7巨噬细胞细胞增殖慢病毒
- 小鼠Krüppel样因子4RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 目的 构建小鼠KLF4 RNA干扰慢病毒表达载体,为后期进一步探讨KLF4与间质性肺疾病的作用机制奠定实验基础. 方法 制备KLF4-shRNA DNA片段,与载体连接构建干扰载体pLVX-KLF4-shRNA,转化DH...
- 李鑫
- 关键词：小鼠RNA
- 1968-2013年我国季节性流感H3N2亚型的进化分析
- 2015年
- 目的了解我国季节性流感H3N2亚型在1968-2013年间的进化状况,为更好地防范该型流感提供依据。方法从流感基因数据库中（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/FLU/Database/）获取在中国发现的季节性流感病毒H3N2亚型的8个基因片段,采用BEAST v1.7.4进行BMCMC时间进化分析,获得Bayesian skyline图。结果季节性流感H3N2亚型在时间进化上其各片段核酸变异率总体在0.26-37.32∕（碱基·年）,进化曲线明显地反映出流感在1968-2013年间进化不同。结论季节性流感H3N2亚型的进化在今后一段时间里仍会比较活跃,其中各个片段的进化情况不一致,变化较大的时间拐点值得深入分析。
- 李鑫魏茂提赵国平覃琨刘淑红胡役兰兰晓霞姬文婕魏路清
- 关键词：季节性流感H3N2亚型进化模型病毒
- 丹参提取物对百草枯致小鼠肺损伤的保护作用及相关机制研究
- 目的：探讨丹参提取物对小鼠百草枯(paraquat,PQ)中毒致肺损伤保护作用及可能的作用机制.方法：80只小鼠随机分为正常对照组,模型组,丹参提取物低剂量组(200mg/kg),丹参提取物高剂量组(400mg/kg)....
- 刘斌肖娜曹波彭守春李鑫李国强魏路清
- 关键词：丹参提取物百草枯肺损伤TGF-Β1IL-6IL-17
- 百草枯致小鼠肺损伤后其单核巨噬细胞亚群的变化及意义
- 目的 研究百草枯致小鼠肺损伤后其单核巨噬细胞亚群的的变化规律与肺炎症损伤和纤维化的关系。 方法 小鼠随机分为NS组和PQ组,PQ组腹腔注射百草枯,NS组以相同的方式给予等体积的生理盐水;取下颌静脉血、肺泡巨噬细胞及肺间质...
- 李鑫
- 关键词：百草枯小鼠肺损伤单核巨噬细胞
- 钴原卟啉上调HO-1表达对脂多糖诱导的小鼠肺组织炎症损伤的影响
- 2017年
- 【目的】探讨注射钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,Co PP)在内毒素诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠模型中上调血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对小鼠肺组织炎症损伤的影响。【方法】120只16~18 g雄性C57BL/6小鼠随机分为生理盐水(normal saline,NS)组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组、LPS+NS组以及LPS+钴原卟啉(Co PP)组。采取经腹腔注射LPS(5 mg/kg)法建立实验性ALI模型。LPS+Co PP组及LPS+NS组均在注射LPS造模之前4 h,分别预先经腹腔注射给予Co PP(5 mg/kg)或等体积的无菌NS。在1、3、7天后分别取材,采用HE染色观察肺泡、肺间质炎症浸润情况并进行炎症评分(inflammatory score,IS);采用BCA蛋白定量法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白含量,ELISA检测BALF及血清中白介素-8(interleukin 8,IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)含量;使用乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒用微板法检测BALF中LDH活性;右肺分别提取总RNA或总蛋白,采用RTPCR联合2-△△Ct计算方法检测评估HO-1 m RNA相对表达量,Western blotting检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)蛋白表达水平。【结果】在第1天,LPS+Co PP组HO-1 m RNA水平均明显高于LPS+NS组(P<0.01),在第3天持续升高(P<0.01),第7天各组无差异。与NS组相比,LPS组及LPS+NS组小鼠第1天的IS、BALF总蛋白含量和LDH活性及BALF和血清中IL-8、MCP-1水平均明显增高;在第3天持续升高,且肺组织MPO蛋白表达量亦增高(P<0.01)。与LPS+NS组相比,LPS+Co PP组小鼠第1天的IS、BALF总蛋白含量、LDH活性及BALF和血清中IL-8水平均降低,在第3天除以上4个指标持续降低外,BALF及血清中MCP-1、肺组织MPO蛋白表达水平也均降低(P<0.01)。【结论】Co PP上调HO-1 m RNA的表达,可能是通过下调炎性趋化因子IL-8和MCP-1的分泌,缓解了肺组织炎症反应,有助于LPS诱导的ALI的修复。
- 李鑫向国安苏程程马永强周欣彭守春魏路清姬文婕
- 关键词：血红素加氧酶-1脂多糖钴原卟啉
- 肺纤维化模型小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的动态变化及意义被引量：8
- 2017年
- 目的探讨博莱霉素诱导的肺纤维化模型小鼠肺泡巨噬细胞(AM)凋亡的动态变化及意义。方法 100只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组各50只。模型组采用口咽吸入法给予博莱霉素A2(2.5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组给予等体积生理盐水。建模后第1、3、7、14和21天每组随机处死10只动物,5只采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化,计算炎症评分及肺系数;另5只采用碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(Hyp)的含量;记录肺泡灌洗液(BALF)中AM数目,流式细胞术检测AM凋亡情况。结果模型组小鼠第3天肺组织出现炎症细胞浸润、肺泡壁水肿增厚,炎症评分明显升高;第7天时炎症程度继续加重,炎症评分进一步升高;第14天和第21天时出现纤维增生和胶原沉积;第21天时炎症评分较第7天和第14天下降。第21天时模型组Hyp含量较第1、3、7天均明显升高,但与第14天相比无明显差异。在整个实验过程中,模型组的肺系数,AM数目及凋亡率呈现先升高后降低的变化,于第7天达到峰值。结论在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中,AM的数目和凋亡水平在前期的炎症反应阶段明显升高,在肺纤维化阶段出现下降。动态变化的AM可能在肺纤维化进展过程中发挥不同的作用。
- 李鑫李琦李祎苏程程周欣彭守春魏路清姬文婕
- 关键词：肺纤维化羟脯氨酸博莱霉素
