蔡怡
- 作品数:6 被引量:21H指数:3
- 供职机构:宁波大学更多>>
- 发文基金:浙江省重大科技专项基金国家高技术研究发展计划国家级星火计划更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立被引量:1
- 2016年
- 采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10^(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。
- 周前进陈先锋蔡怡段丽君段维军苗亮陈炯
- 关键词:孔石莼内转录间隔区环介导等温扩增技术
- 重要根结线虫等温扩增碟式芯片的研发
- 根结线虫(Meloidogyne spp.)是植物病原线虫中分布最广、危害最严重的类群之一,几乎能侵染绝大部分高等植物。在我国,根结线虫(非中国种)已被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》,建立快速有效的检测...
- 蔡怡
- 关键词:根结线虫环介导等温扩增植物检疫
- 文献传递
- 环介导等温扩增联合横向侧流试纸(LAMP-LFD)对嗜水气单胞菌快速检测方法的建立被引量:9
- 2016年
- 以嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因为检测靶标,设计6条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记探针,建立了嗜水气单胞菌的LAMP-LFD快速检测方法。该方法的流程可简单概括为将生物素标记的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成检测。经优化,LAMP最佳反应条件为63℃,反应30min,从LAMP扩增到LFD结果判读仅需40min,比常规PCR检测缩短近2h。试验结果表明,LAMP-LFD可特异性检出嗜水气单胞菌,对鳗弧菌等常见水产或食源性病原菌检测结果为阴性;其针对细菌纯培养物的检测灵敏度达2.03×101 CFU/mL或0.81CFU/反应,是常规PCR(以F3/B3为引物)的100倍;可从人工污染1×102 CFU/mL浓度的嗜水气单胞菌的鲫鱼肝组织匀浆样品中检测到细菌。嗜水气单胞菌(106 CFU)人工感染鲫鱼24h,传统的细菌分离培养方法可获得肝、肾的载菌量分别为1.2×105 CFU/g和6×103 CFU/g;利用LAMP-LFD技术可成功从鲫鱼的肝、肾组织中检测出该病原;以F3/B3为引物的PCR方法仅能从感染鲫鱼的肝组织中检测到该病原菌,表明面对实际感染样品,LAMP-LFD的检测灵敏度优于PCR方法。因此,该方法可快速、灵敏、特异地检测出嗜水气单胞菌,而且操作简单,仪器设备依赖性低,有望成为嗜水气单胞菌现场检测的常规技术手段。
- 蔡怡周前进陈炯
- 关键词:嗜水气单胞菌环介导等温扩增
- 环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测哈维氏弧菌的研究被引量:9
- 2016年
- 以哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)为材料,利用环介导等温扩增技术(LAMP)进行核酸扩增,借助横向流动试纸条(LFD)完成产物检测,旨在建立一种可用于哈维氏弧菌快速检测的LAMP-LFD新技术。以哈维氏弧菌的溶血素基因(vhh A)为检测靶标设计了3对特异性引物(其中,上游内引物vhh A-FIP由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。经优化,LAMP的反应条件为63℃反应40 min,由LFD完成结果判读共需50 min。结果表明,LAMP-LFD方法能特异性地检出哈维氏弧菌,对创伤弧菌等其他9种水产养殖重要病原菌的检测结果呈阴性。利用该方法,针对细菌纯培养物的检测灵敏度为1.0×102 CFU/m L或2 CFU/反应,针对污染有该菌的大黄鱼组织的检测灵敏度为5×102 CFU/m L或20 CFU/反应,均是以LAMP外引物vhh A-F3/vhh A-B3的常规PCR方法的100倍。因此,该方法能够快速、准确地检出哈维氏弧菌,有望在海水养殖过程哈维氏弧菌的监测和即时检测中普及使用。
- 程蝶柴方超蔡怡周前进陈炯
- 关键词:哈维氏弧菌溶血素基因环介导等温扩增技术
- 重要根结线虫等温扩增芯片检测体系的建立
- 根结线虫(Meloidogyne spp.)是植物病原线虫中分布最广、危害最严重的类群之一,几乎能侵染绝大部分高等植物。在我国,根结线虫(非中国种)已被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》,建立快速有效的检测...
- 乔艳蔡怡周前进陈炯
- 关键词:根结线虫环介导等温扩增微流控芯片
- 文献传递