李倩文
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家级星火计划安徽省高等学校省级质量工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 检测猪丹毒杆菌抗体重组SpaA ELISA的建立被引量：7
- 2017年
- 【目的】利用表达纯化的猪丹毒杆菌表面保护性蛋白SpaA,建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【方法】克隆扩增猪丹毒杆菌SpaA基因,并将SpaA基因与原核表达载体p GEX-6P-1连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌E.coli Rosetta(DE3),并利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。将SpaA重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的猪丹毒杆菌SpaA蛋白作抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1.0 mg/L,血清的最佳稀释度为1:100,建立了检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,批内及批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性及特异性。用建立的间接ELISA方法检测猪丹毒疫苗免疫后的健康猪血清样品,检测结果与美国TSZ公司猪丹毒杆菌抗体检测试剂盒和Western blot鉴定结果进行对比,两者总符合率分别为92.20%、92.59%。【结论】试验利用原核表达的SpaA重组蛋白作抗原建立的检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性强、重复性好、敏感性高,可用于猪丹毒杆菌的抗体检测及流行病学调查。
- 姚焱彬李倩文杨志鹏陆萍魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪丹毒杆菌克隆表达间接ELISA
- 猫口炎的流行病学调查被引量：8
- 2016年
- 为了了解目前国内猫口炎的流行特点及诊疗现状,探讨其发生发展规律,课题组采用填写调查问卷和电话咨询的方法,对国内宠物行业较为发达的九个地市猫口炎发生和防治情况进行统计。结果表明：该病无明显的性别、季节差异,1~7岁龄的猫易发;猫口炎病因复杂,细菌和病毒感染是主要致病因素;该病在临床症状、治疗周期及并发症等方面均存在显著的个体差异;该病无特异疗法,多采用西药对症治疗,少数采用中兽医或中西医结合治疗的方法。说明深入研究猫口炎的流行特点及实验室诊断方法对认识该病十分必要,可为减少该病的发生和制订有效防治方法提供技术指导。
- 康佑汐杨明川刘翠艳周杰宋志成赵丽东李倩文韩春杨
- 关键词：口炎流行病学病因症状
- APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定被引量：1
- 2021年
- 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室前期预测了新的ETT2伴侣分子YgeG,为了获得大量有活性的YgeG蛋白,对其功能进行鉴定,并筛选出与其相关的具有活性的ETT2分泌效应蛋白,将对目的蛋白原核表达条件进行优化。以禽致病性大肠杆菌菌株81(AE81)为模板对基因ygeG进行扩增,将扩增产物克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,构建重组质粒pGEX-6p-1-ygeG,并进行测序鉴定。经鉴定正确后的重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化。SDS-PAGE及Western Blot鉴定结果显示,本试验中表达的最佳条件为:IPTG终浓度为0.25 mmol/L,16℃诱导16 h。重组蛋白大小约为44 ku,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,主要以可溶性蛋白的形式存在,并且具有良好的免疫原性和反应原性。成功表达了AE81-YgeG蛋白,为该蛋白的结构和功能及ETT2的深入研究奠定基础,为禽大肠杆菌病的防治提供理论依据。
- 姜楠郑倩倩李倩文涂健宋祥军邵颖刘红梅祁克宗
- 关键词：原核表达蛋白纯化
