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c-di-GMP通过趋化调节蛋白CheB／CheR调控钩端螺旋体运动被引量：1: 2017年; 目的问号钩端螺旋体（简称钩体）是引起钩体病的重要病原体，人类通过带菌动物尿液污染的疫水或疫土而感染，趋化和运动系统在钩体感染过程中发挥重要作用。钩体基因组序列分析表明其中有数个趋化调节蛋白CheB和CheR的编码基因，但其具体的调控机制未知。方法Real-timePCR检测了钩体基因组中5个基因在钩体感染宿主细胞过程中mRNA的水平变化：T-A克隆了CheB和CheR的编码基因片段并构建了原核表达系统；检测了c-di-GMP浓度变化对CheB和CheR表达菌株表型的影响。结果在感染细胞60min后，cheBl的mRNA水平显著提高，cheB3也有一定程度的提高，而cheB2和cheR则无明显差异；成功构建了5个基因的原核表达系统，其中重组CheBl、CheB3和CheR2蛋白使大肠杆菌运动能力明显增强；在加入二鸟苷酸环化酶抑制剂和磷酸二酯酶抑制剂后，各表达菌株形成菌落大小与对照相比无明显不同，但CheB2菌落形态与对照相比出现明显褶皱。结论CheB和CheR可影响大肠杆菌的swarming运动能力，并受胞内c．di，GMP浓度的影响。; 孔亮亮肖国辉袁富迪严杰林旭瑷; 关键词：钩端螺旋体趋化

问号钩端螺旋体GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学分析被引量：1: 2016年; 目的分析问号钩端螺旋体(钩体)环二鸟苷酸(Cyclic dimeric-GMP,c-di-GMP)调节相关的GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学结果,为后续的功能研究奠定基础。方法 PSI-BLAST方法分析编码GGDEF和EAL/HDGYP结构域蛋白的基因;利用相应生物信息学软件对蛋白信号肽序列、跨膜序列、蛋白结构、同源性进行分析并构建目的蛋白进化树。结果问号钩体中22个蛋白分别含有GGDEF或EAL/HD-GYP结构域,多数蛋白均有感受器结构域和跨膜区。7个具有PAS输入感受器的GGDEF结构域蛋白进化较为独立,位于单独的一个分支,其余6个GGDEF结构域蛋白则分散在不同的分支上。4个EAL结构域蛋白和2个HD-GYP结构域蛋白进化上也较为独立,分别处于同一进化分支。3个GGDEF和EAL结构域耦合的蛋白在进化关系上更趋向于PDE活性蛋白。结论钩体具有多拷贝的合成和降解c-di-GMP相关蛋白编码基因,表明在钩体中c-di-GMP网络具有高度复杂性,同时反映出钩体对环境条件的改变具有复杂的应对机制。; 丁士标肖国辉孔亮亮严杰林旭瑷; 关键词：问号钩端螺旋体鸟苷酸环化酶

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肖国辉