史晓娜
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划内蒙古自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病的病理组织学和巢式PCR诊断被引量：7
- 2019年
- 为检测内蒙古地区是否存在梅迪-维斯纳病(Maedi-Visna dieas,eMVD),本试验以内蒙古呼浩特市周边某屠宰场采集的12份绵羊病肺组织为研究对象,采用组织病理学、巢式PCR和测序分析等方法进行检测。组织病理学结果显示:肺脏发生纤维化,并且肺泡腔内Ⅱ型肺泡上皮增生以及间质增宽,支气管和细支气管周围可见较多的淋巴滤泡增生;巢式PCR结果显示:病肺组织中有梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna viru,sMVV)G ag基因序列的特异性扩增,且与小反刍兽疫、绵羊肺腺瘤病毒以及支原体均无交叉反应。以上结果表明,内蒙古存在MVD。
- 王多智史晓娜张洁杨惠刘淑英
- 关键词：梅迪-维斯纳病巢式PCR组织病理学
- 基于Mo与Mmc葡萄糖和核苷酸代谢通路的转录组分析对Mo培养基改良的研究
- 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是引起绵羊、山羊呼吸系统感染并导致非典型性肺炎的主要病原菌,给全球养羊业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是防治该病最为有效的方式,而制约疫苗行业发展的...
- 史晓娜
- 关键词：绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种转录组测序
- 文献传递
- 绵羊肺炎支原体免疫组织化学及间接免疫荧光检测方法的建立被引量：8
- 2017年
- 以病理组织学观察为基础,建立检测绵羊肺炎支原体的间接免疫组织化学和间接免疫荧光方法,以绵羊肺炎支原体标准血清为一抗,分别以家兔抗山羊Ig G-HRP和家兔抗山羊Ig G-FITC为二抗,对绵羊肺炎支原体阳性肺组织切片及阴性对照组切片进行HE染色、免疫组织化学染色及间接免疫荧光染色,并优化染色条件,以确保组织切片在最佳的条件下进行鉴定。结果显示,本试验所建立的免疫组织化学方法与PCR方法对病样的检出率相符,且高于传统的分离培养法。结果表明,本试验建立的间接免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法可用于对临床病例的组织样本检测,具有很强的特异性和可靠性,可直观地观察和探究该病原在机体内的定位、动态分布以及致病机理,以期为临床诊断提供更可靠的方法。
- 张建华黄海碧王晓晖白帆史晓娜高媛王力强侯丽娜郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体免疫荧光免疫组织化学
- 绵羊梅迪-维斯纳病毒CA蛋白可溶性表达、多克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2022年
- [目的]制备绵羊梅迪-维斯纳病毒(maedi-visna virus,MVV)衣壳蛋白(capsid protein,CA)多克隆抗体,并鉴定其特异性。[方法]根据MVV内蒙古分离株CA基因序列设计特异性引物,扩增CA基因,构建重组质粒;对CA重组蛋白进行原核表达及纯化,制备兔源MVV CA重组蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA方法测定其抗体效价,利用Western blot和免疫组化方法对其进行特异性鉴定。[结果]成功构建MVV CA重组蛋白原核表达系统,纯化后的目的蛋白大小约27 kDa;间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价为1∶8192;Western blot检测感染MVV绵羊的病肺组织,在25 kDa处出现特异性条带;免疫组化结果显示感染MVV绵羊的病肺中巨噬细胞的胞浆内有明显棕黄色阳性信号。[结论]利用获得的可溶性重组MVV CA蛋白制备的多克隆抗体具有较好特异性,可为MVV血清学诊断技术提供检测抗体。
- 李慧萍陈思旭张良史晓娜史晓娜
- 关键词：绵羊衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 绵羊梅迪-维斯纳病毒CA-TM融合蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 2022年
- 为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体检测方法,本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白(CA)和MVV跨膜蛋白(TM)的抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因,构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM,将其转化大肠杆菌BL21后诱导蛋白表达并纯化,经SDS-PAGE检测结果显示,得到重组CA-TM蛋白(rCA-TM),r CA-TM以包涵体形式表达。以获得的rCA-TM作为包被抗原,采用方阵法优化各反应条件,建立了MVV间接ELISA检测方法。利用该方法检测羊临床常见病原阳性血清,结果显示,除MVV阳性血清以外,口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体等绵羊临床常见病原的阳性血清均为阴性,特异性较强,且该方法能识别感染MVV病畜体内产生的CA蛋白和TM蛋白抗体。将MVV阳性血清2倍倍比稀释(1:500~1:32 000)后,分别利用建立的MVV间接ELISA方法及商品化MVV抗体ELISA试剂盒检测,结果显示商品化MVV抗体ELISA试剂盒最低可检测出1:40 00倍稀释的阳性血清,而本研究建立的间接ELISA方法最低可检测出1:16 000倍稀释的阳性血清,敏感性较高。重复性试验结果显示,该方法批内、批间试验的变异系数分别为3.6%~6.9%、2.3%~8.5%,均小于10%,重复性较好。利用本实验建立的MVV间接ELISA方法和商品化MVV抗体ELISA试剂盒对69份绵羊临床样品检测,结果显示,本实验建立的ELISA方法检测出31份阳性样品,38份阴性样品;商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出37份阳性样品,32份阴性样品。二者的阳性符合率为83.7%,阴性符合率为100%,总符合率为91.3%。本研究首次基于MVV rCA-TM建立了MVV间接ELISA检测方法,且该方法能够分别识别CA蛋白抗体和TM蛋白抗体,不仅减少了因为血清转换而导致血清抗体检测不准确的影响,还扩大了检测范围,为内蒙地区绵羊梅迪-维斯纳病的诊断及净化提供了检测手段。
- 陈思旭张培史晓娜刘然刘淑英
- 关键词：间接ELISA方法原核表达融合蛋白
- 日本血吸虫钙网质蛋白活化宿主巨噬细胞的初步研究
- 2016年
- 为研究日本血吸虫钙网质蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,Sj CRT)活化小鼠巨噬细胞的功能,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统所表达的真核重组的Sj CRT蛋白与巨噬细胞共培养72 h,采用流式细胞术检测巨噬细胞表面趋化因子受体CCR7的表达。收集Sj CRT蛋白刺激72 h后的巨噬细胞,抽提RNA并反转录为c DNA,利用RT-PCR检测环加氧酶(cyclooxygenase,COX-2)、磷脂酶A2(phospholipases A2,PLA2)、TNF-α和IL-1β基因的表达。Sj CRT与巨噬细胞共孵育72 h后收集上清,ELISA检测上清中TNF-α的含量,Griess法测上清中NO的含量。流式结果显示,与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组的巨噬细胞表面CCR7的表达量增高且差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组巨噬细胞的COX-2、c PLA2、TNF-α和IL-1β表达量显著升高。ELISA结果显示,Sj CRT能够刺激巨噬细胞分泌致炎性因子TNF-α。Griess法表明Sj CRT能够促进巨噬细胞分泌NO。本研究结果表明Sj CRT能活化小鼠巨噬细胞,为阐明其在RA血吸虫疫苗中的功能等提供基础资料。
- 马丽贞李丹丹苑纯秀艾敏史晓娜塔娜冯新港
- 关键词：日本血吸虫巨噬细胞趋化因子受体
- 日本血吸虫高迁移率族蛋白活化鼠巨噬细胞的初步研究
- 2017年
- 为研究日本血吸虫高迁移率族蛋白(Schistosoma japonicum high mobility group box1,Sj HMGB1)体外活化小鼠巨噬细胞的功能,利用真核重组Sj HMGB1蛋白与巨噬细胞共培养48 h,流式细胞术检测巨噬细胞表面标志分子以及趋化因子受体的表达。收集Sj HMGB1蛋白与巨噬细胞共孵育48 h后上清,ELISA检测上清中TNF-α与IL-10的含量,Griess法检测上清中NO的含量。流式结果显示,与对照组相比,Sj HMGB1蛋白刺激组的巨噬细胞表面MHC-Ⅱ分子,TLR4受体以及趋化因子受体CCR7的表达显著上调且差异具有极显著统计学意义(P<0.01),TLR2受体的表达显著下调,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示,Sj HMGB1能够刺激巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α,未能促进抑炎因子IL-10的释放。Griess法表明Sj HMGB1能够促进巨噬细胞分泌NO。本研究结果表明Sj HMGB1可能通过TLR4通路活化小鼠巨噬细胞并诱导其向致炎性M1型巨噬细胞极化。
- 李丹丹李丹丹马丽贞苑纯秀史晓娜艾敏塔娜
- 关键词：日本血吸虫高迁移率族蛋白巨噬细胞TLR细胞因子
- 华北地区牛源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性被引量：22
- 2016年
- 【目的】了解华北地区牛源无乳链球菌的生物学特性。【方法】在2012到2015年间从内蒙古自治区、河北、北京等地隐性乳房炎557份奶牛乳样中分离、收集无乳链球菌。采用纸片扩散法和PCR的方法对这些菌株分别进行耐药谱测定、荚膜分子分型、表面蛋白基因及毒力因子的检测。【结果】无乳链球菌的分离率为5.03%,其药物敏感性与其他地区无明显差别。分离到的28株无乳链球菌均属于荚膜Ia型,且毒力基因基本相同并且其表面蛋白均属于未定型。【结论】华北不同地区的无乳链球菌有相似的药物敏感性和毒力基因。为奶牛乳房炎无乳链球菌疫苗的研制及药物防治提供理论依据。
- 杜琳周雪赵红梅吕天星崔健李松建史晓娜郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌血清型毒力因子
- 梅迪-维斯纳病毒在绵羊4种细胞中的增殖特性
- 2024年
- 为了解梅迪-维斯纳病毒(MVV)感染绵羊不同组织细胞的偏好性及其在不同细胞中的增殖情况,将MVV A2毒株接种绵羊成纤维细胞(OAR-L1)、绵羊脉络丛细胞(SCP)、绵羊滋养层细胞(STCs)、羊胎肾细胞(FLK-BLV),通过间接免疫荧光试验、PCR、Western-blot试验观察不同时间点细胞病变特征及检测MVV感染细胞后CA蛋白相对表达量,判断病毒在细胞中增殖情况。结果显示,SCP、OAR-L1这2种细胞在接毒组中可持续增殖,SCP出现多核合胞体细胞、拉丝等病变,并且细胞随着病毒感染时间的延长死亡程度增加;OAR-L1出现拉丝且细胞随着病毒感染时间延长死亡明显,未出现典型病变多核合胞体,对照组及空白组细胞状态良好,未见显著差异。FLK-BLV、STCs这2种细胞接毒组、对照组及空白组均未见明显变化。间接免疫荧光结果显示,SCP、OAR-L1这2种细胞接毒组出现绿色荧光,而FLK-BLV、STCs接毒组与对照组、空白组均未出现绿色荧光。SCP、OAR-L1细胞随着病毒感染时间延长,绿色荧光面积逐渐扩大,SCP接毒9 d后绿色荧光面积达到90%以上,为最佳感染时间;OAR-L1接毒12 d后绿色荧光面积达到90%以上,为最佳感染时间。Western-blot结果显示在25 ku处有明显条带,经ImageJ灰度值分析,CA蛋白相对表达量水平随着接毒时间的延长逐渐上调,与对照组和空白组有极显著差异(P<0.0001)。综上,本研究发现SCP、OAR-L1这2种细胞在感染MVV A2毒株后随着感染时间的延长病毒蛋白表达量逐渐升高,MVV在以上2种细胞中可持续感染,并找到1株细胞系可以持续感染生产慢病毒。
- 方卉史晓娜陈思旭刘淑英
- 关键词：细胞培养
- 梅迪-维斯纳病毒实时荧光RPA检测方法的建立被引量：1
- 2023年
- 为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测,根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,建立了MVV的实时荧光RPA检测方法,并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示:该方法最佳反应温度为39℃,用时短,20 min即可完成检测;灵敏度高,检测下限可达10-1pg/μL,比常规PCR检测结果灵敏约104倍;特异性强,与小反刍兽疫病毒、羊败血性链球菌、牛肠道病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、肺炎支原体等继发呼吸系统症状病原无交叉反应;重复性好,对于相同质量浓度的模板DNA检测变异系数均小于10%;可有效检测出MVV,与PCR结果一致。综上所述,本研究建立的MVV荧光RPA检测方法适用于MVV的临床快速检测,可为该病的诊断及防控提供依据。
- 刘然张琳陈思旭史晓娜刘淑英
- 关键词：性能评价
