- Pim-1在正常大鼠及视神经损伤后视网膜中的表达
- 张守梅王栋黄婷婷刘芳许家军
- Pim-1在组织中的表达及作用
- 2017年
- Pim-1为原癌基因,表达丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于钙-钙调蛋白调节激酶。它表达的激酶广泛存在于各组织细胞中,如胸腺、骨髓、结肠、睾丸、前列腺、心血管、大脑皮质、海马和视网膜等,并磷酸化特异性底物,参与细胞增殖、分化、存活等,如参与血管平滑肌及心脏祖细胞的增殖和存活,调节神经元兴奋性及可塑性,促进神经发育、受损心肌及神经元修复,保护呼吸道上皮,介导白细胞存活及炎症反应等,在组织发育、损伤和再生中起关键作用。
- 张守梅许家军王栋
- 关键词：苏氨酸蛋白激酶神经元兴奋性细胞存活调节激酶血管平滑肌
- 一种携带Pim‑1基因的腺相关病毒2及其在修复受损视神经中的应用
- 本发明涉及基因工程技术领域，视神经损伤后视网膜神经节细胞的内在再生能力低下，是视功能难以恢复的关键因素，如何有效治疗一直是临床医学面临的重大难题。本发明提供了一种携带Pim‑1基因的重组腺相关病毒2载体及其构建方法，所述...
- 许家军张守梅王栋刘芳黄婷婷
- 玻璃体注射腺相关病毒2和慢病毒转染大鼠视网膜的比较被引量：2
- 2016年
- 目的通过玻璃体注射重组腺相关病毒2载体(r AAV2)和慢病毒载体(LV),比较两者转染成年大鼠视网膜的异同。方法实验组大鼠60只,每组12只玻璃体内分别注射重组腺相关病毒2载体-增强绿色荧光蛋白(r AAV2-EGFP)、重组腺相关病毒2载体-神经突起素-增强绿色荧光蛋白(r AAV2-neuritin-EGFP)、慢病毒载体-红色荧光蛋白(LV-RFP)和慢病毒载体-神经突起素-红色荧光蛋白(LV-neuritin-RFP),对照组注射等量的生理盐水,4周后取材,采用免疫荧光和CTB-FITC检测2种病毒载体在视网膜中转染的细胞及转染率,然后分别采用Real-time PCR和Western blotting检测神经突起素(neuritin)在视网膜中的表达变化。结果 r AAV2能够转染约70%视网膜节细胞(RGCs),LV主要转染色素上皮细胞,RGCs转染率仅为30%;r AAV2-neuritin-EGFP组神经突起素mRNA表达约是r AAV2-EGFP组和对照组的16倍,蛋白表达约为3倍;LV-neuritin-RFP组神经突起素mRNA表达约是LVRFP组和对照组的5.5倍,蛋白表达约为1.7倍。结论 r AAV2玻璃体注射后,转染大部分RGCs且神经突起素表达量高于LV,LV主要转染色素上皮细胞,提示基因治疗眼科疾病和损伤时,涉及到转染RGCs时应采用r AAV2载体,转染色素上皮时宜采用LV载体。
- 黄婷婷曹文珞张守梅王栋许家军
- 关键词：慢病毒视网膜免疫印迹法
- 一种携带Pim-1基因的腺相关病毒2及其在修复受损视神经中的应用
- 本发明涉及基因工程技术领域，视神经损伤后视网膜神经节细胞的内在再生能力低下，是视功能难以恢复的关键因素，如何有效治疗一直是临床医学面临的重大难题。本发明提供了一种携带Pim‑1基因的重组腺相关病毒2载体及其构建方法，所述...
- 许家军张守梅王栋刘芳黄婷婷
- 文献传递
- Pim-1基因重组腺相关病毒2载体的构建及感染大鼠视网膜
- 2017年
- 目的构建携带大鼠原癌基因Pim-1的重组腺相关病毒2载体(rAAV2-Pim-1),检测其体内感染大鼠视网膜的细胞类型及目的基因Pim-1在视网膜中的表达。方法 p AOV-CAGMINI-EGFP-2A-MCS-3FLAG载体及Pim-1基因PCR产物用Nhel酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定后回收载体及目的基因DNA并连接转化,鉴定质粒阳性克隆及测序。rAAV2-Pim-1表达质粒p AOV-CAGMINI-EGFP-2A-Pim-1-3FLAG及包装质粒p AAV-RC和辅助质粒p Helper,通过Lipofectamine 2000共转染293细胞,纯化获得高滴度的rAAV2-Pim-1。大鼠玻璃体注射rAAV2-Pim-1,用免疫荧光组织化学检测其感染视网膜的细胞类型;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在视网膜中的表达。结果rAAV2-Pim-1质粒构建成功并且核苷酸序列比对正确;质粒转染293细胞后出现绿色荧光;包装出的病毒浓缩滴度为5.7×1015vg/L。rAAV2-Pim-1组体内感染视网膜神经节细胞(RGCs)达71%,并感染少量无长突细胞,几乎不感染星形胶质细胞;Pim-1 mRNA和蛋白在视网膜中的表达约为rAAV2-EGFP组的6.61倍和2.29倍。结论成功构建rAAV2-Pim-1病毒载体,并在感染后的大鼠视网膜RGCs中过表达Pim-1。
- 张守梅黄婷婷王栋刘芳许家军
- 关键词：PIM-1视网膜免疫印迹法
