朱元正
- 作品数：13 被引量：69H指数：4
- 供职机构：南昌大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金江西省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带肝细胞生长因子基因慢病毒转染人脂肪来源干细胞复合纤维蛋白胶支架构建可注射型组织工程脂肪的实验研究被引量：4
- 2017年
- 目的探讨构建可注射型组织工程脂肪的可行性,为临床软组织缺损修复及美容填充提供简便易行的方法。方法取脂肪抽吸术获取的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得人脂肪来源干细胞(human adipose-derived stem cells,h ADSCs),进行细胞形态观察、流式细胞术及成脂诱导鉴定。用携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的慢病毒HGF-GFP-LVs,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(分别为10、30、50、100)转染h ADSCs,计算转染效率以确定最适MOI。取SPF级6周龄单纯T细胞缺陷BALB/c雌性裸鼠10只,将经过最适MOI HGF-GFP-LVs转染并成脂诱导的h ADSCs与纤维蛋白胶混合注入裸鼠背部右侧皮下(转染组),单纯成脂诱导的h ADSCs与纤维蛋白胶混合注入背部左侧皮下(未转染组),单纯纤维蛋白胶注入颈后正中皮下(空白对照组),每点注射0.4 m L。移植后12周处死裸鼠,取出移植物,行大体观察、湿重测量、HE染色、GFP荧光标记检测及免疫荧光染色观察,评价种子细胞的体内成脂能力以及移植物血管新生情况。结果经鉴定所培养细胞为h ADSCs。MOI为10和30时HGFGFP-LVs转染率较低,MOI为50和100时转染率较高(均>80%),确定最适MOI为50。移植12周,转染组和未转染组均获得外观类似脂肪组织的新生物,湿重分别为(32.30±4.06)mg和(25.27±3.94)mg,差异有统计学意义(t=3.929,P=0.001);空白对照组未见新生物。转染组新生脂肪细胞数为(126.93±5.36)个/视野,显著高于未转染组的(71.36±4.52)个/视野(t=30.700,P=0.000)。荧光显微镜下可见部分单房脂肪细胞发出网状绿色荧光。免疫荧光染色示转染组血管密度为(16.37±2.76)个/视野,显著高于未转染组的(9.13±1.68)个/视野(t=8.678,P=0.000)。结论以h ADSCs为种子细胞,经慢病毒转染HGF基因并成脂诱导后与纤维蛋白胶支架复合可在体内成功构建成熟脂肪,能促进移
- 朱元正易阳艳阳水发张静吴舒王朝慧
- 关键词：组织工程脂肪纤维蛋白胶慢病毒
- 脂肪干细胞来源外泌体对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移及管样分化的影响被引量：27
- 2018年
- 目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管样分化的影响。方法取吸脂患者自愿捐赠的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得ADSCs,并行流式细胞检测及成脂诱导鉴定。收集第3代ADSCs上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测其膜表面标志性蛋白Alix和CD63,用纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析外泌体粒径分布范围。用PKH26荧光标记的ADSC-Exos与HUVECs共培养后,共聚焦显微镜观察ADSC-Exos能否进入HUVECs。将ADSC-Exos与HUVECs共培养1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测ADSC-Exos对HUVECs增殖影响;共培养12 h时ELISA法检测细胞上清液VEGF蛋白表达量。采用Transwell迁移实验检测ADSC-Exos对HUVECs迁移能力的影响。通过体外Matrigel基质胶实验,观察ADSCExos对HUVECs管状结构形成的影响;将HUVECs与Matrigel基质胶混合后联合ADSC-Exos注射在BALB/c雄性裸鼠皮下,2周后检测基质胶中新生血管情况,计算平均血管密度(mean blood vessel density,MVD)。上述实验均以等量PBS作为对照。结果经鉴定所培养细胞符合ADSCs的特征。ADSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,表达标志性蛋白Alix和CD63,粒径范围30~200 nm。共聚焦显微镜观察示ADSC-Exos可被HUVECs摄取。CCK-8法检测示,各时间点实验组细胞增殖均优于对照组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞数较对照组显著增多(t=9.534,P=0.000)。在体外Matrigel胶成管实验中,实验组管样结构数明显多于对照组(t=15.910,P=0.000);在体内实验中,实验组MVD亦显著高于对照组(t=16.710,P=0.000)。ELISA检测示,实验组细胞上清液VEGF蛋白表达量明显高于对照组(t=21.470,P=0.000)。结论 ADSC-Exos可促进HUVECs增殖、迁移及管样结构形成,提示ADSC-Exos可促进血管新生。
- 张静易阳艳阳水发朱元正胡玄
- 关键词：脂肪干细胞外泌体人脐静脉血管内皮细胞
- 3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景被引量：5
- 2017年
- 目的总结近年来3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景。方法广泛查阅国内外3-D成球培养MSCs的相关研究,重点关注3-D培养模式下MSCs细胞球的形成机制,3-D培养的MSCs细胞球与传统贴壁培养的MSCs在生物功能上存在的差异,以及造成这些差异的生物学机制,探讨MSCs细胞球的临床应用前景。结果与传统贴壁培养的MSCs相比,3-D培养的MSCs细胞球在抗凋亡、多向分化、旁分泌、抗炎等多项生物功能上明显增强,其机制与细胞骨架的改变、细胞接触的增加和低氧微环境的刺激有关,在动物实验中对于难愈性创面的修复、缺血组织的修复、组织重塑具有显著治疗效果,有广阔临床应用前景。结论 3-D培养的MSCs细胞球较传统贴壁培养的MSCs具有更强的生物功能和治疗效果,可成为临床上优化干细胞疗法、提高其治疗效果的一种手段。
- 朱元正易阳艳
- 关键词：MSCS干细胞疗法
- 循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响被引量：3
- 2020年
- 目的探讨循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响。方法取6~8周龄雌性裸鼠18只(体质量20~25 g),随机分为3组(n=6)。去势组采用卵巢切除术制备去势裸鼠模型,高雌激素组及正常雌激素组仅作相同切口进入腹膜后,不切除卵巢组织。术后高雌激素组每3天灌胃雌二醇(0.2 mg/g)1次,共持续30 d;其他两组同时间点等量PBS灌胃。术后30 d取3组裸鼠尾静脉血经ELISA检测雌二醇浓度后,将接受抽脂术的健康女性捐赠的颗粒脂肪注入裸鼠头皮下(0.3 mL/只)。脂肪移植后8周取材大体观察、称重后,制备切片行HE染色、CD31-围脂滴蛋白荧光染色、解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)免疫组织化学染色和雌激素受体α免疫荧光染色,测量脂肪细胞直径及脂肪组织血管密度;实时荧光定量PCR检测UCP1和雌激素受体αmRNA表达。结果实验期间裸鼠无死亡。ELISA检测显示与正常雌激素组相比,去势组雌二醇浓度明显降低,高雌激素组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。脂肪移植8周后,移植物体积从大到小依次为去势组、正常雌激素组、高雌激素组,其中去势组移植物湿重显著高于高雌激素组(P<0.05)。组织学染色显示,与正常雌激素组相比,去势组脂肪细胞增大且围脂滴蛋白表达较弱、血管密度减小,几乎不表达脂肪标记物UCP1,雌激素受体α阳性细胞减少;而高雌激素组上述观察结果与去势组相反;脂肪细胞直径、血管密度及雌激素受体α阳性细胞组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示,与正常雌激素组相比,高雌激素组移植物UCP1和雌激素受体αmRNA相对表达量升高,而去势组均降低;组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论体内循环雌激素水平对脂肪移植的转归有显著影响。低雌激素水平导致移植物脂肪细胞肥大,高雌激素水平导致脂肪移植物中生成大量米色脂肪并伴随
- 吴舒朱元正张静胡玄易阳艳
- 关键词：雌激素脂肪移植雌激素受体Α裸鼠
- 人脂肪源细胞外囊泡联合脱细胞脂肪组织支架构建组织工程脂肪
- 2020年
- 目的探讨人脂肪源细胞外囊泡(human adipose tissue derived extracellular vesicle,hAT-EV)联合脱细胞脂肪组织支架(decellularized adipose tissues,DAT)构建组织工程脂肪的可能性,为临床上软组织缺损修复提供新方案。方法将吸脂手术患者自愿捐赠的脂肪组织分为2份,1份脂肪组织进行脱细胞处理,并采用组织学(HE、Masson染色)、扫描电镜观察,Ⅰ、Ⅳ型胶原及层粘连蛋白免疫组织化学染色和Western blot检测进行表征。另1份脂肪组织使用去外泌体的完全培养基孵化48 h,离心收集培养基上清并使用超高速离心法获取hATEV。使用透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析hAT-EV粒径分布范围,Western blot检测分析hAT-EV膜表面蛋白。将PKH26荧光标记的hAT-EV与脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)共培养后,共聚焦荧光显微镜观察hAT-EV能否进入ADSCs;将hAT-EV与ADSCs共培养15 d,油红O染色评估其成脂效果。将DAT组织剪碎并注射至8只6周龄雌性C57小鼠背部两侧,左侧每周注射0.2 mL hAT-EV作为实验组,右侧每周注射0.2 mL PBS作为对照组。12周后处死小鼠,取两侧DAT新生物进行湿重称量,并通过HE染色和围脂滴蛋白免疫荧光染色评估hAT-EV在体内诱导脂肪新生的能力。结果脂肪组织经脱细胞后,HE、Masson染色示DAT主要由排列松散的胶原构成,未见细胞核;扫描电镜示DAT中未发现细胞和细胞碎片,同时可见到粗大的胶原纤维束;免疫组织化学染色及Western blot检测示,DAT中保留了Ⅰ、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白。经鉴定,hAT-EV呈双层包膜的球形,高表达CD63、凋亡诱导因子6相互作用蛋白抗体、肿瘤易感基因101,97.9%粒径分布范围为32.67~220.20 nm,峰值为91.28 nm。共聚焦荧光显微镜和油红O染色示,hAT-EV被ADSCs摄取并诱导其成脂分化。大鼠体内实验显示,实验组新生脂肪组织湿重显著高于对照组(t=2.278,P=0.048);HE染色示,实验组脂滴�
- 聂佳莹易阳艳朱元正
- 关键词：软组织修复
- 脱细胞脂肪组织制备：能否成为异体注射或原位成脂的软组织填充物
- 2020年
- 背景:通过脱细胞脂肪组织构建无种子细胞的组织工程脂肪为当前软组织填充的研究热点。目的:探讨近年来脱细胞脂肪组织的制备方法对其移植后诱导脂肪再生效果的影响,并展望其临床应用前景。方法:检索1971年1月至2018年12月PubMed数据、Elsevier数据库相关文献,英文检索词为“adipose tissue engineering;adipose tissue extracellular matrix;soft tissue repair;angiogenesis;adipogenic induction”。阅读近年国内外与脱细胞脂肪组织制备和移植相关的文献,从脱细胞脂肪组织制备方法的改良,交联细胞因子和生物材料等方面进行总结归纳。结果与结论:当前研究表明,脂肪组织细胞外基质可作为软组织填充的理想支架材料,植入皮下可募集宿主干细胞并诱导期增殖和成脂分化。但现有的脱细胞方案会导致细胞外基质蛋白和结构的损失,这极大的影响了脱细胞脂肪组织植入体内的脂肪再生能力,但通过超临界二氧化碳设备脱油、机械力预处理、交联细胞因子或生物材料等手段可以减少脱细胞脂肪组织制备过程中细胞外基质蛋白的损失和或补充具有促进组织再生功能的蛋白,最终提高脱细胞脂肪组织移植后的血管和脂肪新生能力。脱细胞脂肪组织由于其天然的成脂诱导能力,在脂肪组织工程中具有强大的应用前景,若能克服其制备流程中细胞外基质蛋白损耗或在安全可控的前提下,有望成为可异体注射并原位成脂的理想软组织填充物。
- 聂佳莹易阳艳朱元正
- 关键词：脂肪组织工程软组织修复
- 脂肪来源干细胞胞外囊泡调控转化生长因子β-Smad信号通路抑制瘢痕增生的分子机制研究被引量：3
- 2020年
- 目的探讨脂肪干细胞-细胞外囊泡(ASC-EVs)对肌成纤维细胞转分化过程中转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的调控作用。方法脂肪干细胞来源于南昌大学第二附属医院整形美容科行吸脂术患者的抽吸脂肪。真皮成纤维细胞来源于同一科室包皮环切术患者自愿捐赠的皮肤组织。将脂肪抽吸物离心纯化后经酶消化提取脂肪来源于细胞(ASCs),扩增后行流式细胞术检测表面蛋白标记物。收集第3~5代ASCs上清液提取胞外囊泡(EVs),透射电镜观察微观形态,纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight检测粒径分布,流式细胞术检测其膜表面标志性蛋白CD63、Alix和TSG101。用PKH67荧光标记的ASC-EVs与真皮成纤维细胞共培养后,共聚焦显微镜观察细胞对EVs的摄取情况。通过TGF-β1持续诱导真皮成纤维细胞5 d,并添加50、100μg/ml浓度的ASC-EVs,通过免疫荧光染色,RT-PCR和蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Smad-2/3/4的表达。结果流式细胞术结果提示,第3代ASCs表面标记物CD73、CD49d、CD90、CD105为阳性,CD34、CD45为阴性。透射电镜下ASC-EVs为圆形膜性囊泡,边缘清晰,由双层磷脂膜包裹。95%以上的ASC-EVs粒径为(30.0~261.0)nm,平均(166.0±86.1)nm。EVs高表达标志蛋白CD63、Alix和TSG101。共聚焦显微镜下可见携带绿色荧光的ASC-EVs被真皮成纤维细胞摄取并分布在胞浆内,部分ASC-EVs在细胞核周围分布。α-SMA免疫荧光染色后,经连续5 d的TGF-β1诱导,共聚焦显微镜下见真皮成纤维细胞中α-SMA绿色荧光的表达显著提高,而采用50μg/ml和100μg/ml ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞中,α-SMA的表达较未经ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞显著降低,但不呈现浓度依赖;细胞α-SMA和Smad-2/3/4的mRNA转录水平较未经ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞显著下降,α-SMA和Smad-2/3/4的蛋白表达也显著降低。此外,ASC-EVs可显著降低细胞分泌至上清液中的Ⅰ型胶原的含量,
- 朱元正易阳艳王江文聂佳莹王朝慧吴舒杨娟敏
- 关键词：瘢痕转化生长因子Β肌成纤维细胞
- 脂肪干细胞来源外泌体促进糖尿病小鼠创面愈合的实验研究被引量：16
- 2020年
- 目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法取患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ADSCs,并于第3代细胞上清液提取Exos(ADSC-Exos);透射电镜观察ADSC-Exos形态,Western blot检测膜表面标志性蛋白Alix、CD63,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布。取患者自愿捐赠皮肤组织,采用酶消化法分离培养成纤维细胞。将PKH26标记的ADSC-Exos与第5代成纤维细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察其能否进入细胞,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)及划痕法观察ADSC-Exos对成纤维细胞增殖及迁移的影响。取24只8周龄Balb/c雄性小鼠制备糖尿病模型后,背部制备直径8 mm全层皮肤缺损创面,实验组(n=12)及对照组(n=12)创面真皮层分别注射0.2 mL ADSC-Exos及PBS。第1、4、7、11、16、21天大体观察创面愈合情况,计算创面愈合率;第7、14、21天取材,行组织学(HE及Masson)及CD31免疫组织化学染色,观察创面结构、胶原纤维及新生血管情况。结果ADSC-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡;粒径为40~200 nm,平均102.1 nm;膜表面标志性蛋白Alix、CD63均呈阳性。ADSC-Exos与成纤维细胞复合培养观察示,ADSC-Exos可进入成纤维细胞胞内,并能促进成纤维细胞增殖及迁移。动物实验显示,实验组小鼠背部创面愈合明显快于对照组,各时间点创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组创面结构愈合更好,愈合前期新生微血管更多,愈合后期胶原纤维沉积更多;其中,第7、14、21天创面缺损长度,第7、14天微血管数量,第14、21天胶原纤维沉积百分比,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ADSC-Exos通过促进创面血管新生以及成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成来促进糖尿病小鼠创面愈合。
- 王江文易阳艳朱元正王朝慧吴舒张静胡玄聂佳莹
- 关键词：脂肪干细胞外泌体血管新生创面愈合小鼠
- 脂肪干细胞来源外泌体促进大鼠皮瓣移植后血管新生的研究被引量：12
- 2019年
- 目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell derived exosomes,ADSC-Exos)对大鼠皮瓣移植后血管新生的影响。方法取抽脂术患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ADSCs;取第3代细胞光镜观察形态,流式细胞术鉴定细胞表面标志物,成脂诱导培养14 d后油红O染色观察。细胞鉴定为ADSCs后,采用密度梯度离心法提取ADSC-Exos;透射电镜观察形态,Western blot检测膜表面标志蛋白(CD63、TSG101),纳米颗粒跟踪分析仪测量其粒径分布。取20只雄性SD大鼠,体质量250~300 g,随机分为ADSCExos组和PBS组,每组10只。两组大鼠背部沿长轴方向制作面积为9 cm×3 cm随意皮瓣后,分别于近端、中间和远端区域注射ADSC-Exos(ADSC-Exos组)或PBS(PBS组)。术后大体观察皮瓣成活情况,第7天测算皮瓣成活率后切取皮瓣组织,HE染色观察组织形态,CD31免疫组织化学染色测定皮瓣微血管密度(mean blood vessel density,MVD)。结果光镜、流式细胞术及成脂诱导培养鉴定培养细胞为ADSCs。ADSC-Exos为边缘清晰、大小形态均匀的圆形或椭圆形膜性囊泡,高表达标志蛋白CD63和TSG101,粒径分布在30~200 nm,符合外泌体粒径范围。术后两组皮瓣远端均出现不同程度坏死表现,但ADSC-Exos组程度较PBS组轻;第7天ADSC-Exos组皮瓣成活率为64.2%±11.5%,显著大于PBS组的31.0%±6.6%(t=7.945,P=0.000);中间区域皮肤附属器官更完整,近端区域组织水肿程度轻、血管扩张更多。ADSC-Exos组MVD为(103.3±27.0)个/视野,显著多于PBS组(45.3±16.2)个/视野(t=3.190,P=0.011)。结论 ADSC-Exos可通过促进皮瓣移植后新生血管的形成,改善皮瓣血供,进而提高大鼠皮瓣成活率。
- 胡玄易阳艳朱元正王朝慧吴舒张静王江文聂佳莹
- 关键词：脂肪干细胞外泌体皮瓣移植血管新生
- 重睑成形术的设计要点
- 重睑成形术可有效的增进眼睛的美感,但只有在尊重求美者喜好的同时结合其自身的眼部特征设计出具有针对性的重睑线,才能使重睑成形术取得良好的美容效果。作者根据多年临床经验中大量重睑成形术病例,总结出重睑成形术的术前设计要点。1...
- 易阳艳朱元正
- 关键词：重睑成形术术前设计重睑线
- 文献传递
