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儿童原发性肾病综合征尿源干细胞生物学特征研究被引量：5: 2018年; 目的:探讨正常儿童尿源干细胞(urine-derived stem cell,USCs)与原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿尿源干细胞(p-USCs)生物学特征差异。方法:收集正常儿童及PNS患儿清洁中段尿液,分离培养USCs及p-USCs,观察细胞形态差异;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及干细胞表面标志物(CD24、CD29、CD34、CD73、CD90、CD105、CD146);免疫荧光及Western blot检测细胞肾系标志物(Pax2)表达;Western blot检测细胞自噬水平。结果:PNS患儿尿液中存在2种形态p-USCs:p-USCsⅠ及p-USCsⅡ。p-USCsⅠ形态与正常USCs相似:米粒样、胞体较小、排列紧密。p-USCsⅡ胞体可见少量空泡,胞体较大,散在排列。USCs、p-USCsⅠ及p-USCsⅡ最大传代次数分别为11代、8代及5代。与USCs比较,p-USCs增殖能力减弱,且p-USCsⅡ减弱更加明显(F=217.300,P=0.000);p-USCs细胞凋亡无明显差异;p-USCs干细胞表面标志物及周细胞表面标志物表达无统计学差异;p-USCs肾系标志物表达水平下降,且p-USCsⅡ下降更明显(F=26.930,P=0.001);p-USCs自噬水平下降,差异有统计学意义(F=15.060,P=0.000)。结论:PNS患儿体内存在2种不同形态尿源干细胞:pUSCsⅠ及p-USCsⅡ。与USCs相比,p-USCs形态有差异、自我更新能力降低、肾系标志物表达下降、自噬水平减弱。; 李昊石冬梅张元原龚梦佳阳海平陶立王墨李秋; 关键词：自噬

儿童腘窝囊肿液中滑膜干细胞的分离及特性鉴定: 2018年; 为了从儿童腘窝囊肿液中分离滑膜间充质干细胞（synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs）,进行体外培养,鉴定其干细胞特性。本实验采用抽取囊肿液、细胞贴壁培养法从腘窝囊肿患儿的囊肿液中分离出滑膜干细胞,进行体外培养、细胞形态学观察、细胞生长曲线绘制及周期的分析,成骨、成脂、成软骨分化能力检测,流式细胞术检测细胞表面标志物,免疫荧光检测干细胞标志物。实验结果显示可采取本方法稳定地从儿童腘窝囊肿液中获取滑膜间充质干细胞,外观梭型状,体外成指数生长,高表达滑膜间充质干细胞表面标记物（CD73,CD90,CD105）,表达胚胎间质细胞标记物波形蛋白（vimentin）和成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,经定向诱导培养基培养,可分化为骨,软骨和脂肪细胞,我们可以确定所分离出的细胞即为滑膜间充质干细胞（SMSCs）。本研究证明可从儿童腘窝囊肿液中获取滑膜间充质干细胞,是间充质干细胞有价值的来源。; 李方张元原董超群郑超翁刘其龚梦嘉毕杨李明; 关键词：滑膜间充质干细胞

糖尿病肾病患者尿源性干细胞的分离鉴定及与健康人尿源性干细胞的细胞生物学比较研究被引量：4: 2018年; 干细胞移植是糖尿病肾病新的治疗途径,但异种干细胞存在伦理及免疫排斥等问题。该研究从糖尿病肾病患者尿液中提取出一种类似干细胞的细胞,称之为糖尿病病人尿源性干细胞(USCs from patients with diabetic nephropathy,D-USCs),并比较了与健康人尿源性干细胞(urine derived stem cells,USCs)生物学特性的差异。通过观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物,茜素红及油红O染色分别检测成骨和成脂分化潜能,以鉴定其干细胞特性。通过绘制生长曲线比较D-USCs与USCs增殖能力,人促血管生成因子检测试剂盒检测细胞外分泌因子的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率的差异。结果表明,此类细胞可以在体外分离培养,连续传代生长,细胞形态保持米粒状,表达间充质干细胞标志物(包括CD 24、CD 29、CD 73、CD 90、CD 105)、周细胞标志物(CD 146),不表达造血干细胞标志物(包括CD 31、CD 34、CD 45),具有成骨和成脂分化的潜能。与USCs相比,D-USCs的增殖能力受到损伤,分泌因子种类基本保持一致,但数量上有所减少,细胞凋亡率升高。综上所述,该研究成功从糖尿病肾病病人尿液中提取出尿源性干细胞,为干细胞移植治疗肾损害提供了可能的新的细胞来源,避免了异体免疫排斥反应。; 陶立马文军龚梦嘉毕杨魏光辉张元原; 关键词：糖尿病肾病外分泌

持续低氧预处理促进兔尿源性干细胞增殖和减少凋亡被引量：2: 2017年; 目的探讨持续低氧(3%O_2)环境对兔尿源性干细胞(r USCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响。方法 r USCs分别置于3%O2和20%O_2条件下培养,连续观察其形态学变化,绘制细胞增殖曲线;检测其分泌、周期及凋亡变化。结果 r USCs原代培养约第6天便可见单个"米粒样"细胞,不同氧浓度培养后发现常氧组细胞为"长梭形",低氧组向"鹅卵石"样改变;两组细胞增殖曲线均呈"S"形,但低氧组增殖速度较快(P<0.01);低氧组较常氧组相比,血管营养因子表达量均有上调且表达因子种类增加;常氧组G0/G1期细胞数为91.73%±1.35%,明显高于低氧组的71.82%±8.86%(P<0.05);常氧组S期细胞数为3.48%±0.73%,显著低于低氧组的18.77%±3.87%(P<0.01);流式常氧组凋亡率为3.24%±0.38%,明显高于低氧组的0.43%±0.05%(P<0.001);Hoechst结果常氧组凋亡率为4.27%±0.48%,明显高于低氧组的1.37%±0.33%(P<0.01)。结论持续性低氧(3%O2)环境可促进r USCs细胞的增殖,减少细胞凋亡,增加其分泌功能。; 马文军储加强陶立龚梦嘉毕杨魏光辉张元原; 关键词：低氧增殖凋亡

小肠黏膜下基质复合尿源干细胞用于尿道重建的实验研究: <正>目的:探索应用小肠黏膜下基质(Small intestinal submucosa,SIS)复合自体尿源干细胞细胞(urine-derived stem cells,USC)构建组织工程化尿道的可行性。方法:分离培...; 张德迎刘洋马文军刘博储加强张元原林涛何大维魏光辉; 文献传递

3-D多孔结构的小肠黏膜下组织在兔膀胱再生中的应用被引量：1: 2016年; 目的探讨3-D多孔结构的小肠黏膜下组织(small intestine submucosa,SIS)在新西兰大白兔膀胱再生中的应用。方法用物理及化学方法制备具有3-D多孔结构的SIS。将24只雄性新西兰大白兔随机分为3组(n=8),分别行膀胱半切术建立膀胱缺损模型,使用3种不同处理的SIS进行膀胱重建。A组:未经过氧乙酸(peroxyacetic acid,PAA)处理的SIS组;B组:PAA处理的SIS组;C组:PAA处理后100%胎牛血清浸润的SIS组。3组在术前及术后4周测定膀胱容量,并于术后4周取材,行大体观察及组织学检测,评估膀胱再生情况。结果应用SIS行兔膀胱重建术后4周,3组再生膀胱组织与周围组织粘连依次降低,结石率分别为33.3%、28.6%、14.31%。与术前自身比较,术后4周3组膀胱最大容量均缩小且依次增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后组织学检测示3组膀胱上皮细胞均有再生,与A组比较,B、C组的上皮再生更好,边缘区和中心区无明显差异。3组膀胱平滑肌的再生均不理想,但边缘区平滑肌再生较中心区多;在边缘区和中心区,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3组在边缘区和中心区的再生血管面积依次增加,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经PPA及胎牛血清处理后3-D多孔结构的SIS,具有良好的促进膀胱组织再生能力,是一种比较理想的修复支架材料。; 储加强马文军张德迎龙春兰龚梦嘉赵丽魏光辉张元原; 关键词：血管化

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张元原

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