张齐
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高校重点实验室项目辽宁省研究生教育创新计划资助项目海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 仿刺参溶菌酶在重组酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2017年
- 采用酿酒酵母MKP-0表达仿刺参溶菌酶蛋白(AjLys)。以质粒pMD18-AjLys为模板,PCR扩增将组氨酸标签His-tag克隆到AjLys基因的N末端,构建克隆载体pMD18-His6-AjLys。根据密码子偏好性,通过定点突变对AjLys蛋白第69、77和95位的3个精氨酸的密码子进行优化,得到克隆载体pMD18-His6-AjLys(Δ69,77,95)。经SpeⅠ/BglⅡ酶切,构建重组表达质粒pESC-LEU-His6-AjLys和pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)。基因工程菌pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)/MKP-0通过半乳糖诱导72h后,Western Blot检测结果表明其成功表达了AjLys蛋白。抑菌实验结果表明,AjLys蛋白对溶壁微球菌具有一定的抑制作用。本实验成功构建了AjLys的酿酒酵母表达载体,并可在MKP-0细胞中表达了具有活性的AjLys蛋白,为AjLys的生产提供了一种具有可行性的新方法。
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- 关键词：仿刺参溶菌酶酿酒酵母密码子优化
- 产直链脂肽类抗菌物质枯草芽孢杆菌HS-A38的生物学特性被引量：7
- 2016年
- 以从海参肠道中筛选的枯草芽孢杆菌HS-A38为目的菌株,分析了其生长特性、产酶特性、抑菌活性及其产生抗菌活性物质的能力。结果表明,培养时间为36~38h时芽孢出芽率最高,该菌株具有较强的抑菌作用,并具有产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和果胶酶的能力。从该菌株的发酵后上清液中提取得到2种具有抗菌活性的化合物,初步推断这2种物质为直链脂肽类抗菌物质。
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- 关键词：枯草芽孢杆菌抗菌活性
- 海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。
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- 关键词：仿刺参铜锌超氧化物歧化酶反转录PCR抗氧化活性
- 非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定被引量：3
- 2018年
- 利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。
- 张齐牛庆昌姜琳黄君马俊丛丽娜李成
- 关键词：重组蛋白抑菌活性
