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聂鑫: 作品数：12 被引量：29H指数：3; 供职机构：海南大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家肉羊产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>

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多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其系统进化分析被引量：10: 2018年; 海南某养殖场的黑山羊出现体温升高、咳嗽、呼吸困难、偶尔伴有腹泻症状。为了诊断,采集病死羊肺脏组织,进行细菌的分离培养。对分离得到的细菌进行形态学观察、生化反应鉴定、细菌16S rRNA测序、特异性引物PCR鉴定、小鼠攻毒试验以及系统进化分析。结果确定该患病黑山羊感染了D型多杀性巴氏杆菌,并确定该菌对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素、阿莫西林敏感。系统进化分析发现,该株多杀性巴氏杆菌与河北、湖北、重庆等地分离菌株的亲缘关系较近。本试验为海南黑山羊流行性疾病诊断提供了重要的资料。; 曹瑞勇张振兴聂鑫李宝宝黄海峰杨小健朱姝杜丽王凤阳; 关键词：海南黑山羊多杀性巴氏杆菌细菌分离鉴定系统进化分析

羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达: 2017年; 为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。; 杨小健李亚颖庞峰李国华彭冬梅朱姝聂鑫曹瑞勇王凤阳杜丽; 关键词：羊传染性脓疱病毒克隆原核表达

羊种布鲁氏菌dhbC基因的克隆、原核表达及生物信息学分析被引量：5: 2017年; 试验旨在对羊种布鲁氏菌dhbC基因进行克隆及原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中布鲁氏菌M5-90株dhbC基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得dhbC基因片段。将得到的dhbC基因连接到pMD20-T载体,构建pMD20-T-dhbC重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pET28a-dhbC重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。运用生物信息学软件DNAMAN及相关在线网站ProtParam、SOPMA及Protscale对dhbC基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 093bp的dhbC基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为47ku,且主要以包涵体形式存在。dhbC蛋白的分子式为C1866H2968N544O562S15,分子质量为42 496.3u,理论等电点(pI)为5.81,消光系数为33 835,不稳定系数为36.76,疏水指数为86.19,总平均疏水性(GRAVY)为-0.215。预测在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h,其二级结构以α-螺旋(41.94%)和无规则卷曲(31.46%)为主。; 李宝宝聂鑫杨小健曹瑞勇朱姝黄海峰张振兴彭冬梅李国华李亚颖王凤阳杜丽; 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达生物信息学分析

羊种布鲁氏菌LpxB基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析被引量：10: 2016年; 试验旨在克隆羊种布鲁氏菌LpxB基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。以布鲁氏菌M5-90株基因组为模板,参照GenBank中M5-90株基因组DNA序列,用DNAMAN软件设计1对引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增得到大小为1 188bp的LpxB基因,将其连接入pMD20-T载体上,构建pMD20-T-LpxB重组质粒,将其转化到E.coli DH5α感受态细胞中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定正确后扩大培养。将BamHⅠ和XhoⅠ双酶切获得的LpxB片段连接入pET-28a,构建重组质粒pET-28a-LpxB,转化到E.coli BL21(DE3)中,双酶切鉴定正确后扩大培养。经IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting对蛋白进行鉴定。运用DNAMAN、BioEdit等软件对LpxB基因编码的氨基酸序列进行分析。结果表明,本研究成功克隆了LpxB基因并进行了蛋白表达,在LpxB蛋白二级结构中,α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占52.41%、14.94%、8.10%和24.55%。; 聂鑫赵天靖曹瑞勇彭冬梅李国华李亚颖徐开莲朱华培庞峰王凤阳杜丽; 关键词：羊种布鲁氏菌克隆原核表达生物信息学分析

羊源雷氏普罗威斯登菌的分离鉴定被引量：2: 2018年; 为了分离鉴定海南某养殖场黑山羊流鼻液、打喷嚏这一临床症状可能的致病菌,试验通过对病羊鼻拭子的无菌采集、病原菌分离培养后,利用革兰氏染色、细菌生化反应、细菌16S r RNA通用引物进行PCR反应等方法对分离得到的菌株进行鉴定。结果表明:对病羊鼻拭子培养后,得到的菌落形态一致;通过染色发现该菌为短杆状革兰氏阴性菌,进一步鉴定该菌为雷氏普罗威登斯菌。可引起海南黑山羊呼吸道疾病,为相应疾病的诊断和治疗奠基了一定的基础。; 曹瑞勇聂鑫李国华杜丽王凤阳; 关键词：海南黑山羊细菌分离鉴定生化反应

检测基因Ⅳ型戊型肝炎病毒抗体的间接ELISA方法: 本发明公开了一种检测基因Ⅳ型戊型肝炎病毒抗体的间接ELISA方法，步骤包括：1)构建重组表达质粒pET42a‑ORF3，将pMD18T‑ORF3质粒和pET42a(+)原核表达载体转化DH5a感受态细胞，涂布于LB固体培...; 王凤阳杜丽赵天靖聂鑫; 文献传递

布鲁氏菌fliC影响巨噬细胞基因表达谱的初步研究: 布鲁氏菌病是在世界广泛流行的传染性人畜共患病。布鲁氏菌是其致病菌,革兰氏染色为阴性,属于胞内菌。鞭毛蛋白FliC是布鲁氏菌鞭毛丝的主要组成部分,参与细菌对宿主的致病过程,是重要的病原相关分子模式之一（PAMPs）。有研究...; 聂鑫; 关键词：布鲁氏菌 RAW264.7; 文献传递

羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究被引量：2: 2016年; 试验旨在扩增羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)ORF059基因并进行真核表达。提取羊ORFV HCE弱毒株基因组为模板,参照GenBank上ORF059的基因序列,利用DNAMAN设计引物,应用PCR扩增ORF059目的片段,凝胶回收后将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-ORF059-N1,测序正确后瞬时转染NIH3T3细胞,应用荧光显微镜观察,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果表明,ORF059基因片段大小为1 005bp;重组质粒pEGFP-ORF059-N1构建正确;转染pEGFP-ORF059-N1的NIH3T3细胞有明显的绿色荧光;表达的融合蛋白大小约为64ku。本试验结果为进一步研究ORF059的作用机理奠定了基础。; 朱姝庞峰李国华李亚颖彭冬梅杨小健聂鑫曹瑞勇王凤阳杜丽; 关键词：羊口疮病毒真核表达 NIH3T3细胞

口疮病毒ORF020基因的原核表达与纯化被引量：3: 2016年; 根据Gen Bank中口疮病毒ORF020基因序列,利用DNAMAN软件设计引物,以口疮病毒基因组为模板,采用PCR扩增出552bp的目的基因片段。凝胶回收纯化目的片段,将其连接入p MD20-T载体,转化E.coli DH5α并测序。测序正确后再其再连接入p ET-28a(+)表达载体,构建重组质粒p ET28a(+)-ORF020,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE和Western-blot鉴定诱导表达的目的蛋白,镍亲和层析纯化目的蛋白。结果表明,成功构建了原核表达载体p ET28a(+)-ORF020,并在E.coli BL21中表达了ORF020基因,诱导得到的融合蛋白与目的蛋白大小一致,证明目的基因被成功表达并得到纯化蛋白。上述研究结果为开展ORF020的功能研究奠定了一定基础。; 李亚颖崔克庞峰李国华彭冬梅赵天靖朱华培徐开莲朱姝杨小健聂鑫曹瑞勇王凤阳杜丽; 关键词：绵羊山羊原核表达蛋白纯化

一种电子计算机用具有防潮结构的安装壳: 本实用新型公开了一种电子计算机用具有防潮结构的安装壳，涉及电子计算机技术领域。该电子计算机用具有防潮结构的安装壳，包括安装箱、升降机构和固定机构，所述安装箱的两侧外壁均固定安装有固定箱，安装箱的底部为开口设置，两组固定箱...; 杨洁黄雨薇薛鹏方吕雨蝶赫英芷聂鑫任鑫如吕婉晴张甜甜蔡慧莹

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