潘晖榕
- 作品数：45 被引量：70H指数：5
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划福建省科技重大专项教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究被引量：8
- 2005年
- 目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉
- 关键词：弓形虫DNA免疫小鼠
- 弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位 ,并探讨其免疫保护效果。 方法 用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体 12肽库进行三轮筛选 ,对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot -ELISA检测其特异性 ,并对其中的某些克隆进行Western -blot分析和序列测定 ;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠 ,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度 ,攻击感染后观察小鼠存活情况。 结果 经三轮筛选 ,特异性噬菌体得到富集 ,随机挑取 18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定 ,有 16个克隆能与弓形虫免疫兔血清lgG呈特异性反应。Western -blot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别 ,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性 ,其序列为 5’ -CTTCAGTTGGATCGGGCTCCGTTTTGGAATCAGGGT -3’ ,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性 ;与原肽库对照组相比 ,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体 ,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组。 结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位 ,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善温见翔张仁利高世同黄达娜雷明军潘晖榕秦莉
- 关键词：弓形虫小鼠表位噬菌体抗原感染后间接ELISA
- 弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定
- 目的:克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法:PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收...
- 雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利
- 文献传递
- SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫被引量：2
- 2005年
- 目的构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善高世同秦莉雷明军潘晖榕张仁利黄达娜温见翔
- 关键词：SARSN基因真核表达质粒体液免疫
- 弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定
- 目的克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化...
- 雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利
- 关键词：弓形虫克隆基因表达纯化免疫印迹
- 文献传递
- SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化被引量：3
- 2005年
- 目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒pET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。
- 雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍
- 关键词：SARSM蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化被引量：5
- 2004年
- 目的 构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。 方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a(+ ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。 结果 从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。 结论 利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜
- 关键词：ESAT-6结核分枝杆菌原核表达系统重组表达质粒阳性克隆IPTG
- 弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析
- 目的:构建原核重组表达质粒pET23a-SAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性。方法:PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD18-T载体,转化大肠埃希菌DH5α...
- 雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利
- 文献传递
- 深圳市中国人群DNA档案库的构建-深圳市常见遗传相关性疾病基因多态性研究
- 吴少庭刘茂玲张仁利李良成余金萍周爱琴潘晖榕黄福松谢显清卢祖洵石淑华高世同黄达娜戴五星耿艺介张国晖周晓亮
- 该课题针对糖尿病、高血压、苯丙酮尿症、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症和β-地中海贫血症这五种疾病，以人群为研究对象，运用病例-对照研究方法，结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）、单核苷酸多态性（PCR...
- 关键词：
- 关键词：遗传性疾病基因多态性
- 弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因的克隆与表达被引量：4
- 2004年
- 目的 克隆和表达弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因。方法 根据GRA4基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,插入pMD18-T载体,并转化大肠杆菌JM109,经PCR、双酶切、测序验证后,将GRA4基因片段定向亚克隆到载体pGEX-4T-2中构建原核表达重组质粒pGEX-4T-2.GRA4,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Westem blot分析。结果 从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段并诱导表达出能被兔抗弓形虫血清识别的重组GRA4蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pGEX-4T-2-GRA4重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪张仁利高世同黄达娜袁仕善雷明军潘晖榕
- 关键词：弓形虫PCR基因克隆原核表达
