刘银坤
- 作品数:54 被引量:617H指数:14
- 供职机构:上海医科大学附属中山医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金美国中华医学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 肝癌细胞中端粒酶活性的检测
- 1999年
- 目的 本实验为检测肝癌组织中是否有端粒酶活性,端粒酶活性与肝癌临床检测指标AFP及高低转移潜能是否相关而设计。 方法 本实验用TRAP法从组织中抽提端粒酶,经反转录并PCR 扩增后用地高辛标记的探针作斑点印迹杂交( 肝癌标本部分) 和PAG电泳加银染法显色( 人肝癌高低转移裸鼠模型) 。 结果 本实验检测了11 例肝癌患者有肝癌组织和癌周组织的端粒酶活性,结果肝癌组织中端粒酶活性为93-88(单位:IOD值) ,癌周组织端粒酶活性为24-09,两者的差别有统计学意义(P< 0-001) 。正常组织(n = 5) 中未检测到端粒酶活性。端粒酶活性与AFP浓度的相关系数r=0 .72,与肿瘤大小的相关系数r= -0-298。人肝癌高转移模型裸鼠LCID20 的端粒酶活性为(77-67±6-93),低转移模型裸鼠LCID35 的为82-16 ±15-93),两者之间并无显著性差异( P> 0-05) 。 结论 肝癌组织的端粒酶活性明显地高于癌周组织,正常组织中未检测到端粒酶活性。端粒酶活性与AFP及肿瘤大小无关。
- 蒋云爱吴欣刘银坤
- 关键词:端粒端粒酶肝癌细胞
- 具有高转移潜能的人肝癌细胞系的建立及其生物学特性被引量:26
- 1998年
- 目的利用裸鼠人肝癌高转移模型(LCI-D20)的皮下移植瘤组织在体外建立一株具有高转移潜能的人肝癌细胞系(MHCC97),并对其一般生物学特性进行观察。方法将分离的瘤细胞制成细胞悬液,用10%人AB型血清的高糖DMEM培养液建成该细胞系,采用流式细胞术和染色体G-显带方法,进行细胞遗传学分析;用ABC免疫组化法,观察其肺转移灶中癌细胞甲胎蛋白(AFP)表达情况。结果MHCC97细胞为典型的上皮样细胞,符合一般上皮性恶性肿瘤细胞的病理学特征。该细胞经皮下和肝内接种均可使裸鼠致瘤,并发生肺部转移。肝内接种者,肺转移达100%(12/12)。MHCC97细胞为异倍体细胞,染色体均为超二倍体,i(1)(q)和der(4)(pter→q35::?)等为其标志染色体,未显示有完整Y染色体存在。肺转移灶的癌细胞AFP阳性。结论MHCC97细胞具有与原移植瘤相似的生物学特性。
- 田健汤钊猷叶胜龙刘银坤林芷英
- 关键词:肝肿瘤肿瘤细胞肿瘤转移甲胎蛋白
- 神经节苷脂GM3、GD3对小鼠巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响被引量:1
- 1998年
- 目的观察外源性神经节苷脂GM3、GD3对人肝癌SMMC┐7721细胞的杀伤活力的影响。方法应用3H┐TdR掺入法测定GM3、GD3对巨噬细胞的细胞毒作用的影响。结果GM3、GD3对巨噬细胞短时间(45分钟)作用后,两者都对细胞毒产生双相调节,但两者调节作用相反。GM3、GD3对巨噬细胞长时间(24小时)作用后,两者均抑制细胞毒作用,GD3的抑制作用更强。结论GM3、GD3作用于巨噬细胞后对其杀伤SMMC┐7721细胞的细胞毒作用产生不同程度的抑制。
- 吴欣刘银坤
- 关键词:神经节苷脂GM3GD3巨噬细胞细胞毒作用
- 肝癌中骨桥蛋白表达的临床意义被引量:15
- 1998年
- 目的探讨骨桥蛋白在肝癌转移中的作用以及H-ras基因和骨桥蛋白表达的相互关系。方法对2例正常肝脏组织、16例肝癌患者癌及癌周组织进行mRNA提取,采用RT-PCR半定量法研究了肝癌及癌周组织中骨桥蛋白以及H-ras的表达。结果2例正常肝脏组织中骨桥蛋白和H-ras均无表达,16例肝癌组织中骨桥蛋白及H-ras表达均高于相邻的癌周组织,经t检验,P均<005。在13例骨桥蛋白高表达的病例中,癌周浸润率为692%(9/13),癌转移率为308%(4/13)。肝癌及癌周组织中骨桥蛋白和H-ras表达值的直线相关系数分别为0605和0486,P均<005。结论肝癌组织中骨桥蛋白的表达可能和肝癌细胞的发生有关,骨桥蛋白高表达和肝癌癌周浸润以及转移密切相关,肝癌组织中骨桥蛋白的表达和H-ras的表达呈直线正相关。
- 贺斌刘银坤汤钊猷吴欣张予
- 关键词:肝癌骨桥蛋白肿瘤转移
- 细胞间粘附分子-1在着床前小鼠胚胎培养液中的表达被引量:8
- 1999年
- 为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在着床中的作用和调节,本研究采用昆明种小鼠,获取孕第一天的单细胞胚胎,分别在M16培养液和含0.1ng/ml浓度白血病抑制因子(LIF)的M16培养液中培养120小时,每24小时更换培养液,然后,用免疫印迹法测定胚胎培养液中的ICAM-1在蛋白水平的表达。结果:(1)5天的培养液中均有ICAM-1的表达。第一天培养液中的ICAM-1水平稍高,第二天最低,以后逐渐升高,到第五天达最高峰。(2)LIF可显著提高胚胎ICAM-1的表达水平。结果表明:小鼠孕早期胚胎可以表达ICAM-1,其表达水平在胚泡期最高。ICAM-1的表达可能与着床过程胚泡的粘附有关。细胞因子LIF可促进ICAM-1的表达。
- 张炜周剑萍张俊慧刘银坤
- 关键词:细胞间粘附分子胚胎着床
- 肝癌组织及血清中细胞间粘附分子-1表达的研究被引量:20
- 1998年
- 目的研究细胞间粘附分子-1(intercelularadhesionmolecule-1,ICAM-1)作为判断肝癌发展程度及转移状态指标的可能性。方法以免疫组化的方法检测ICAM-1在肝癌组织和正常肝组织中的表达,观察了ICAM-1表达在细胞的定位。以点免疫印迹法测定不同患者血清和不同肝组织中ICAM-1的表达。分析ICAM-1表达与肿瘤生长转移状态、肿瘤特性的关系。结果肝癌细胞ICAM-1表达阳性(阳性率为800%),主要分布在细胞膜,正常肝细胞则为阴性。肝癌患者血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平高于正常人(P<001)及肝良性肿瘤患者(P<005),肝癌伴转移者高于无转移者(P<005)。肝癌组织中ICAM-1含量明显高于癌旁组织(P<001)及正常肝组织(P<001),而与肿瘤大小及有无包膜无关(P>005);转移组肝癌中ICAM-1的表达明显高于非转移组(P<005),两组癌旁组织中ICAM-1表达无差别(P>005)。结论血清及组织中ICAM-1的水平在一定程度上可以反映肝癌发展程度及转移状态,有可能作为预测肝癌转移复发的指标。
- 孙婧景周信达冯久贤冯久贤刘银坤汤钊猷
- 关键词:肝癌肿瘤转移细胞间粘附分子
- 细胞间粘附分子1、肿瘤坏死因子α转录水平在缺血再灌注大鼠脑皮质中表达的相关性被引量:9
- 1999年
- 目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注期细胞间粘附分子1( I C A M1) 、肿瘤坏死因子α( T N Fα) 在转录水平的表达规律及相关性。方法 用插线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用逆转录聚合酶链式反应( R T P C R) 测定缺血再灌注期 I C A M1m R N A、 T N Fαm R N A 的表达变化。结果 缺血侧皮质 T N Fαm R N A 在缺血后1 小时开始显著升高,至缺血再灌注2 小时达到高峰,持续高表达1 周; I C A M1m R N A 在缺血后2 小时开始显著升高;至缺血再灌注10 小时达到高峰,持续高表达1周。二者具有密切的相关性。结论 I C A M1 、 T N Fα转录水平在脑缺血再灌注早期表达升高, T N Fαm R N A、 I C A M1 m R N A 的表达具有正相关性。
- 崔尧元余勇张晓彪刘银坤
- 关键词:ICAM-1
- 人肝癌裸鼠原位移植转移模型基因突变和表达被引量:3
- 1997年
- 近几年来我所已建立了人肝癌裸鼠原位移植转移模型,并获得了稳定的高转移肿瘤系 LCI-D20及低转移肿瘤系 LCI-D35。本工作比较研究了 LCI-D20和 LCI-D35二个肝癌系中 c-fos、c-jun,N-ras、H-ras,CD44,nm23-H1的基因表达以及 p53基因第七外显子249位点突变,以期深入探求 LCI-D20株高转移的原因。材料和方法一、LCI-D20,LCI-D35肝癌取材和 mRNA 提取分别取生长35天的 LCI-D20及 LCI-D35模型中新鲜肝癌组织各100mg,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取 mRNA,提取物分别溶于50μl DEPC 水中。二、RT-PCR 半定量分析取 mRNA 提取物10μl 70℃变性10分钟,以 oligo-dT 为引物,42℃逆转录1小时,反应后95℃变性10分钟。应用 PCR 扩增六种基因的 cDNA 产物。
- 贺斌刘银坤汤钊猷薛琼
- 关键词:肝癌P53基因基因突变RT-PCR
- 细胞分化诱导剂防治裸鼠肝癌转移复发的疗效被引量:18
- 1999年
- 目的研究CDA-Ⅱ对裸鼠早期(转移前)和晚期(转移后)肝癌切除术后转移复发的防治效果。方法裸鼠人肝癌高转移模型肿瘤接种后,于转移发生前后分别行肝癌切除术,术后皮下注射CDA-Ⅱ。肿瘤接种后35天处死动物,记录动物体重、切缘复发、肝内转移、和远处转移情况。结果早、晚期肝癌切除术后应用CDA-Ⅱ组动物体重较高,肝内转移和远处转移累及脏器数均少于对照组,局部复发灶也小于对照组。结论CDA-Ⅱ对裸鼠早期和晚期肝癌切除术后的转移复发有防治作用。
- 孙婧璟周信达刘银坤吴志全施建英高冬梅
- 关键词:肝癌肿瘤转移细胞分化复发
- 雌激素与三苯氧胺对子宫内膜癌细胞bcl-2 mRNA水平的调节被引量:2
- 1999年
- 目的 探讨雌激素与三苯氧胺对子宫内膜癌bcl2 癌基因的调节机理。方法 采用逆转录- 聚合酶链反应(RTPCR) 法,检测子宫内膜癌细胞雌激素受体(ER) 阳性RL952 细胞中bcl2mRNA表达水平,及其与雌激素和三苯氧胺作用后的变化。结果 ER阳性RL952 细胞有bcl2 mRNA表达。经10-12 、10-10 、10-8 、10-7 mol/L17β雌二醇(E2)与RL952 细胞作用72 小时后,bcl2 与βactinmRNA的比值分别为6.94 ±0.03、7 .15 ±0 .02、7.47 ±0.01、8.44 ±0 .01 ,呈逐渐升高趋势;经10-8 、10-7 、10- 6、10-5 mol/L三苯氧胺与RL952 细胞作用72 小时后,bcl2 与βactin mRNA 的比值分别为3 .62±0.03 、2 .87 ±0.01、2.23±0 .01、1 .98 ±0 .02,呈逐渐下降趋势。结论 雌激素可通过促进bcl2的表达,抑制细胞凋亡,在ER阳性的子宫内膜癌发病中起了一定作用;三苯氧胺则降低bcl2 的表达水平,促进细胞凋亡,可能产生治疗子宫内膜癌的效应。
- 赖东梅朱关珍周剑萍刘银坤丰有吉
- 关键词:子宫内膜癌BCL-2雌激素MRNA三苯氧胺