孙红立 作品数:7 被引量:16 H指数:1 供职机构: 中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所 更多>> 发文基金: 中国博士后科学基金 上海市博士后基金 上海市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
毕赤酵母分泌表达牛白细胞介素2的机制研究 白细胞介素2(IL2)是一种具有广泛生物活性的细胞因子,它能够有效地提高机体的免疫功能.目前已证实,牛白细胞介素2(Bovine IL2,BoIL2)在牛的多种疾病预防与治疗中具有很好的作用.因此,研究利用基因工程的方法... 孙红立关键词:毕赤酵母 信号肽 文献传递 白细胞介素-1受体拮抗蛋白和白细胞介素-10联合基因转染人骨关节炎软骨细胞的研究 被引量:14 2007年 目的探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL- 1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性。方法构建含目的基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10,经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内目的基因的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-IRa和ML-10蛋白表达量的水平。结果酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真核表达载体。稳定转染软骨细胞后,RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10 mRNA片段。ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的ML-1Ra和ML-10表达,单个基因转染组中分别为(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;联合基因转染组为(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L。未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL-1Ra和hIL-10表达,基因转染组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论逆转录病毒载体PLXRN介导的hIL-1Ra和hIL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达,为将表达hIL-1Ra和hIL-10目的基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据。 芮云峰 王友 张晓玲 孙红立 曲志虎 戴尅戎关键词:白细胞介素-1受体 白细胞介素-10 基因转染 骨关节炎 软骨细胞 毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达牛白细胞介素2 2004年 利用含有强启动子 PAOX1 和 α-因子信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体 p PICZαA,构建出含牛白细胞介素 2(Bo IL - 2 )基因的重组质粒 Bo IL 2 - p PICZαA。线性化的重组表达载体转化到巴斯德毕赤酵母 X- 33及 KM71H中 ,筛选Zeocin高抗性酵母菌株 ,甲醇诱导目的蛋白表达。经 SDS- PAGE和 Western blot检测表明 ,Bo IL- 2以融合蛋白形式在胞内表达 ,但没能分泌到胞外。通过 Bo IL- 2在巴斯德毕赤酵母中的表达 ,重点讨论了信号肽。 孙红立 陈芳 于瑞嵩 刘惠莉 曹祥荣 李震关键词:毕赤酵母 分泌表达 信号肽 基因 镁黄长石与Slit2对骨髓基质干细胞成骨分化的影响 目的:①前期的研究表明,镁黄长石生物活性陶瓷(akermanite),具有良好的生物力学性能,并且在模拟体液中形成骨样羟磷灰石,能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖。但并不知道,akermanite对于更具有临床意义的人骨髓基... 孙红立关键词:生物陶瓷 成骨分化 细胞生物学 文献传递 牛白细胞介素-2在毕赤酵母中的表达(英文) 被引量:1 2005年 将编码牛白细胞介素 - 2 (Bo IL2 )成熟肽的 c DNA克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichia pastoris)表达载体 p PICZB中 ,构建出含 Bo IL 2基因的重组质粒 Bo IL 2 - p PICZB。将经 Sac 酶切后线性化的 Bo IL 2 - p PICZB电转化到巴斯德毕赤酵母X- 33中 ,转化子经高浓度 Zeocin抗性筛选鉴定后 ,用 1 %甲醇诱导目的蛋白表达。经 SDS- PAGE及 Western blotting检测 ,表明 Bo IL2在酵母中获得了胞内表达 ;通过金属螯合亲和层析 (MCAC)获得纯化的重组蛋白 ;培养小鼠CTL L 2细胞进行活性检测 ,证实所表达的重组 Bo IL 陈芳 孙红立 曹祥荣 李震 于瑞嵩关键词:白细胞介素2 毕赤酵母 基因表达 金属螯合亲和层析 利用生物反应器构建组织工程化骨修复大段骨缺损 戴尅戎 汤亭亭 朱振安 张晓玲 谢幼专 干耀恺 孙晓江 李德强 孙红立 1.取得的技术突破和技术创新: 通过本次国际合作,解决了组织工程领域干细胞不能在大段载体内存活、增殖和分化这一技术瓶颈和难点,构建出了可用于大段组织工程化骨构建的灌注型生物反应器,为我国在生物反应器领域取得了具有自主知...关键词:关键词:生物反应器 组织工程化骨 大段骨缺损 人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达 2008年 目的构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞,研究其相关特性。方法利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定。实验分为3组:未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达。结果酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3×104CFU/mL。原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒。RT-PCR结果显示在C组出现311bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达。ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达。结论构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据。 芮云峰 王友 张晓玲 孙红立 曲志虎 戴尅戎关键词:逆转录病毒载体 骨关节炎 软骨细胞 基因治疗