李玲玲
- 作品数：22 被引量：49H指数：4
- 供职机构：中山大学附属第五医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 杆状病毒Ac60基因的原核表达与亚细胞定位研究
- 2009年
- 用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-Ac60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞(Sf9)中ORF60基因的表达,结果显示:在感染后的细胞中有2条分子量分别约为33 ku和17 ku蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现:在病毒感染的晚期,Ac60蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。
- 李玲玲李朝飞庞义杨凯
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达亚细胞定位
- 杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备被引量：1
- 2007年
- 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
- 李玲玲李朝飞庞义
- TSA通过抑制STAT1磷酸化与核转位下调人肝癌细胞HepG2内IDO的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:研究曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)下调γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达的分子机制。方法:Western blot检测TSA在IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的诱导表达情况。用免疫细胞化学法检测TSA处理HepG2细胞后对IDO表达的影响。流式细胞术分析TSA处理后IFN-γ受体2表达量的变化,进一步在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对IFN-γ激活位点(γ-activated sites,GAS)、干扰素刺激应答元件(interferonstimulated response elements,ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。结果:TSA以剂量依赖方式下调HepG2细胞内IFN-γ诱导的IDO表达、能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位,但是上调IFN-γ受体2受体的表达。双荧光素酶报告基因分析和Westernblot结果表明:TSA能显著抑制GAS和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB和ISRE的激活。结论:TSA能下调IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关,而不是通过下调IFN-γ受体的表达来实现的。
- 李玲玲江冠民张革衣艳梅张帆杜军
- 关键词：TSASTAT1核转位肝癌IDO
- 杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备被引量：2
- 2007年
- 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。
- 李玲玲李朝飞陈维春庞义
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体
- CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑四联法治疗幽门螺杆菌疗效的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑的四联疗法治疗幽门螺杆菌(Hp)疗效的影响,并观察CYP2C19基因多态性与质子泵抑制剂药物不良反应的相关性。方法 113例经电子胃镜或14C呼气试验证实Hp阳性同时有反复的消化道症状的慢性胃炎患者,给予泮托拉唑40 mg,bid+枸橼酸铋钾220 mg,bid+左氧氟沙星片0. 5 g,qd+阿莫西林克拉维酸钾0. 914 g,bid四联疗法根除Hp,疗程10 d,疗程结束后4～6周内行14C呼气试验评估疗效。采用多聚酶链-限制性片段长度多态性方法检测CYP2C19基因多态性,并据其分组,即强代谢表型(EM)组、中间代谢表型(IM)组和弱代谢表型(PM)组。观察各组间Hp根除率、临床症状缓解情况和不良反应发生情况。结果 (1)10 d含泮托拉唑四联方案Hp总根除率为78. 8%,CYP2C19 EM型、IM型和PM型的Hp根除率分别为72. 1%、80. 0%、89. 5%,各基因型间Hp根除率差异无统计学意义(P>0. 05);(2)该四联疗法总症状缓解率为93. 8%;出现不良反应8人,总的不良反应发生率7. 07%,EM、IM和PM组不良反应发生率分别为4. 65%、1. 96%、26. 3%,组间差异有统计学意义(P <0. 01)。结论 CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑的四联法根除Hp的疗效影响不大。有必要进行大样本的研究,并考虑更多的因素对其疗效的影响。
- 黄译莹李玲玲孙环环卫金歧
- 关键词：CYP2C19基因多态性幽门螺杆菌根除率泮托拉唑
- HSP72在肾小球内皮-间充质细胞转分化中的作用
- 目的 探讨热休克蛋白72(HSP72)在肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化(EndMT)中的作用.方法 用TGF-β1( 25ng/ml)诱导人肾小球内皮细胞转分化,并使用不同浓度的谷氨酰胺(GLn,0～12mmol/L)...
- 郑晶张桦贾宁张慧涛林琳朱伟平李玲玲李中和
- 钙卫蛋白在肾脏缺血再灌注损伤大鼠中的表达及其作用
- 2016年
- 目的:探讨钙卫蛋白(CALP)在肾脏缺血再灌注损伤(IRI)大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组(sham组),每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平,ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤,伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05)。CALP、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在IRI组呈高表达,在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强(P<0.05)。结论:肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF-α和IL-6水平升高,CALP、TLR4和NF-κB p65在肾组织中表达增强。CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。
- 陈萍祯朱晔张慧涛徐晓嫦郑晶贾宁林宇静李玲玲张桦
- 关键词：肾脏缺血再灌注损伤钙卫蛋白TOLL样受体4
- 白细胞介素17在狼疮性肾炎小鼠中的表达及抗白细胞介素17抗体的干预作用被引量：6
- 2014年
- 目的:探讨白细胞介素17(IL-17)在狼疮性肾炎(LN)小鼠中的表达及抗IL-17抗体的干预作用。方法:11周龄的雌性MRL/lpr小鼠36只随机分为实验组和干预组,另有同龄雌性昆明小鼠18只为对照组。干预组每只小鼠腹腔注射抗小鼠IL-17多克隆抗体20μg,每2周1次,至实验观察点结束。各组分别于第1次给药后的24 h、14 d及28 d处死6只小鼠。光镜下观察肾脏病理情况,ELISA法检测小鼠血清IL-17的含量,免疫组化法检测肾组织IL-17的表达水平。结果:MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞及基质弥漫增生,肾小管上皮细胞颗粒及空泡变性,灶状萎缩,肾间质淋巴及单核细胞浸润伴纤维化;而干预组肾脏病理改变较实验组为轻。MRL/lpr小鼠的血清IL-17含量在实验组各时点均显著高于对照组(P<0.05),而在干预组各时点均显著低于实验组(P<0.05)。IL-17在实验组小鼠肾小管上皮细胞中的表达明显增强,在各时点均显著高于对照组(P<0.05);在干预组,IL-17在各时点的表达均显著低于实验组(P<0.05)。结论:IL-17在MRL/lpr小鼠血清与肾组织中的表达显著增加,而抗IL-17抗体可通过抑制IL-17的表达而抑制LN的炎症免疫反应,减轻肾脏病理损害。
- 徐靓张慧涛郑晶贾宁林琳林宇静李玲玲周文英张桦
- 关键词：狼疮性肾炎白细胞介素17
- 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在狼疮肾炎小鼠模型中的表达及其意义被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）在 LN 中的表达及其意义。方法36只12周龄的雌性 MRL/lpr 小鼠随机分为实验组和干预组，并以相同周龄的18只雌性昆明小鼠作为对照组。干预组小鼠腹腔注射抗小鼠 IL-17抗体20μg，每2周1次，至实验观察点结束。各组分别于第1次给药后的24 h、14 d 及28 d 处死6只小鼠。 ELISA 法检测小鼠血清 NGAL、IL-17、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-1的水平，免疫组织化学法检测肾组织 NGAL、IL-17、MMP-9及 TIMP-1的表达水平。组间均数的比较采用单因素方差分析或非参数秩和检验。两因素之间的关系采用 Pearson 相关分析。结果①实验组 MRL/lpr 小鼠血清 NGAL 水平在各时间点均高于对照组和干预组[16周龄（30.31±1.22） ng/ml、（11.36±0.14） ng/ml、（20.09±0.35） ng/ml，F=986.524，P〈0.01]，血清 IL-17、MMP-9、TIMP-1水平在各时间点也均显著高于对照组和干预组（P 均〈0.05）。② NGAL 在实验组小鼠肾小管上皮细胞中的表达明显增强，在各时间点均高于对照组和干预组[16周龄（11.27±0.58）与（0.45±0.19）、（9.22±0.67），F=15.158， P=0.001]，IL-17、MMP-9、TIMP-1在各时间点的表达也均高于对照组和干预组（P 均〈0.05）。③在实验组（16周龄），MRL/lpr 小鼠血清 NGAL 水平和肾脏 NGAL 表达量与 IL-17、MMP-9、MMP-9/TIMP-1水平均呈正相关[血清（r=0.899、0.789、0.925，P〈0.01），肾脏（r=0.929、0.899、0.723，P〈0.01）]。结论 NGAL 在MRL/lpr 狼疮小鼠的血清水平与肾组织中的表达均显著增加，并通过与 IL-17、MMP-9等炎性因子的相互作用而参与 LN 的炎症免疫反应。
- 张桦徐靓张慧涛郑晶贾宁朱晔李玲玲林宇静李中和
- 关键词：狼疮肾炎中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白基质金属蛋白酶组织抑制因子-1INTERLEUKIN-17
- 胰高血糖素样肽-1对人脂肪干细胞增殖、成脂分化及脂代谢的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对人脂肪干细胞(ASCs)增殖、成脂分化及脂代谢的影响。方法胶原酶分离法原代培养人ASCs,体外扩增及传代建立稳定的培养体系。用含有不同浓度GLP-1(0、0.1、1.0、10.0及100.0 nmol/L)的基础培养基和成脂分化培养基培养细胞,噻唑蓝法(MTT)检测干预24、48及72 h后细胞增殖情况,分化21 d后行油红O染色、异丙醇萃取法检测细胞内脂质含量,同时测定分化过程中上清液中甘油释放量作为脂质分解的指标,测定细胞裂解液中三酰甘油的含量作为脂质合成指标。结果 1高浓度的GLP-1(100.0 nmol/L)对人ASCs的增殖具有抑制作用,且随着时间的延长抑制作用更明显。2油红O染色及异丙醇萃取法显示100.0 nmol/L的GLP-1抑制人ASCs的成脂分化。3在人ASCs成脂分化过程中,高浓度的GLP-1(100.0 nmol/L)可促进甘油的释放,而对细胞内三酰甘油的含量影响不大。结论高浓度GLP-1可抑制人ASCs的增殖及成脂分化,促进脂质分解,对脂质合成无明显作用。
- 邹玲玲戴武鲁红云刘红李玲玲孙辽谢丹红
- 关键词：胰高血糖素样肽-1人脂肪干细胞细胞增殖成脂分化脂质代谢
