丁娜
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：宁夏医科大学更多>>
- 发文基金：宁夏医科大学校级科研项目宁夏高等学校科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Orexin A减轻谷氨酸诱导的HT22神经元损伤
- 2019年
- 目的探讨Orexin A对谷氨酸诱导小鼠海马神经元细胞系(HT22)细胞损伤的保护作用。方法培养HT22细胞,建立谷氨酸诱导HT22细胞损伤模型,CCK-8法检测Orexin A对谷氨酸诱导HT22细胞的存活率的影响,流式细胞技术检测Orexin A对谷氨酸诱导HT22细胞的凋亡的影响,蛋白印迹法检测ERK1/2磷酸化水平。结果确定30 mmol·L^-1谷氨酸浓度为本实验谷氨酸诱导HT22神经元损伤模型的实验条件;在实验浓度范围内,Orexin A本身对HT22细胞存活率无明显影响;与模型组细胞相比,100 nmol·L^-1和1000 nmol·L^-1 Orexin A干预组的细胞存活率上升(P<0.05);Orexin A干预组细胞凋亡比例相对减少(P<0.05),而Orexin OX1受体拮抗剂(SB-334867)干预组细胞凋亡比例无改变(P>0.05)。Orexin A干预组ERK1/2磷酸化水平与模型组差异无统计学意义(P>0.05);与Orexin A干预组比较,SB-334867干预组ERK1/2磷酸化水平增加(P<0.05)。结论Orexin A对谷氨酸诱导的HT22神经元损伤具有保护作用。
- 和祯泉马康张春张瑞丁娜左娣孙涛牛建国
- 关键词：OREXIN谷氨酸小鼠
- 基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制被引量：2
- 2018年
- 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。
- 王斌刘昆梅郭乐张春和祯泉丁娜杨华孙之鹏王晓
- 关键词：细胞凋亡
- 海马与新皮质组织特异性GABRG2基因敲除小鼠模型的构建及其在遗传性癫痫伴热性惊厥附加症中的初步研究
- 建立基于 Cre/loxp 重组酶系统调控的海马和新皮质特异性 GABAA 受体 γ2 亚基(GABRG2)基因条件基因敲除小鼠模型,为深入研究海马区和新皮质GABRG2 在癫痫发生中的功能作用提供动物模型.将引进的GA...
- 郭胜楠李信晓王峰刘昆梅丁娜扈启宽孙涛
- 大鼠颞叶癫痫点燃后海马星形细胞上调基因-1 mRNA和蛋白水平的表达变化被引量：2
- 2016年
- 目的颞叶癫痫反复发作,对颞叶癫痫发病机制深入研究尤其重要。文中旨在探讨颞叶癫痫脑损伤后星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)mRNA和蛋白水平的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,随机数字表法分为对照组、癫痫组,每组30只。癫痫组一侧海马注射海人酸制备癫痫大鼠模型,对照组注射相同体积等渗盐水。通过RT-PCR、Western blot以及免疫组化等技术检测AEG-1mRNA和蛋白分子水平变化。结果在海人酸致痫大鼠模型中,AEG-1 mRNA较对照组明显升高[(1.508±0.090)vs(1.000±0.150),P<0.05];AEG-1蛋白的表达亦明显增加[(1.048±0.080)vs(0.749±0.550),P<0.05];免疫组化结果表明,癫痫组大鼠海马CA1、CA3、DG区AEG-1表达均高于对照组。结论 AEG-1与颞叶癫痫有高度相关性,AEG-1mRNA和蛋白水平表达变化说明AEG-1可能参与了癫痫发作过程。
- 左娣刘昆梅张瑞和祯泉丁娜马琳张春
- 关键词：海人酸癫痫海马
- 大鼠下丘脑室旁核与orexin神经元的纤维联系及其在癫痫中的活性研究被引量：2
- 2019年
- 目的:观察大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经元和下丘脑orexin神经元在癫痫发作后的活性变化,以及相互之间的纤维联系。方法:制作匹罗卡品癫痫大鼠模型,免疫组织化学方法检测PVN内神经元和orexin神经元表达c-Fos情况;BDA顺行神经示踪实验观察PVN内神经元的纤维向orexin神经元分布区域的投射情况;CTb逆行神经示踪实验观察orexin神经元向PVN的投射情况。结果:PVN内神经元和orexin神经元在癫痫大鼠中的活性明显提高;PVN神经元向orexin集中分布的区域有大量的神经纤维投射;orexin神经元也可以投射到PVN。结论:PVN神经元和orexin神经元参与癫痫发作,PVN与orexin神经元之间存在相互神经纤维联系,可能在癫痫发作及伴发功能性障碍中发挥着重要的作用。
- 和祯泉张燕丁娜马康左娣黄卓群孙涛牛建国
- 关键词：癫痫下丘脑室旁核OREXIN
- Orexin A预处理对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用
- 2019年
- 目的观察食欲素(Orexin)A预处理对过氧化氢(H2O2)损伤PC12细胞存活率及凋亡的影响。方法将PC12细胞分为对照组、H2O2组和Orexin A+H2O2组,分别通过噻唑蓝(MTT)、倒置显微镜进行形态观察、流式细胞术对细胞存活率、凋亡细胞形态、细胞凋亡率进行分析。结果 Orexin A+H2O2组细胞存活率显著高于H2O2组,细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均显著低于H2O2组(P<0.05)。结论 Orexin A能提高H2O2细胞存活率、降低细胞凋亡,发挥神经保护作用。
- 左娣王峰和祯泉马琳丁娜任晓璠张春牛建国
- 关键词：过氧化氢PC12细胞
- 食欲素A对阿尔茨海默病细胞模型存活率的影响及作用机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨食欲素A对阿尔茨海默病（AD）细胞模型存活率的影响及机制。方法分别以0、10、20、30、40、50μmol／Lβ-淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）处理PCI2细胞24h，筛选合适的Aβ25-35，浓度用于构建AD细胞模型。建模成功后实验分为3部分：（1）分别加入0（对照组）、0．01、0．1、1、2μmol／L食欲素A预处理细胞24h，然后以30μmol／LAβ25-35处理细胞24h，通过四唑盐（MTT）比色法测定细胞存活率，确定食欲素A适宜干预浓度。（2）采用倒置相差显微镜对对照组、30μmol／LAβ25-35，处理组、0．01μmol／L食欲素预处理组细胞形态进行观察。（3）观察细胞加入食欲素A受体抑制剂SB408124预处理2h后细胞存活率的变化。结果（1）30μmol／LAβ25-35为构建AD细胞模型的最适浓度。不同浓度食欲素A预处理AD细胞模型后，各组细胞存活率差异有统计学意义（F=27．120，P=-0．000），0．01μmol／L食欲素A为适宜干预浓度。（2）30μmol／LAβ25-35处理组部分细胞突起断离，胞体受损。0．01μmol／L食欲素A预处理组细胞突起断离，胞体受损较30μmol／LA1325-35处理组程度减轻。（3）设对照组细胞存活率为100％，加入食欲素A受体抑制剂SB408124后，细胞存活率为（109．10±0．36）％，较0．01μmol/L食欲素A处理组细胞存活率（117．24±2．72）％明显降低，差异有统计学意义（m0．05）。结论食欲素A可通过与受体结合提高AD细胞模型的存活率．可能成为AD防治的一个重要靶点。
- 左娣和祯泉马琳丁娜任晓璠张春顾金海徐方
- 关键词：食欲素A阿尔茨海默病存活率
- 枸杞多糖对大鼠海马细胞癫痫模型的保护作用机制被引量：3
- 2020年
- 目的:探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对大鼠海马细胞癫痫模型的保护作用及其对细胞凋亡、炎症因子的影响。方法:利用无Mg2+培养液建立癫痫细胞模型,设正常组、模型组、枸杞多糖高、中、低剂量组(100,50和25 mg·L-1),CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内游离Ca2+;免疫荧光染色检测线粒体膜电位;分光光度法检测培养基中乳酸脱氢酶含量;RT-PCR检测白细胞介素-1、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、环氧化酶-2基因转录活性。结果:与模型组比较,枸杞多糖给药组细胞存活率增加(P<0.05);凋亡率下降(P<0.05);乳酸脱氢酶含量减少(P<0.05);细胞中游离Ca2+降低(P<0.05);白细胞介素-1、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、环氧化酶-2基因转录活性下调(P<0.05)。结论:枸杞多糖可能是通过下调线粒体凋亡途径和炎症因子的表达发挥其抗癫痫发生作用。
- 马琳左娣张春任晓璠和祯泉丁娜王峰
- 关键词：癫痫海马
- 海马与新皮质组织特异性GABRG2基因敲除小鼠模型的构建及其在遗传性癫痫伴热性惊厥附加症中的初步研究被引量：3
- 2020年
- 建立基于Cre/loxp重组酶系统调控的海马和新皮质特异性GABAA受体γ2亚基(GABRG2)基因条件基因敲除小鼠模型,为深入研究海马区和新皮质GABRG2在癫痫发生中的功能作用提供动物模型。将引进的GABRG2fl/wt转基因小鼠与海马和新皮质特异性表达Cre+/+重组酶工具鼠分别进行繁配和鉴定,然后再将2种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为GABRG2^fl/wtCre+的小鼠为构建的海马区和新皮质特异性GABRG2基因条件性敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型,Real-Time PCR和Western blot技术检测GABRG2基因在小鼠海马和新皮质中的mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。PCR结果显示子代小鼠基因型符合GABRG2fl/wtCre^+;海马与新皮质特异性GABRG2基因敲除小鼠海马和新皮质中GABRG2的mRNA水平和蛋白质水平显著低于对照组;热造模过程中,实验组小鼠癫痫发作更明显。利用Cre/Loxp技术成功构建了海马与新皮质GABRG2基因敲除小鼠,可为进一步研究GABRG2在癫痫发生中的作用机制奠定基础。
- 郭胜楠李信晓李信晓王峰刘昆梅丁娜扈启宽
- G蛋白偶联雌激素受体1对颞叶癫痫大鼠发作易感性的影响被引量：1
- 2021年
- 目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性激动剂G1、拮抗剂G15对癫痫大鼠发作易感性的影响。方法将60只大鼠按随机数字表法分为对照组、G1处理组、G15处理组,每组20只。后2组大鼠分别腹腔注射GPER1特异激动剂G1(10μg)、拮抗剂G15(40μg),连续注射12 d。3组大鼠均制备氯化锂-匹罗卡品癫痫模型。观察大鼠腹腔注射匹罗卡品后1 h内的行为学表现,每隔5分钟采用Racine分级评估癫痫发作严重程度,比较3组大鼠癫痫发作(Racine分级Ⅳ级)的潜伏期和不同时间点癫痫发作级别。使用脑电监测系统监测大鼠脑电图,记录匹罗卡品注射前10 min到注射后2 h的脑电数据,采用傅立叶变换(FFT)进行脑电的时频分析。比较3组大鼠脑电能量值的分布和癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值的变化。结果(1)与对照组、G1处理组比较,G15处理组大鼠的癫痫发作潜伏期明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。注射匹罗卡品后15 min、20 min,G1处理组大鼠癫痫发作分级较对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。注射匹罗卡品后15~35 min,G15处理组大鼠癫痫发作分级较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,G1处理组大鼠癫痫发作时脑电波幅较小,而G15处理组大鼠癫痫发作时间较早,且脑电波幅大、频率高。与对照组比较,G1处理组大鼠的脑电能量值变化不明显,而G15处理组大鼠在2 h内呈现出更高的脑电能量值。与对照组和G1处理组比较,G15处理组大鼠在癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GPER1的活性水平与癫痫发作易感性有关,特异性抑制GPER1活性可增强癫痫易感性,增大癫痫过程中特定频率波段的能量值。
- 左娣文玉军任晓璠丁娜路光远马琳和祯泉牛建国
- 关键词：癫痫匹罗卡品G1
