葛亮
- 作品数：5 被引量：22H指数：2
- 供职机构：南京中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 木犀草素对巨噬细胞炎症极化的影响及机制被引量：14
- 2018年
- 目的探讨木犀草素对细菌分泌的内毒素脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症极化的影响及机制。方法以脂多糖和IFN-γ刺激RAW264.7细胞诱导M1型极化;白细胞介素(IL)-4刺激细胞诱导其向M2型极化。木犀草素处理后,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变。流式细胞术检测细胞膜表面CD86的表达。qPCR分别检测M1型标志分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β、IL-6和M2型标志分子精氨酸酶(Arg)1、CD206、CD163等基因的表达。ELISA检测上清IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌。Westernblotting检测蛋白通路磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT)3(ser727)和p-STAT6(tyr641)的变化。结果活化的M1细胞形态变化明显,细胞呈梭形、树突状,胞核明显,表明M1细胞被极化。5、10、20μmol/L木犀草素作用于M1细胞后,M1型炎症因子iNOS mRNA的相对表达(分别为95.45±1.64、92.73±16.96、29.52±3.07)与M1组(98.91±10.65)相比明显下调(P<0.05),IL-1b mRNA的相对表达(分别为103.14±2.58、78.38±8.65、41.59±6.80)与M1组(110.69±4.12)相比明显下调(P<0.05),IL-6mRNA的相对表达(分别为177.51±19.28、106.14±5.63、27.15±1.26)与M1组(394.10±33.47)相比明显下调(P<0.05或P<0.01);而与M2型相关的抗炎因子Arg1 mRNA的相对表达(分别为3.22±1.44、4.99±0.99、7.63±2.33)与M1组(1.61±0.50)相比明显上调(P<0.05),CD206mRNA的相对表达(分别为1.21±0.44、1.70±0.53、4.23±1.71)与M1组相比(0.68±0.19)明显上调(P<0.05),CD163 mRNA的相对表达(分别为0.62±0.39、1.38±0.40、2.06±0.12)与M1组(0.41±0.14)相比明显上调(P<0.05);信号转导蛋白p-STAT3的表达明显下调;而p-STAT6的表达明显上调。结论木犀草素可能通过下调p-STAT3及上调p-STAT6来调节RAW264.7细胞的M1/M2极化,从而发挥抗炎作用。
- 王书侠姚孝明葛亮吉宁蒋叶曹萌
- 关键词：极化信号转导转录激活因子小鼠巨噬细胞木犀草素
- 细胞壁锚定蛋白SasX调控RNAⅢ参与金黄色葡萄球菌ST239克隆生物膜形成及致病性相关研究
- 2023年
- 目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)细胞壁锚定蛋白SasX对RNAⅢ转录表达的调控,揭示其对SA的生物膜(BF)形成和致病过程的作用。方法收集2022年4~6月南京医科大学附属儿童医院住院患儿临床样本中分离的SA ST239克隆,采用基因敲除和回补技术建立突变株△SasX和回补株△SasX(pRB473-SasX),经RNAⅢ抑制肽(RIP)处理,再采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SasX基因对RNAⅢ转录水平的影响,绘制增殖曲线观察菌株生长速度,镜下观察菌株聚集能力,半定量实验观察BF形成,并采用qPCR验证BF形成相关基因表达。结果△SasX株的RNAⅢ水平显著低于野生株(t=4.273、P=0.037)。△SasX株BF形成能力较野生株显著减弱(t=4.619、P=0.032),△SasX(pRB473-SasX)+RIP株BF形成能力显著低于△SasX(pRB473-SasX)株(t=7.874、P=0.011)。△SasX株icaA(t=5.324、P=0.027)、sarA(t=6.250、P=0.016)和fnbA(t=4.833、P=0.031)mRNA水平显著低于野生株;△SasX(pRB473-SasX)+RIP株icaA(t=4.386、P=0.034)和sarA(t=5.531、P=0.023)mRNA水平较△SasX(pRB473-SasX)株显著降低。镜下可见野生株有大片聚集成团,△SasX株多为单个散在分布或小范围聚集,△SasX株的聚集能力较野生株显著减弱;△SasX(pRB473-SasX)株的聚集能力和野生株相当,△SasX(pRB473-SasX)+RIP株的聚集能力较△SasX(pRB473-SasX)株减弱。结论SA SasX通过调控RNAⅢ的转录表达,促进细菌的聚集和BF形成能力,从而参与其致病过程。
- 张利张利张阳喻哲昊葛亮葛亮
- 关键词：金黄色葡萄球菌群体感应系统生物膜
- 南京城北地区2016年食源性疾病病原微生物的感染情况研究被引量：8
- 2018年
- 目的了解2016年南京城北地区食源性疾病病原菌的感染情况,为预防和控制食源性疾病的暴发提供参考。方法收集2016年就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的食源性疾病疑似病例,对粪便标本进行肠道病毒、细菌检测,对病例基本信息、暴露信息和检测结果等进行统计分析。结果 153例疑似病例中,肠道病毒的检出率为7.19%(11/153),以诺如病毒为主(3.92%,6/153),肠道细菌的检出率为12.42%(19/153),以致泻大肠埃希菌(7.19%,11/153)和副溶血弧菌(5.23%,8/153)为主,致泻大肠埃希菌中肠聚集性大肠埃希菌的感染率最高(63.64%,7/11)。可疑食品主要为水产动物及其制品(20.91%,32/153),其次为肉及肉制品(18.30%,28/153)和粮食及其制品(18.30%,28/153)。结论水产动物及其制品是引起南京城北地区食源性疾病发病的主要可疑食品,诺如病毒、致泻性大肠埃希菌和副溶血弧菌为主要的感染病原微生物,应加强宣传教育,完善监测制度,增强对食源性疾病的防控能力。
- 吴静杨婉薇梅国勇张利赵巧燕葛亮施建丰姚孝明
- 关键词：食源性疾病诺如病毒致泻性大肠埃希菌副溶血性弧菌
- 微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤
- 2024年
- 目的探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平。结果LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P<0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P<0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P<0.05)。miR-23可以与FIS1的3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1。miR-23 mimic组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 inhibitor组的TNF-α和IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组的IL-10分别为(0.149±0.012)和(0.121±0.024)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.060±0.010)、(0.084±0.009)和(0.048±0.008)ng/ml,均高于miR-23 mimic组的(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.149±0.025)ng/ml,低于miR-2
- 张利张利葛亮马菁菁张阳孙林春
- 关键词：脓毒症肾小管上皮炎症微小RNA
- 生长激素促进结直肠癌细胞增殖的实验研究
- 2011年
- 目的 研究生长激素受体（GHR）在结直肠癌细胞株表面的表达情况并探讨人类重组生长激素（rh-GH）对人类结直肠癌细胞增殖的影响.方法 采用流式细胞术及免疫荧光法检测9株人类结直肠癌细胞株表面GHR表达；四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测不同浓度rh-GH以及生长激素受体拮抗剂（GHRA）对结直肠癌细胞增殖的影响.结果 GHR在多株结直肠癌细胞株表面存在表达差异,其中GHR在HCT-8人类结直肠癌细胞高表达[（58.23±5.51 ）％],LoVo细胞几乎不表达[（0.20±0.04） ％].一定质量浓度的r-hGH（ 50、100 ng/ml）对GHR＋的HCT-8细胞有促增殖作用（均P＜0.05）,但并不呈剂量依赖；应用GHRA封闭GHR后,r-hGH的促增殖作用消失；而rhGH对GHR-的人类结肠癌细胞株LoVo增殖无影响（均P＞0.05）.结论 外源性生长激素对人类结直肠癌细胞有促增殖作用。
- 吴晓宇葛亮陈志伟姚学权陈彻许哲李为苏刘福坤
- 关键词：结直肠肿瘤生长激素生长激素受体
