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蔡瑶: 作品数：12 被引量：30H指数：3; 供职机构：四川农业大学更多>>; 发文基金：四川省科技支撑计划“十二五”国家科技计划农村领域国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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一种猪胸膜放线杆菌基因、蛋白的原核表达和应用: 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种猪胸膜放线杆菌基因、蛋白的原核表达和应用，以App7型菌株基因组为模板扩增出AdhE的全基因序列；成功构建pET‑32a(+)‑rAdhE原核表达载体，实现其在大肠杆菌BL21中的可...; 徐志文朱玲蔡瑶赵军谷思睿张儒博; 文献传递

四川地区一株猪塞内加谷病毒的分离鉴定及VP1基因的序列分析: 2019年; 猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)是一种新出现的小RNA病毒科病毒,感染该病毒的猪群,尤其是仔猪可能出现严重的病理症状甚至死亡。2015年之前,该病毒主要流行于美国、加拿大及巴西等地区,并于2015年3月传入中国[1],给养猪业带来了严重的经济损失。2018年2月,本实验室检测并收集了阳性病料,采用PK-15细胞对病料进行病毒分离,并通过观察细胞CPE(细胞病变效应)、RT-PCR扩增和VP1基因序列测定进行鉴定。结果显示,成功分离到四川地区第一株SVV并将其命名为CH-MS-2018。对VP1基因的扩增测序及序列分析结果表明,本次分离得到的CH-MS-2018株VP1基因与GenBank上分别于2015年分离的2株和2016年分离的3株美国株的亲缘关系较近,同源性为98.6%。而与最早分离的SVV原始株关系较远,仅为88.0%~89.8%。本研究结果为进一步探索四川地区SVV的生物学性质奠定了基础。; 陈瑛琪蔡瑶龚双燕李小璟李雨濛李幽幽徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：VP1基因

猪传染性胃肠炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用被引量：5: 2017年; 为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据Gen Bank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法。该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较。结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本。说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒荧光定量PCR检测初乳

猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型复合PCR方法的建立被引量：2: 2017年; 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)在腹泻仔猪中的感染状况,建立一种能同时检测PEDV与PCV2混合感染的复合PCR方法。根据Gen Bank已发表的PEDV、PCV2的基因序列,选择保守区域分别设计、合成1对特异性引物,扩增目的片段分别为530和278 bp。经反应条件优化,建立了特异性检测PEDV、PCV2的复合PCR方法。应用本试验所建复合PCR方法,对2016年4—8月采自四川省乐山、宜宾、广元和遂宁等地区的67份腹泻仔猪样品(肠系膜淋巴结、肠道黏膜及其内容物混合)进行检测。结果显示:PEDV、PCV2单一感染阳性率分别为34.33%、73.13%;PEDV+PCV2复合感染率为16.42%。经与特异性检测PCV2的PCR法和PEDV的RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。; 龚双燕李小璟陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞朱玲徐志文; 关键词：流行性腹泻病毒圆环病毒2型复合PCR

猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别被引量：2: 2018年; 为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。; 姜子义李碧蔡瑶颜久淇龚双燕樊毅黄剑波朱玲徐志文; 关键词：PRV 多重PCR 疫苗株变异株

塞内加谷病毒3C蛋白生物信息学分析及真核质粒构建表达被引量：3: 2019年; 3C蛋白是塞内加谷病毒重要的非结构蛋白之一,在病毒入侵机制及影响宿主抗病毒天然免疫方面发挥重要作用。试验应用Oligo 7.0和Primer 6.0软件,用BLAST对比SVV世界参考株,设计一对特异性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA为模板,将序列连接pMD19-T载体后测序,对正确片段作生物信息学分析可知SVV 3C可编码一个较稳定非分泌型蛋白,具有一个保守“催化三联体”。预测发现该蛋白具有16个磷酸化位点,证明其较高活性,预测其二级结构后得到再次证实。将pMD19-SVV-3C和真核表达载体pcDNA3.1(+)双酶切后连接,重组质粒经鉴定后命名为pcDNA3.1(+)-SVV-3C。将pcDNA3.1(+)-SVV-3C转染到BHK-21细胞24 h后制样作Western blotting,成功验证该重组质粒可在BHK-21中真核表达。相比其他同科病毒,当前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在为进一步研究SVV 3C蛋白结构提供理论依据,为后续探索SVV 3C蛋白对于宿主作用机制奠定基础。; 陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：生物信息学分析真核表达

传染性胸膜肺炎放线杆菌（7型）AdhE蛋白的原核表达及其免疫保护性研究: 胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）是引起猪胸膜肺炎的病原体,胸膜肺炎是一种具有高度传染性的严重猪疾病,对全球各地的养殖业均造成了巨大的经济损失。猪胸膜肺炎以急性出血...; 蔡瑶; 关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性; 文献传递

四川地区猪源致病性大肠埃希菌分子分群、生物被膜形成能力及耐药性研究被引量：9: 2019年; 为了解四川地区猪源致病性大肠埃希菌分子流行特点及流行趋势,本研究在2016—2018年,从四川省各个地区无菌采集患病猪肝脏、脾脏、肺脏、肠道等组织样品208份。通过细菌分离鉴定方法筛选出87株大肠埃希菌,通过小鼠攻毒试验确定其中22株为致病性大肠埃希菌,并对其进行分子分群、生物被膜形成能力检测、耐药性试验、耐药基因及HPI毒力基因检测。结果显示,22株致病性大肠埃希菌多分布于A群(59.09%),且生物被膜形成阳性率为72.73%,其中强成膜能力菌株占40.91%。大肠埃希菌对19种抗生素药物均有不同程度的耐药性,其中对恩诺沙星、复方新诺明、氨苄西林、阿莫西林、红霉素、四环素等9种药物的耐药率较高,为81.82%~100%;对庆大霉素、左氧氟沙星、诺氟沙星、头孢曲松等4种药物的耐药率为63.64%~72.73%;对其他药物的耐药率为4.55%~54.55%,均呈现多重耐药。22株致病性大肠埃希菌检出的耐药基因包括β-内酰胺类TEM(36.36%)、SHV(9.09%)、OXA(9.09%),磺胺类sulⅠ(63.64%)、sulⅡ(95.45%),氨基糖苷类acc(3)-Ⅱ(68.18%)、aph(3′)-Ⅱ(50.00%),氯霉素类cmlA(45.45%)、floR(81.82%),四环素类tetA(81.82%)、tetB(86.36%),喹诺酮类qurB(40.91%)共12个基因型,检测出HPI毒力基因irp1(40.91%)、irp2(13.64%)、fyuA(13.64%)3种。研究结果表明,四川省猪源致病性大肠埃希菌多分布于A群,生物被膜形成阳性率较高,存在严重的多重耐药性,四环素类、氯霉素类、氨基糖苷类及磺胺类耐药基因的携带率较高,且存在多重耐药基因与毒力基因共存情况。研究结果可为四川地区猪病的预防和治疗提供参考依据。; 彭珂楠周雪珂殷鑫欢李飞蔡瑶曾喻兵江朝源张儒博杨泽晓徐志文朱玲; 关键词：大肠埃希菌耐药基因

一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道: 2017年; 2017年6月,四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状,采集发病猪的肠道、淋巴结等样品,应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明,该猪场为猪轮状病毒(Po RV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染。通过采取综合防控措施,病情得到有效控制,减少了该猪场的经济损失。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪轮状病毒猪圆环病毒2型

猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2017年; 为快速简便地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中已发布的基因序列,选择PRRSV的ORF7基因和PEDV的S基因,分别设计1对特异性引物,通过对反应体系中各成分的优化,建立了可同时检测PRRSV和PEDV的双重RT-PCR方法。本方法能从PRRSV和PEDV的混合基因组中分别扩增出300 bp和578 bp的特异性片段,且对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、轮状病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性;应用该方法对采自成都周边的79份临床样品进行检测,结果与单一RT-PCR的检测结果一致,具有良好的重复性;本方法检出的最小拷贝数为1.49×10~5copies/μL,敏感性也较好。本研究建立的双重RT-PCR方法具有较好实用性,可用于临床样品的检测。; 李小璟龚双燕陈瑛琪李雨濛蔡瑶徐逸飞朱玲徐志文; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流行性腹泻病毒 ORF7基因 S基因双重RT-PCR

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