金鑫
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞
- 2018年
- 目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)激活小鼠肝星状细胞(mouse hepatic stellate cells,mHSC)的具体机制。方法:实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组(mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1)、抑制组(mHSC-T25+1μmol/L TGF-β-R1抑制剂)和对照组(mHSC-T25)。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TGF-β1、转化生长因子β受体1(transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1)、Jagged1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果:(1)TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA:激活组(315.1±6.2)%,抑制组(34.3±4.5)%(F=3291.956,P=0.000);TGF-β1:激活组(524.8±14.3)%,抑制组(29.0±10.7)%(F=469.534,P=0.000);TGF-β-R1:激活组(235.5±15.2)%,抑制组(17.0±2.8)%(F=392.239,P=0.000);Jagged1:激活组(548.7±16.6)%,抑制组(17.4±4.7)%(F=364.166,P=0.000);VEGF:激活组(331.9±19.8)%,抑制组(19.5±3.7)%(F=278.407,P=0.000);HGF:激活组(376.00±6.51)%,抑制组(16.2±2.7)%(F=640.340,P=0.000)。(2)激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA:激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014(F=2098.556,P=0.000);Jagged1:激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005(F=1242.556,P=0.000)。(3)TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1:激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012(F=67.706,P=0.000);α-SMA:激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011(F=239.186,P=0.000);TGF-β-R1:激活组1.192±0.142,对照组
- 艾麦提.牙森金鑫王伟李德卫
- 关键词：肝星状细胞转化生长因子-Β1JAGGED1
- MicroRNA-155在肝细胞癌对索拉非尼抗药中的作用研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨微小RNA155(microRNA-155,miR-155)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)对索拉非尼(sorafenib)抗药中的作用。方法将miR-155抑制慢病毒(miR-155 inhibitor)转染miR-155表达相对较高的SMMC-7721细胞,而miR-155过表达慢病毒(miR-155)转染miR-155表达相对较低的Hep G2细胞;用荧光定量PCR(qPCR)检测经慢病毒转染的SMMC-7721细胞及HepG2细胞miR-155表达量,以验证慢病毒转染效果;通过CCK-8法及流式细胞术检测各组细胞经索拉非尼作用后的存活率及凋亡情况;用Western blot检测凋亡相关蛋白活性caspase-3表达量,从而进一步探究各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,转染miR-155抑制慢病毒的SMMC-7721细胞表达miR-155明显下调(P<0.01),经索拉非尼处理后其存活率明显降低(P<0.05),而索拉非尼诱导其凋亡明显增加(P<0.01),其活性caspase-3表达量明显上调(P<0.01);miR-155过表达慢病毒转染HepG2细胞后,则相反。结论 miR-155参与肝细胞癌对索拉非尼的抗药,有希望成为一个肝癌治疗的新靶标。
- 吕峰王伟艾麦提.牙森金鑫李德卫
- 关键词：肝细胞癌索拉非尼抗药慢病毒
- 转化生长因子β信号通路对小鼠肝大部分切除术后干细胞介导的肝再生的影响
- 2019年
- 目的·探讨抑制转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)通路对小鼠肝大部分切除术(partial hepatectomy,PH)后干细胞介导的肝再生过程的影响。方法·取18只C57BL/6雄性小鼠,建立小鼠肝大部分切除模型,监测术前(PH0)、术后第1日(PH1)、第3日(PH3)、第7日(PH7)的肝组织中TGF-β通路的信号分子,以及干细胞标志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5,LGR5)的m RNA和蛋白表达情况。再取32只小鼠,分为抑制剂组[PH+SB-431542,10 mg/(kg·d)]和对照组(PH+生理盐水),并于术后第1日(PH1)和第3日(PH3)留取肝脏标本,使用荧光定量PCR、Western blotting以及免疫荧光染色检测TGF-β通路和干细胞标志物AFP、LGR5的变化情况。结果·肝大部分切除术后小鼠肝脏TGF-β1的m RNA和蛋白、磷酸化SMAD2(p-SMAD2)蛋白,以及Afp的mRNA和阳性细胞数量、Lgr5的m RNA水平均随时间推移逐渐上调,至PH3达到高峰(均P<0.05),到PH7时则恢复至术前水平。与对照组相比,抑制剂组小鼠PH3时的上述指标均被显著抑制(均P<0.05)。结论·TGF-β通路可能对小鼠肝大部分切除术后干细胞介导的肝再生起着一定的调控作用。
- 陈梓昕金鑫万里李德卫
- 关键词：转化生长因子Β干细胞肝再生
- TGF-β1激活肝星状细胞并促进血管内皮细胞新生血管形成被引量：2
- 2018年
- 该研究旨在探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)激活中的机制以及活化HSCs促进内皮细胞血管新生(angiogenesis)的作用效果。运用q RT-PCR检测α-SMA、Smad2/3、VEGFA和TGF-β1-RI的m RNA水平;Western blot检测α-SMA、Smad2/3、p-Smad2/3、VEGFA和TGF-β1-RI的蛋白质水平;基质胶(matrigel)血管形成实验检测活化HSCs的促人脐静脉血内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管形成作用。TGF-β1作用后的HSCs高表达α-SMA以及经典的TGF-β1/TGF-β1-RI/Smad2/3信号通路下游相关的TGF-β1-RI和Smad2/3等,具备了活化表型并能促进内皮细胞血管新生。结果表明,TGF-β1信号通过经典的Smad2/3通路激活了HSCs,使激活后的HSCs通过分泌VEGFA具备了促进内皮细胞血管新生的功能。
- 金鑫毛熙贤艾麦提.牙森陈梓昕李德卫
- 关键词：肝星状细胞TGF-Β1SMAD2/3VEGFA血管新生
- TGF-β1信号介导的肝星状细胞促进胚胎肝前体细胞向胆管细胞方向分化被引量：3
- 2018年
- 目的探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)激活的小鼠肝星状细胞(mouse hepatic stellate cells,mHSCs)对小鼠胚胎肝前体细胞(mouse hepatic progenitor cells,mHPCs)分化的影响。方法 mHSCs细胞株加入10 ng/mL TGF-β1刺激48 h,并分为激活组(mHSCsTGF-β1)和对照组(mHSCs)。qRT-PCR和Western blot法检测mHSCs激活情况。采用荧光激活细胞筛选法(fluorescence-activated cell sorter,FACS)分选DLK1(delta-like1 homologue)表面抗原阳性的原代mHPCs,分选的细胞利用免疫荧光染色法观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、白蛋白(albumin,ALB)及细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)抗原表达情况。mHPCs与mHSCs Transwell共培养6 d后,分为mHPCs+mHSCs-TGF-β1组、mHPCs+mHSCs组和mHPCs组。细胞免疫荧光技术法和qRTPCR法检测分化标志物表达情况。结果激活组mHSCs中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等m RNA和TGF-β1、a-SMA、TGF-β-R1、Jagged1等蛋白的表达量均较对照组明显增加(P<0.01);FACS新分选的mHPCs胞质中表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;mHPCs+mHSCs-TGF-β1组mHPCs胞质中大量表达胆管细胞标志物,并且CK19、SOX9、Hes1等m RNA表达量均较其他两组明显增加,而其他两组mHPCs中ALB、AFP等的表达量明显增加(P<0.01)。结论 TGF-β1激活的肝星状细胞诱导胚胎肝前体细胞向胆管细胞分化。
- 艾麦提·牙森金鑫陈梓昕王伟李德卫
- 关键词：肝星状细胞TGF-Β1共培养
- 小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养
- 2017年
- 目的从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞(m HPCs),并将其诱导分化为胆管细胞。方法用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4和6 d的DLK1^+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。结果体外共培养时,大部分DLK1^+细胞分裂增殖明显,呈葡萄状聚集生长。第4天,部分细胞开始贴壁增殖,形态开始变成梭形。结果显示,分选的DLK1^+细胞表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;在共培养的第4天其开始表达CK19,和微弱表达ALB;第6天,其高表达CK19,而几乎不表达的ALB。结论应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1^+细胞并鉴定其大部分为mHPCs,并可在体外与MEFs Transwell共培养的条件下,诱导培养其分化为胆管细胞。
- 王伟吕峰金鑫艾麦提.牙森李德卫
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞胆管细胞
- 胚胎肝前体细胞与转化生长因子β1信号介导的肝星状细胞联合移植治疗急性肝损伤被引量：2
- 2018年
- 背景:研究表明,移植的胚胎肝前体细胞在受体内大量增殖及长期存活困难,与转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)介导的肝星状细胞联合移植有望解决这一科学难题。目的:观察TGF-β1介导的小鼠肝星状细胞与小鼠胚胎肝前体细胞联合移植对急性肝损伤的治疗作用。方法:①建立慢病毒介导的稳定过表达TGF-β1基因的小鼠肝星状细胞株,通过细胞免疫荧光、qRT-PCR、western blotting法检测肝星状细胞转染目的基因情况;②体外培养小鼠胚胎肝前体细胞株mHPCs-E_(14.5)并以细胞免疫荧光染色法鉴定;③通过CCl4腹腔注射联合2/3肝切除构建急性肝损伤小鼠模型,然后进行mHPCs-E_(14.5)单独移植(mHPCs-E_(14.5)移植组),mHPCs-E_(14.5)与mHSCs-pHBLV-CMVIE-TGF-β1联合移植(过表达TGF-β1联合移植组),mHPCs-E_(14.5)与mHSCs-pHBLV-CMVIE-GFP联合移植(对照联合移植组);④在肝切除后14 d,共聚焦免疫荧光检测各组小鼠脾实质内ALB、CK19、a-SMA阳性表达,全自动生化分析仪检测小鼠血清谷丙转移酶、谷草转移酶活性。结果与结论:①成功建立稳定过表达TGF-β1基因的小鼠肝星状细胞株,与空载对照组相比,慢病毒mHSCs-pHBLV-CMVIE-TGF-β1组目的基因TGF-β1、α-SMA表达明显增高(P<0.01);②mHPCs-E_(14.5)细胞株大量表达AFP,微弱表达ALB和CK19,提示该细胞株为胚胎肝前体细胞;③mHPCs-E_(14.5)移植组脾实质内存在少量CK19阳性细胞和ALB阳性细胞;对照联合移植组脾实质内存在少量CK19阳性细胞、α-SMA阳性细胞及较多的ALB阳性细胞,而过表达TGF-β1联合移植组存在大量CK19阳性细胞、α-SMA阳性细胞,少量ALB阳性细胞;④细胞移植后血清谷丙转移酶及谷草转移酶有所下降,过表达TGF-β1联合移植组下降更明显(P<0.05); ⑤结果提示,移植的胚胎肝前体细胞在脾实质内定植并分化为肝细胞和胆管细胞,TGF-β1信号介导的肝星状细胞诱导胚胎肝前体细胞�
- 艾麦提.牙森金鑫陈梓昕李德卫
- 关键词：肝星状细胞转化生长因子Β1急性肝损伤脾脏
