孙笑非
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 抗甲磺隆假单胞菌的分离及其乙酰乳酸合酶的大小亚基ilvIH基因的克隆和表达被引量：6
- 2008年
- 乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰氨类的作用靶标。【目的】获得抗甲磺隆的乙酰乳酸合酶基因,构建其表达载体,并分析基因中的位点突变与乙酰乳酸合酶对磺酰脲类除草剂抗性产生原因。【方法】从长期使用甲磺隆的土壤中分离到1株抗甲磺隆的菌株Lm10,利用PCR技术从Lm10总DNA中克隆到乙酰乳酸合酶的大小亚基基因ilvIH,对ilvIH氨基酸序列进行比对分析。分别将ilvI和ilvH分别连接到表达载体pET29a(+)多克隆位点,转化大肠杆菌(Escherichia coli)获得转化子BL21(pET-I)和BL21(pET-H),并诱导表达。【结果】菌株Lm10鉴定为假单孢菌(Pseudomonas sp.),对甲磺隆的最高耐受浓度达到14000μmol//L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。Lm10与甲磺隆敏感菌株KT2440的小亚基氨基酸序列完全相同,而大亚基有6个氨基酸位点发生变异。转化子在IPTG诱导下,乙酰乳酸合酶的大小亚基的蛋白成功表达,粗酶液酶活试验结果表明Lm10的ilvI基因表达的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性。【结论】发现菌株Lm10的乙酰乳酸合酶大亚基对甲磺隆有很强的抗性,抗甲磺隆菌株Lm10与敏感菌株KT2440的ilvI有6个氨基酸位点差异,这些位点突变可能是乙酰乳酸合酶对甲磺隆抗性产生的原因。
- 孙笑非黄星陈博李顺鹏何健
- 利用偶联反应光度法检测甲磺隆
- 2007年
- 在pH值为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠体系中,甲磺隆与亚硝酸钠反应生成重氮盐,重氮盐与α-萘胺进行偶联反应生成红棕色化合物,该产物在500nm处有最大吸光值,据此,建立了利用偶联反应测定甲磺隆残留的新方法。在最佳条件下,甲磺隆质量浓度与吸光值呈良好的线形关系,线性范围为10￣150mg/L。平均回收率为98.10%,相对标准偏差为2.12%。
- 潘继杰黄星孙笑非何健崔中利李顺鹏
- 关键词：甲磺隆偶联反应分光光度法
- 抗甲磺隆假单胞菌的分离及其ilvIH基因的克隆和表达
- 乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类...
- 孙笑非
- 关键词：甲磺隆除草剂抗性抗性基因
- 文献传递
- 降解菌S113对甲磺隆污染土壤生物修复作用的研究被引量：12
- 2008年
- 在室内条件下,研究了降解菌S113(Methylopila sp.)对甲磺隆污染土壤的修复作用。S113能够以甲磺隆为唯一碳源生长,72h对50mgL-1甲磺隆的降解率达98.38%。投加降解菌S113可显著提高土壤中甲磺隆的降解速率。当甲磺隆浓度为10mgkg-1干土,S113接种量为108个g-1土时,第30天土壤中甲磺隆降解率为76.9%,对照土壤中甲磺隆降解率仅为11.9%。S113降解甲磺隆的速率和接种量呈正相关,当接种量减少为105个g-1干土时,降解菌对甲磺隆的降解作用微弱。在土壤中甲磺隆浓度较低的条件下,S113的降解效果显著,而当土壤中甲磺隆浓度达到50mgkg-1时,甲磺隆降解率仅为39.6%。S113降解土壤中甲磺隆的最适温度为30℃,第30天的降解率可达75.9%。当温度为25℃、20℃时,第30天甲磺隆降解率仅为53.5%和23.9%。S113菌剂灌根,能不同程度地缓解土壤中浓度为40、80μgkg-1的甲磺隆对玉米生长的抑制作用,但当甲磺隆浓度增加到120μgkg-1时,接种S113对药害解除作用不显著。结果表明,人工接种降解菌S113,能有效去除土壤中甲磺隆残留。
- 黄星潘继杰孙纪全孙笑非李顺鹏
- 关键词：甲磺隆生物修复
- 一种2,4-二氯苯氧乙酸丁酯农药残留降解菌及其生产的菌剂
- 本发明提供一种2，4-二氯苯氧乙酸丁酯农药残留的降解菌剂，属于生物高技术领域。所用菌株为革兰氏染色阴性菌Ld1，经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。主要生物学特性为G<Sup>-</Sup>，菌体为短杆状...
- 李顺鹏沈维亮黄星余豪杰孙纪全孙笑非梁波
- 文献传递
- 甲磺隆水解酶酶促反应体系的建立与特性研究被引量：2
- 2005年
- 在室内控制条件下对甲磺隆降解菌S113(Methylopila sp.)的水解酶进行了研究,发现该酶为胞内酶、非诱导酶.建立了甲磺隆水解酶的酶促反应体系:2 830μL Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液(0.2 mol/L,pH 7.0),150μL甲磺隆(1000 mg/L),20μL粗酶液(约1.2μg粗蛋白),30℃水浴30 min.甲磺隆水解酶pH值稳定范围为6～9,最适pH值为8.0.水解酶热不稳定,45℃处理30 min,酶活下降59.22%,70℃处理30 min可完全灭活.测定了8种金属离子对水解酶的作用,发现1 mmol/L的Ca2+对酶活有促进作用.
- 黄星孙纪全潘继杰顾立锋孙笑非李顺鹏
- 关键词：甲磺隆水解酶
- 一种2,4－二氯苯氧乙酸丁酯农药残留降解菌及其生产的菌剂
- 本发明提供一种2，4－二氯苯氧乙酸丁酯农药残留降解菌及其生产的菌剂，属于生物高技术领域。所用菌株为革兰氏染色阴性菌Ld1，经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。主要生物学特性为G<Sup>－</Sup>，菌...
- 李顺鹏沈维亮黄星余豪杰孙纪全孙笑非梁波
- 文献传递
