何雁南
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
- 供职机构：华中农业大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性被引量：8
- 2007年
- 为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法（LiCl）,与鲑鱼精DNA（ssDNA）共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明：表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%-30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸（pH2）,对热（56℃）部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法（CPE50）测定干扰素抗病毒活性,在MDBK（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×10^6U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
- 姚清侠曹毅钱平徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抗病毒活性口蹄疫病毒
- 口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达被引量：7
- 2007年
- 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,重组蛋白分子量约为66 Ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示表达的重组蛋白占菌体总蛋白的37.4%,且主要以包涵体的形式存在。包涵体以SKL变性后,经PEG4000、氧化型谷胱苷肽和还原型谷胱苷肽复性。粗提产物以CPE_(50)测得重组蛋白在MDBK细胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性达到1600 U/mL,说明表达产物具有干扰素的生物学活性,为下一步基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 姚清侠钱平曹毅郭东春徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：口蹄疫病毒抗原表位猪Γ-干扰素
- CSFV猪瘟病毒NS3非结构蛋白结构模型的建立
- 黄病毒科家族分为三个病毒属:黄病毒属、丙型肝炎病毒属和瘟病毒属,其中前两个病毒属里包括了一些主要的人类病原体,后一个属为动物的病原体。该科的 NS3蛋白是一个非常重要的多功能非结构蛋白,具有三种酶的活性,前三分之一区域 ...
- 徐卓菲司有辉何雁南晁彦杰钱平陈焕春
- 文献传递
- 口蹄疫新型疫苗研究
- 口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的，偶蹄动物共患的烈性、急性、接触性传染病。尽管该病的死亡率低，但由于...
- 何雁南
- 关键词：口蹄疫病毒免疫效力DNA疫苗重组伪狂犬病毒杆状病毒
- 文献传递
- 口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达
- 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及序列测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了...
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- 关键词：口蹄疫病毒抗原表位猪Γ-干扰素
- 文献传递
- 检测猪瘟抗体间接ELISA方法的建立及应用被引量：11
- 2007年
- 用猪肾传代细胞PK-15增殖猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒苗株(HCLV),病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、浓缩后作为包被抗原。经各种条件的优化,建立了检测猪瘟血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度分22.28mg/L,血清最佳稀释度为1:40,与猪细小病毒、O型口蹄疫、猪衣原体阳性血清呈阴性反应,与HCV标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应;与标准阴性血清和临床未感染CSFV的猪血清呈阴性反应;用HI和本ELISA方法检测94个猪厂送检血清1455份。其中血清稀释液中不含PEG6000的914份送检血清阳性率为83.7%,与HI符合率为96.6%,HI阳性率略高为85.7%;血清稀释液中含2% PEG6000的541份送检血清阳性率为88.72%,与HI符合率为97.3%,HI阳性率为88.17%。结果表明本试验所建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点,可用于临床猪瘟血清抗体的定性和定量检测。
- 何雁南栾后利董晓辉曹毅姚清侠刘正飞陈焕春
- 关键词：猪瘟ELISA
- 猪瘟、口蹄疫重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特性
- 猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种高度接触性烈性传染病,以发热和出血为主要特征,具有很强的传染性和很高的致死率。猪瘟呈世界性分布,往往突然爆发,造成巨大的经济损失,被国际兽疫局列为A类16种法定传染病之一。猪瘟病毒属于黄病毒...
- 何雁南王荡徐卓菲姚清侠司有辉钱平陈焕春
- 文献传递
- 猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定被引量：12
- 2008年
- 利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。
- 姚清侠钱平曹毅徐卓菲何雁南陈焕春
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
- 猪瘟普查抗体间接ELISA方法的建立及应用
- 用猪肾传代细胞PK-15增殖猪瘟病毒(HCV)兔化弱毒苗株(HCLV),病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、浓缩后作为包被抗原。经各种条件的选择．建立了检测猪瘟血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度分2...
- 何雁南栾后利徐卓菲司有辉钱平陈焕春
- 文献传递
- 重组腺病毒介导的猪α干扰素的制备
- 亚克隆猪α干扰素(PoIFNα)基因,并将其插入腺病毒穿梭载体 pShuttle-CMV, 构建成重组质粒 pSh-PoIFNα。将此重组质粒经 Pme Ⅰ线性化和去磷酸化后回收,与腺病毒骨架载体 pAdEasy-1共同...
- 姚清侠曹毅钱平徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：Α-干扰素腺病毒
- 文献传递
