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人溶菌酶N端与Exendin-4嵌合蛋白的基因克隆及原核表达被引量：1: 2009年; 目的:克隆嵌合多肽人溶菌酶N端-Exendin-4基因并进行原核表达和纯化。方法:通过重组PCR技术将人溶菌酶N端74个氨基酸的基因序列与Exendin-4多肽基因序列相连接,其间引入一段由凝血酶和二肽基肽酶识别位点组成的连接序列。以嵌合基因hLYZ(N74)-Ex4与质粒pET-32a(+)构建原核表达体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。表达蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化、Western blotting鉴定;透析复性后,以肠激酶切割并回收目的多肽。结果:重组质粒pET-32a/hLYZ(N74)-Ex4构建正确,目的蛋白主要以包涵体形式存在,37℃诱导4h、IPTG浓度为0.6 mmol/L时表达量最高,约占菌体蛋白总量的30%。Western blotting检测显示重组蛋白为单一清晰条带。重组蛋白经肠激酶切割后,回收得到高纯度的嵌合多肽。结论:成功构建hLYZ(N74)-Ex4嵌合基因的原核表达质粒,高效原核表达并获得高纯度目的蛋白。; 王明刘宇婷潘霞明曾可静朱元昌周羽竝刘誉; 关键词：人溶菌酶原核表达

晚期糖基化终产物及其受体在白细胞中表达与老年人精神障碍的关系: 2009年; 目的探讨血液中晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGE）表达水平与老年人精神障碍性疾病的关系。方法将观察对象分为健康对照组31例、阿尔茨海默病（AD）组36例、血管性痴呆组20例、脑血管病所致精神障碍组28例。以荧光分光光度法测定各组血清AGEs水平，以逆转录多聚酶链式反应测定RAGE mRNA水平。结果血清AGEs水平在AD组、血管性痴呆组和精神障碍组分别为（477．1±36．2）AU／ml、（512．6±33．2）AU／ml和（415．2±32．5）AU／ml，均明显高于健康对照组（357．4±28．2）AU／ml（F=3．77，P〈0．05）。RAGE mRNA水平（RAGE／b—actin）分别为1．12±0．34、1．27±0．41和1．18±0．42，亦高于健康对照组的0．92±0．37（F=4．07，P〈0．01），但各疾病组间差异无统计学意义（F=0．979，P〉0．05）。白细胞中RAGE mRNA水平与血清AGEs呈正相关关系（r=0．442，P〈0．01）。结论AD、血管性痴呆、脑血管病所致精神障碍患者血中的AGEs及其受体RAGE mRNA水平均较同龄健康老年人明显升高，AGEs与RAGE的相互作用可能直接或间接参与了老年人精神障碍性疾病的病理变化。; 黎雪松王明刘誉; 关键词：阿尔茨海默病

晚期糖基化终产物对人肝细胞株LO2增殖和凋亡的影响被引量：2: 2009年; 目的:研究晚期糖基化终产物(AGEs)对人正常肝细胞株LO2的作用。方法:以体外培养的LO2细胞株为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、3.75、7.5、15、30、60 g/L)AGEs对LO2生长的抑制作用,应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,RT-PCR分析不同质量浓度AGEs处理LO2后其IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因转录水平变化。结果:当LO2细胞在AGEs质量浓度分别为3.75、7.5、15、30、60 g/L保温48 h后,细胞的增殖均受到显著性抑制,且抑制作用具有剂量依赖性。流式细胞仪分析发现AGEs促使LO2发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度增高而增加。RT-PCR方法检测显示,AGEs使LO2细胞中IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因mRNA的表达水平增高。结论:AGEs可抑制人正常肝细胞株LO2的增殖和诱导其凋亡,并能上调IL-1β,TNF-α和HMGB1基因的表达。; 李海成何金花王明刘誉; 关键词：晚期糖基化终产物细胞凋亡毒性

人溶菌酶N端与Exendin-4嵌合蛋白的原核表达、纯化及鉴定: 目的：将目前公认对Ⅱ型糖尿病有良好治疗效果、已获得临床应用的多肽药物exendin-4,与另一个可用于防治糖尿病慢性并发症的人溶菌酶N端多肽串联并进行原核表达、纯化及鉴定。该设计的嵌合多肽可被人体内自然存在的凝血酶和二肽...; 王明; 关键词：EXENDIN-4 晚期糖基化终产物原核表达; 文献传递

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王明