李传保
- 作品数：18 被引量：60H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人血小板膜糖蛋白Ⅵ胞外区片段在大肠杆菌中的表达及纯化
- 本实验利用PCR技术扩增GPVI胞外区第2个Ig-C样结构区域(第123～268位氨基酸),并在原核表达系统pGEX-3x中获得了融合蛋白的可溶性表达.通过GST凝胶亲合层析技术,纯化得到融合蛋白,为进一步研究GPVI的...
- 屈晨雪李传保王建中武淑兰万文徽
- 关键词：聚合酶链反应血小板膜糖蛋白大肠杆菌
- 文献传递
- 人血小板膜糖蛋白VI胞外区片段的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2005年
- 目的探讨在原核细胞中表达人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)胞外区片段,制备其多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增人血小板GPVI胞外区片段123aa^268aa的基因序列,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达。表达产物经亲和层析法纯化及鉴定后,免疫家兔制备多克隆抗体。采用已知单克隆抗体进行ELISA双抗夹心法、Westernblot和流式细胞术鉴定其特异性。结果构建的重组质粒经酶切和测序证实序列正确。经诱导表达在相对分子量为4200处有一条明显融合蛋白条带,Westernblot分析证实与预期值一致。所得的抗血清效价为1∶128,ELISA双抗夹心法检测表明,所制抗体识别血小板GPVI分子。Westernblot和流式细胞术检测结果显示所制抗体可与血小板裂解液中及血小板膜表面GPVI分子发生特异性免疫反应。结论利用原核细胞表达的人血小板GPVI分子胞外区片段能有效地诱发动物产生多克隆抗体,所得抗体与人血小板上GPVI分子特异性结合,为深入研究GPVI分子提供了工具。
- 屈晨雪李传保王建中武淑兰万文徽
- 关键词：血小板多克隆抗体
- 细胞色素P450 2C9新突变1400T＞C的发现及体外酶活性研究被引量：2
- 2013年
- 目的 明确1例华法林高敏感患者细胞色素P450 2C9酶（CYP2 C9）的新突变及其生物学功能.方法 提取患者基因组DNA,PCR产物利用直接测序法对CYP2C9、维生素K环氧化物还原酶复合物1（VKORC1）及细胞色素P450 4F2酶（CYP4F2）基因进行序列测定,与国际数据库比对分析确定是否存在碱基突变.通过定点诱变方法获得3种典型缺陷型CYP2C9＊2、＊ 3、＊13及新突变型CYP2C9的cDNA,利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System试剂盒,获得高表达各型CYP2C9变异体的昆虫微粒体.Western印迹法进行CYP2C9蛋白定量,以甲苯磺丁脲为探针底物药,体外测定不同药物浓度下各型CYP2C9变异体的最大反应速率（Vmax）和米氏常数（Km）,评价新突变类型对CYP2C9体外代谢活性的影响.结果 患者CYP2C9基因中发现全新的突变类型：1400T＞C,可导致CYP2C9第467位氨基酸发生变异（L467P）,VKORC1及CYP4F2基因无碱基突变.体外代谢实验结果显示,突变体CYP2C9＊2、＊3、＊13和L467P的体外酶学活性分别为野生型的91.58％、13.55％、0.11％和1.59％.结论 1400T＞C突变可大大降低CYP2C9的体外酶学活性,提示携带此突变型的患者在使用经CYP2C9代谢的药物时,药物代谢速度会明显减慢,容易造成体内药物蓄积,发生潜在的药物不良反应.
- 戴大鹏李传保王双虎耿培武胡国新蔡剑平
- 关键词：细胞色素P450酶系统突变酶活性研究
- 应用XE-5000检测网织血小板及其在急性冠脉综合症诊断中的价值初探
- 目的建立本实验室网织血小板的参考区间,探讨其在急性冠脉综合症诊断中的意义。方法对本检测方法的批内精密度、批间精密度进行评价;随机选取200例2012年1月2012年2月卫生部北京医院健康体检的血常规标本进
- 李传保樊瑾唐国栋
- 2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白VI的改变及其临床意义
- 观察2型搪尿病患者血小板膜糖蛋白Ⅵ(Glycoprotein Ⅵ，GP Ⅵ)糖尿病患者血小板膜GP Ⅵ表达增高，检测血小板膜表面GP Ⅵ水平和血浆中可溶性GPⅥ水平对于预测搪尿病患者血栓形成的风险性以及了解糖尿病患者血小...
- 屈晨雪王建中李传保
- 关键词：2型糖尿病血小板膜糖蛋白
- 流式免疫微球芯片技术分析特异性血小板自身抗体被引量：5
- 2008年
- 目的建立流式免疫微球芯片技术（FCIBA）分析特异性血小板自身抗体的新方法。方法使用不同红色荧光强度的微球，包被不同血小板膜蛋白单克隆抗体（抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC单克隆抗体），制备特异性血小板自身抗体检测微球，用流式细胞仪检测微球捕获的血小板抗原-自身抗体复合物，检测结果与微孔板改进抗原捕获ELISA（MACE）进行比较，并检测了部分免疫性以及非免疫性血小板减少性紫癜患者血清中的5种特异性血小板自身抗体。结果FCIBA分析抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体，批内重复性变异系数（CV）分别为4．82％、6．09％、5．04％、5．73％、5．30％；稀释试验呈对数线性相关，相关系数（r）分别为0．9972．0．9966．0．9988．0．9965、0．9982；新方法对5种特异性血小板自身抗体的分析结果均与MACE试验结果高度相关，r值分别为0．9289、0．9224、0．8894、0．9100、0．9134（P均〈0．01）。新方法分析98例免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，血小板特异性自身抗体检出的阳性率为51．69％；其中，抗GPⅡb／Ⅲa为40．82％，抗GPⅠa／，Ⅱa为24．45％，抗GPⅣ为19．39％，抗GPⅠb／Ⅸ为32．65％，抗HLA-ABC为17．35％。新方法分析40例非免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，阳性率为0。结论本研究建立了FCIBA分析特异性血小板自身抗体的新方法，可同时分析抗血小板GPⅡb／Ⅲa、GPⅠa／，Ⅱa、GPⅣ、GPⅠb／Ⅸ和HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体。
- 吴煦王建中李传保屈晨雪袁家颖汪润王新华赵燕君张爱玉
- 关键词：血小板减少性紫癜血小板膜糖蛋白类蛋白质阵列分析
- 北京地区老年人血栓弹力图检测参考范围研究被引量：11
- 2016年
- 目的测定北京地区65岁以上健康老年人血栓弹力图（TEG）数据，建立正常参考值，并与试剂厂家提供的正常参考值以及55岁以下对照组进行比较。方法2014年3～5月采集65岁以上健康老年人静脉血4ml，分别测定凝血四项和TEG。应用Haemoscope5000分别测定凝血反应时间（R）、凝血形成时间（K）、凝固角（α-Angle）、最大振幅（MA）检测TEG。凝血四项检测包括：凝血酶原时间（PT）、激活部分凝血致活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（FIB）。结果119例健康老年人TEG各参数平均值分别为R：6．29min，K：1．63min，α-Angle：66．09°，MA：63．43mm；各参数95％可信区间分别为R：4．4～8．2min，K：0．8～2．5min，α-Angle：55．0～77．1°，MA：54．5～72．3mm。老年组与对照组R值、K值和α-Angle均差异有统计学意义（P〈0．001或P〈0．05），老年人不同性别间在K值、α-Angle和MA值均差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。16．1％（19例）的健康老年人至少有一项结果超出厂家提供的正常值范围，3％（3例）的健康老年人被诊断为凝血异常，检测特异度为84％。与厂家提供的参考范围比较，北京地区健康老年人的R值偏低，MA值偏高。结论血栓弹力图检测实验室需根据人群特点制定相应的参考范围。
- 陆学军吴巍李传保赵昕
- 关键词：血栓弹力描记术参考值
- 中国汉族人群24种CYP2C19新突变体的体外活性研究被引量：2
- 2015年
- 目的以S-美芬妥英为探针药,体外分析24种汉族人群CYP2C19新变异体的酶学活性。方法以野生型CYP2C19 c DNA为模板,通过定点诱变方法获得24种CYP2C19新变异体和典型变异体CYP2C19.3的c DNA,利用Bac-toBac Baculovirus Expression System试剂盒,获得高表达各型CYP2C19变异体的昆虫微粒体。Western blot法进行CYP2C19蛋白定量。以S-美芬妥英为探针底物药,体外测定不同药物浓度下各型CYP2C19变异体的最大反应速率Vmax和米氏常数Km,评价新突变类型对CYP2C19体外代谢活性的影响。结果利用昆虫表达系统,成功获得高表达典型变异体CYP2C19.3和24种CYP2C19新变异体的昆虫微粒体。Western blot结果显示,变异体CYP2C19.3和35FS无正常CYP2C19酶的表达,与野生型相比,变异体CYP2C19.29和T130M表达量明显下降,其余变异体蛋白表达量与野生型接近。体外代谢实验结果显示,变异体L16F针对S-美芬妥英的体外清除率(Vmax/Km)较野生型升高,T130M的活性与野生型相似,其余各突变型的清除率均低于野生型。其中,突变体CYP2C19.3、35FS和R124Q对于该底物药无代谢活性。结论新发现的24种CYP2C19基因变异大多可引起酶体外药代活性显著降低,提示携带此类基因突变的个体服用经由CYP2C19代谢药物时,体内药物代谢速度可能会显著变慢,临床用药时需密切关注。
- 李传保戴大鹏蔡杰耿培武王双虎王豪胡国新蔡剑平
- 关键词：CYP2C19突变体体外研究
- 流式微球技术检测血小板微粒的方法建立及其评价被引量：5
- 2005年
- 目的建立血小板微粒(plateletderivedmicroparticles,PMPs)的流式微球技术(cytometricbeadarray,CBA)检测方法并对其进行方法学评价。方法采用包被针对血小板膜糖蛋白Ⅲa(CD61)单克隆抗体的检测微球捕获PMPs,用CD41PE结合捕获的PMPs,利用流式细胞仪对微球PMPsCD41PE复合物进行检测。通过试验优化检测条件;并对方法的重复性和检测线性进行评价。对45例健康人PMPs水平进行检测。结果检测微球在4℃可以稳定保存90d以上,变异系数0.65%,基本可以满足临床检测的要求。应用CTAD抗凝管采集标本可以有效的抑制PMPs的体外释放;室温反应4h可以达到PMPs最大的结合;利用PBS洗涤可以去除检测微球对PMPs的非特异性吸附。该方法批内变异系数6.8%;批间变异系数10.4%,有较好的重复性;利用该方法检测血小板活化上清中的PMPs,在0～200μl之间有较好的线性(r=0.9962)。45例正常健康成人血液PMPs参考范围为1.031～1.766(相对荧光强度)。结论流式微球技术可以简便、快捷、准确地检测PMPs,对于临床出血、血栓性疾病的诊治具有重要意义。
- 李传保王建中吴煦袁家颖汪润张爱玉赵燕君屈晨雪王新华
- 关键词：流式微球技术血小板微粒
- 检验科SARS标本检测安全管理介绍
- 2003年
- 目的 :为防止SARS患者的标本对实验室人员的感染和污染环境 ,制定适应本科室实际情况的恶性传染病实验室规章制度。方法 :(1)加强安全观念教育 ,制定生物安全制度 ,明确安全职责 ,实行科主任、各组组长、消毒隔离监督员三级监督制 ;(2 )建立专用实验室或SARS工作区 ,由指定专人进行操作 ,实验室内按照安全消毒工作指南定时定期对空气、地面、门窗、台面以及仪器等进行消毒 ;(3)工作人员进入、离开实验室必须按要求采取防护措施 ;(4 )SARS样本的采集、运输和前处理等过程均要注意预防渗漏和溅出 ,SARS标本的分类、显微镜检查和酶联免疫测定在生物安全柜中进行 ,检测后一切污染过的物品和用具按照规定进行处理。结果 :SARS爆发至今 ,检验科尚无一例工作人员感染SARS。结论 :我们的防范措施是切实可行而有效的 。
- 李海霞屈晨雪徐国宾闫存玲张国华李传保王建中夏铁安
- 关键词：检验科安全管理
