尹丽
- 作品数:3 被引量:0H指数:0
- 供职机构:大连医科大学药学院更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划北京市科委重大科技项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 新基因XTP11剪切体的克隆与亚细胞定位
- 2009年
- [目的]克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白反式调节基因11(XTP11)的剪切体,观察剪切体蛋白在人肝癌细胞HepG2中的定位。[方法]利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transciptase-polymerase chain re-action,RT-PCR)技术扩增XTP11剪切体,将目的基因片段插入克隆载体pGEM-T中,经双酶切和测序鉴定后,定向克隆至荧光表达载体pEGFP-C1中,转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察确定其亚细胞定位。[结果]XTP1剪切体的开放阅读框长度为1314 bp,编码产物为437个氨基酸残基;重组质粒在HepG2细胞中转染效率为50%,蛋白定位于细胞浆。[结论]转染重组表达载体的细胞内出现局限性强绿色荧光信号,推断目的蛋白位于细胞质内。XTP11剪切体的克隆和亚细胞定位为进一步从分子水平分析其生物学功能奠定基础,为阐明其在乙型肝炎病毒X蛋白致病机制中的作用提供信息。
- 尹丽王琦林原成军
- 关键词:克隆转染亚细胞定位
- HBxAg反式调节基因11剪切体的克隆化及生物信息学分析
- 2011年
- 目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生物信息学技术获得编码序列、物理化学性质、蛋白质结构和功能等基本信息。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,生物信息学分析推定ORF为1 314个核苷酸,编码产物为437个氨基酸残基。结论此文发现并鉴定了HBV XTP11剪切体,为阐明其在HBV X蛋白致病机制中的作用提供新的研究线索。
- 尹丽林原唐泽耀成军
- 关键词:剪切体克隆化生物信息学
- 乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11剪切体的原核表达及蛋白纯化
- 2009年
- 目的克隆乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11(XTP11)剪切体,构建其原核表达载体,表达并纯化该蛋白。方法应用逆转录聚合酶链反应及生物信息学技术从HepG2细胞中提取cDNA为模板并扩增,意外获得XTP11基因的剪切体基因,选用pGEM-T载体进行T-A克隆,通过限制性酶切分析及测序鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导XTP11剪切体融合蛋白的表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,考马斯亮蓝染色,以鼠His probe单克隆抗体进行Western blot分析鉴定证实表达蛋白的特异性,并纯化蛋白。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,构建了pET-32a(+)XTP11剪切体原核表达载体,经IPTG诱导获得了大小约为69kD的重组蛋白。结论发现的HBV XTP11剪切体及其融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 尹丽成军王琦李越林原
- 关键词:乙型肝炎病毒剪切体基因克隆原核表达