吴懿娜
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 草甘膦抗性基因的重组表达及ELISA检测方法的初步建立被引量：1
- 2010年
- 采用CTAB方法从转基因大豆中提取DNA,根据草甘膦抗性基因设计引物,利用PCR从大豆DNA中扩增获得特异性目的基因,将该基因片段连接至表达载体pET-30a(+)中,并转化感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达,对诱导剂浓度和诱导时间进行优化。利用纯化后的液体重组蛋白和SDS-PAGE切胶蛋白2种形式抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并利用ELISA对抗体效价进行测定。研究结果表明,利用PCR从转基因大豆DNA中扩增出长度为1529bp的草甘膦抗性基因片段,经过重组表达获得分子量为55ku的重组蛋白,IPTG的最佳诱导浓度为0.1mmol/L,最佳诱导时间为4h,亲和纯化后其浓度为5.0mg/mL;经免疫,2种形式抗原获得的多抗效价分别达到1∶2400000和1∶800000。
- 王硕董峰杜欣军张伟伟吴懿娜
- 关键词：草甘膦多克隆抗体
- 西维因单链抗体基因克隆、表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 利用兼并引物从西维因单克隆杂交瘤细胞的cDNA中克隆得到抗体基因的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH),长度分别为324bp和360bp,将其分别连接入pGEM-T-Easy载体进行测序;根据测序结果设计特异性引物和连接序列(Gly4Ser)3,利用重叠延伸PCR扩增得到长度为729bp的单链抗体基因片段(scFv),亚克隆至原核表达载体pET30a(+),并转化感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,重组表达单链抗体形成包涵体,分子量大小约为33kDa,变性后利用不同条件进行复性,结果显示最佳复性时间为48h,最佳起始蛋白浓度为200μg/mL,含有精氨酸的复性液效果最佳;利用亲和层析纯化scFv,并利用竞争ELISA检测其活性,结果显示该scFv对西维因具有良好的亲和性和特异性。
- 王俊平张伟伟杜欣军吴懿娜董峰王硕
- 关键词：西维因单链抗体克隆活性
- 噬菌体抗体库构建及西维因单链抗体的筛选
- 农药残留危害人体健康,因此对农药残留的检测逐渐成为研究的热点。ELISA方法是目前应用较普遍的检测手段,而抗体的制备是其中的关键部分。与传统的单抗和多抗相比,基因工程抗体具有多方面的优势。本研究以T7噬菌体为载体,分别构...
- 吴懿娜
- 关键词：噬菌体抗体库西维因酶联免疫吸附分析单链抗体
- 文献传递
- 西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选被引量：1
- 2012年
- 在计算机辅助下,设计并合成西维因半抗原,与载体蛋白KLH连接后免疫Balb/C小鼠,经过5次免疫后,最高效价和特异性抑制率分别达到254 000和26%;提取免疫后小鼠脾脏总RNA,纯化mRNA后反转录获得cDNA,利用设计的兼并引物获得长度约为400 bp的轻链可变区和重链可变区基因片段,重叠延伸后获得长度约为780 bp的单链抗体基因。经过EcoR I和HindⅢ酶切后,连入T7噬菌体臂,构建西维因特异性的抗体库,抗体库原始滴度为1.74×107pfu。以西维因-OVA为配体对抗体库进行淘选,经过4轮淘选后,利用直接ELISA对获得噬菌体克隆进行特异性检测,西维因对克隆A4-7和A4-16的抑制率分别达到54.1%和66.4%。经过序列测定,2个克隆的轻链可变区分别由108和112个氨基酸构成,重链可变区分别由117和112个氨基酸构成。
- 王硕刘昕煜吴懿娜杜欣军朱超张洁
- 关键词：西维因噬菌体展示
- 噬菌体抗体库技术及其应用被引量：8
- 2010年
- 吴懿娜杜欣军张伟伟董峰王硕
- 关键词：噬菌体展示抗体库小分子物质
- 牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的快速检测被引量：4
- 2009年
- 大肠杆菌和无乳链球菌是两种导致奶牛乳房炎的重要致病菌,这两种致病菌的检测有助于及时诊断和治疗奶牛乳房炎,从而有效控制牛奶质量。利用16S-23S rDNA间区作为检测靶点,建立牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的快速PCR检测方法,并对该检测方法的灵敏度和特异性进行了确认。结果显示,该方法对于牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的检出限均能够达到1cfu/mL,并且与其它7种对照菌株均无交叉反应,整个检测过程可在20h内完成。
- 杜欣军周文杰吴懿娜董峰穆蕊王硕
- 关键词：乳房炎大肠杆菌无乳链球菌PCR
