张晨晨
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- siRNA介导的佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的构建
- 目的 评价siRNA技术诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的可行性.方法 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1 a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试...
- 江晟陈飞虎荣超胡伟张晨晨葛金芳
- 胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K mRNA表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系。方法:Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞;细胞传代培养后分为4组分别在pH 7.4、pH 6.5、pH 6.0、pH 5.5不同的胞外酸化环境下培养3h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶K基因的表达。结果:与pH 7.4组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH 5.5、pH 6.0与pH 7.4相比差异有重要的统计学意义(P<0.01),pH5.5和pH 6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH 7.4组(P<0.01);组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关。结论:胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据。
- 荣超陈飞虎江晟胡伟葛金芳张晨晨吴繁荣
- 关键词：软骨细胞
- 酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究被引量：7
- 2013年
- 目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。
- 张晨晨唐杰胡伟葛金芳林梅英陈飞虎
- 关键词：自噬关节软骨细胞LC3ERK1
- 胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K的影响
- 目的 类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是伴有关节软骨破坏的自身免疫性疾病,由于炎症导致关节局部组织酸化,关节腔内滑液pH显著下降.组织蛋白酶K(cathepsin K)是一种酸性的蛋白内切酶...
- 荣超陈飞虎江晟胡伟张晨晨吴繁荣
- 鬼针草总黄酮提取工艺中试研究被引量：10
- 2012年
- 目的对鬼针草总黄酮提取工艺进行研究,确定生产工艺路线,并进行中试生产初步试验,为工业生产打下基础。方法先以70%乙醇提取,再通过HPD100大孔树脂吸附纯化,最后用乙醇进行纯化;以提取物中总黄酮和金丝桃苷含量为考察指标,考察鬼针草的提取工艺。结果确定鬼针草总黄酮制备工艺路线,制得鬼针草总黄酮(总黄酮含量>50%),平均产率为1%。结论该工艺稳定可行,适合于工业化大生产。
- 许慧陈飞虎邵旭汤文建刘建军张晨晨
- 关键词：鬼针草总黄酮中试大孔树脂
