张学峰
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 人突变CD59蛋白的提取纯化与单克隆抗体的制备
- 目的
建立转染人突变CD59(hmCD59)-pALTER-MAX重组质粒的CHO细胞模型;利用ANTI-FLAG M2亲和层析的方法提取纯化hmCD59重组蛋白：以纯化的hmCD59重组蛋白免疫Balb/c小...
- 张学峰
- 关键词：基因转染CHO细胞真核表达单克隆抗体血管并发症
- 文献传递
- 人突变CD59的真核表达、提取纯化及鉴定
- 目的:获得人突变CD59(hmCD59)蛋白。方法:将含有hmCD59全长序列的重组pALTER质粒,运用脂质体介导法,与pcDNA3质粒共转染CHO细胞,以G418筛选阳性克隆,以免疫荧光技术和SDS-PAGE检测hm...
- 高美华张学峰
- 关键词：纯化
- 文献传递
- 真核细胞人突变CD59的纯化及初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:获得人突变CD59(hmCD59)蛋白,为后续研究提供必要的材料。方法:运用脂质体介导法,将含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒与pcDNA3质粒共转染CHO细胞,以G418筛选阳性克隆,以免疫荧光技术和SDS-PAGE检测hmCD59的表达,表达产物经Anti-FLAGM2亲和凝胶纯化后,以SDS-PAGE、Western印迹和ELISA对纯化产物进行鉴定。结果:hmCD59蛋白在转染后的CHO细胞表面稳定表达。SDS-PAGE结果表明,纯化的hmCD59的相对分子质量同预期结果一致。Western印迹和ELISA证实,纯化的hmCD59蛋白具有与抗CD59抗体结合的活性。结论:获得了电泳纯的hmCD59蛋白,为进一步对其进行抗体制备、功能研究及临床应用奠定了基础。
- 张学峰高美华
- 关键词：真核细胞纯化
- 人突变CD59的表达、纯化及抗原性鉴定
- 2007年
- 目的获得纯化人突变CD59(hmCD59)蛋白,制备其特异性抗体,对纯化产物进行鉴定。方法将含有hmCD59全长序列的重组pALTER质粒,运用脂质体介导法转染CHO细胞,采用SDS-PAGE检测hmCD59的表达情况,表达产物经ANTI-FLAG M2 Affinity Gel纯化后制备抗血清,以此抗血清鉴定纯化产物。结果hm-CD59在CHO细胞获得表达,ANTI-FLAG M2 Affinity Gel纯化后可获得电泳纯的hmCD59蛋白,hmCD59与小鼠抗hmCD59抗血清具有特异性反应。结论从真核细胞获得了电泳纯并具有抗原性的hmCD59蛋白,为进一步对其进行抗体制备、功能研究及临床应用奠定了基础。
- 张学峰高美华
- 关键词：真核细胞表达纯化抗原性
